1、 ICS 65.020.20 CCS B 15 2301 黑龙江省哈尔滨市地方标准 DB 2301/T 1022022 大豆胞囊 线虫生理 小种鉴定 技术规程 2022-07-18 发布 2022-08-17 实施 哈尔滨市 市场监 督 管理局 发 布 DB 2301/T 1022022 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.12020 标准 化工 作导则 第1 部分：标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 这些 专利的 责任。本文件 由哈尔 滨市 农业 农村 局 提出 并归 口。本文件 起草 单
2、位：中 国科 学院东 