1、 ICS 65.020.20 CCS B 05 DB3705 东营市地方标准 DB 3705/T 112023 野大豆耐盐性鉴定技术规程 Technical code of practice for identification of salt tolerance in wild soybean 2023-10-26 发布2023-11-26 实施东营市市场监管管理局发 布 DB 3705/T 112023 I 目次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 .1 3.1 野大豆.1 3.2 耐盐性4 鉴定准备.1 培养容器的选择.1 4.1 野大豆种子的选择与处理
2、.1 4.2 盐溶液的制备.2 4.3 5 萌发期处理.2 播种.2 5.1 培养.2 5.2 性状调查.2 5.3 测定值计算.2 5.4 6 苗期处理.4 播种.4 6.1 培养.4 6.2 性状调查.4 6.3 测定值计算.4 6.4 7 耐盐性鉴定.5 种子萌发期耐盐性鉴定.5 7.1 苗期耐盐性鉴定.5 7.2 附录 A（资料性）Hoagland 营养液组分含量表.7 DB 3705/T 112023 II 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
3、本文件由东营市农业农村局提出、归口并组织实施。本文件起草单位：黄河三角洲农业高新技术产业示范区盐碱地综合利用服务中心、山东师范大学、山东师范大学东营研究院、东营市农业科学研究院、中国农业科学院烟草研究所、山东盐碱地现代农业有限责任公司、国家盐碱地综合利用技术创新中心。本文件主要起草人：陈敏、徐化凌、李义强、王菊英、宁凯、王宝山、徐宗昌、陈小芳、刘青、袁芳、赵婷婷、韩国良、郭建荣、范海、杨玲、陈娟、张彩霞、侯雪婷、李春鹏。DB 3705/T 112023 1 野大豆耐盐性鉴定技术规程 1 范围 本文件描述了野大豆萌发期和苗期耐盐性鉴定的鉴定前准备、萌发期和苗期处理、测定值计算、规定了耐盐性的分级
4、标准等。本文件适用于野大豆种质资源萌发期和苗期耐盐性鉴定。2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 野大豆 wild soybean 未经过人类选择和栽培的豆科大豆属一年生缠绕草本植物。注：学名为Glycine sonja Sieb.et Zucc.，抗性强，遗传品质好，是我国重要的种质资源，被列为我国国家二级重点保护野生植物，具有重要科学研究价值和利用价值。3.2 耐盐性 salt tolerance 植物在盐胁迫下其生长发育和产量形成对盐害的耐受能力。来源：NY/T3061-2016，3.34 鉴定准备培养容器的选择4.1 4.1.1
5、 萌发期容器的选择 选用13 cm13 cm的无菌培养皿。4.1.2 苗期容器的选择 选用直径19 cm、高13 cm的塑料培养盆（盆底有直径为1 cm的孔3个，用之前盆底铺好纱网），将用蒸馏水洗净、烘箱烘干的河沙1250 g装入培养盆作为培养床。野大豆种子的选择与处理4.2 4.2.1 种子选择 选择纯度高，发芽率整齐的当年野大豆种子。每份待测样品选取成熟饱满的种子600粒，置于干燥器中。4.2.2 种子处理 DB 3705/T 112023 2 1 g种子用10 mL 98%的浓硫酸浸泡15 min，并用去离子水冲洗3遍。播种前用1.0 g/mL的氯化汞溶液消毒10 min，无菌水清洗4次
6、，无菌滤纸吸干表面水分。盐溶液的制备4.3 配制浓度为0 mmol/L和200 mmol/L的NaCl溶液：分别称量0.00 g 和11.70 g NaCl（纯度99.50%），用1/5 Hoagland营养液（萌发期）或者Hoagland营养液（苗期）定容至1000 mL（Hoagland营养液配方见附录A），搅拌待充分溶解，溶液的pH值用1.0 mol/L的NaOH或者HCl调整到6.0 0.5。5 萌发期处理播种5.1 在无菌培养皿中铺2层滤纸，用4.3的溶液5 mL浸湿滤纸，将经过4.2处理的种子50粒均匀摆放在培养皿中，封口膜封口。对照为0 mmol/L NaCl，处理和对照均设3个
7、重复。培养 5.2 5.2.1 在光照培养箱中 28 暗培养 2 d，萌发后，转移至温室。5.2.2 温度为 28/23、相对湿度 80%、光源为白光，光照强度 750 lx1250 lx，每天光照时数 16 （光）/8 h（暗）。5.2.3 每 2 d 定时观察及更换同浓度溶液浸泡的滤纸。性状调查 5.3 培养第2 d开始，每天统计全部发芽粒数（胚根突破种皮 1.5 mm2 mm），用于计算发芽率、发芽势、发芽指数；萌发培养第7 d测量胚根长（种子下部到根顶端的长度）。测定值计算 5.4 5.4.1 发芽率(G)计算 按式（1）计算。式中：G发芽率，单位为百分号（%）；N7第7 d全部发芽种
8、子数，单位为粒；Ns供检种子数，单位为粒。5.4.2 发芽势（GF）计算 按式（2）计算。式中：GF发芽势，单位为百分号（%）；(1)(2)DB 3705/T 112023 3 S4第4 d全部发芽种子数，单位为粒；Ns供检种子数，单位为粒。5.4.3 发芽指数（GI）计算 按式（3）计算。式中：GI发芽指数；Gt处理后第t天的绝对发芽数，单位为粒；Dt相应的发芽天数，从培养的第2 d开始统计，至第7 d，单位为天（d）。5.4.4 相对发芽率(RG)计算 按式（4）计算。式中：RG相对发芽率；Gt盐处理发芽率，单位为百分号（%）；Gck对照发芽率，单位为百分号（%）。5.4.5 相对发芽势（
9、RGF）计算 按式（5）计算。式中：RGF相对发芽势；GFt盐处理发芽势，单位为百分号（%）；GFck对照发芽势，单位为百分号（%）。5.4.6 相对发芽指数（RGI）计算 按式（6）计算。式中：RGI相对发芽指数；GIt盐处理发芽指数；GIck对照发芽指数。5.4.7 相对胚根长（RRL）计算 按式（7）计算。(3)(4)(4)(5)(6)(7)DB 3705/T 112023 4 式中：RRL相对胚根长；RLt盐处理胚根长，单位为厘米（cm）；RLck对照胚根长，单位为厘米（cm）。6 苗期处理 播种 6.1 将经过4.2处理的种子30粒均匀摆放盛有干净河沙的培养盆，上层均匀地覆上1 cm
10、厚的河沙，浇250 mL去离子水。处理和对照均设3个重复。培养 6.2 培养盆放至温室，温室条件按5.2.2规定执行。每天每盆浇去离子水250 mL，发芽后（约4 d）每天浇Hoagland营养液250 mL继续生长直到第一片三出复叶完全展开（约15 d），此时进行盐处理，处理组每天每盆浇NaCl溶液250mL，对照组每天每盆浇Hoagland营养液250 mL。性状调查 6.3 处理第7 d测定主根长（种子下部到根顶端的长度）、主茎长（种子基部到幼苗顶端的长度），称量地上干生物量（河沙表面以上幼苗所有部分的干重）。测定值计算 6.4 6.4.1 相对主茎长（RMSL）计算 按式（8）计算。式
11、中：RMSL相对主茎长；MSLt盐处理主茎长，单位为厘米（cm）；MSLck对照主茎长，单位为厘米（cm）。6.4.2 相对主根长（RMRL）计算 按式（9）计算。式中：RMRL相对主根长；MRLt盐处理主根长，单位为厘米（cm）；MRLck对照主根长，单位为厘米（cm）。6.4.3 相对地上干重（RSDW）计算 按式（10）计算。(8)(9)DB 3705/T 112023 5 式中：RSDW相对地上干重；SDWt盐处理地上干重，单位为克（g）；SDWck对照地上干重，单位为克（g）。7 耐盐性鉴定 种子萌发期耐盐性鉴定 7.1 耐盐指数按式（11）进行计算：式中：STIg种子萌发期耐盐指数
12、；RG相对发芽率；RGI相对发芽指数；RGF相对发芽势；RRL相对胚根长。根据萌发期耐盐指数对野大豆种质进行耐盐性分级，见表 1。表1 野大豆萌发期耐盐性鉴定标准 耐盐级别，级萌发期耐盐指数（STIg）耐盐性10.80STIg高耐盐20.60STIg0.80中耐盐30.40STIg0.60低耐盐40.20STIg0.40敏感5STIg0.20高敏感苗期耐盐性鉴定 7.2 耐盐指数按式（12）进行计算：式中：STIs苗期耐盐指数；RMSL相对主茎长；RMRL相对主根长；RSDW相对地上干重。根据苗期耐盐指数对野大豆种质进行耐盐性分级，见表2。(10)(11)(12)DB 3705/T 112023 6 表2 野大豆萌发期耐盐性鉴定标准 耐盐级别，级苗期耐盐指数（STIs）耐盐性10.80STIs高耐盐20.60STIs0.80中耐盐30.40STIs0.60低耐盐40.20STIs0.40敏感5STIs0.20高敏感A A DB 3705/T 112023 7 附录A （资料性）Hoagland 营养液组分含量表 组分工作液浓度（mg/L）KNO3506NH4NO380KH2PO4136MgSO4241C10H12N2NaFe73.4KI1.66H3BO312.4MnSO444.6ZnSO417.2Na2MoO40.5CuSO40.05CoCl20.05Ca(NO3)2945
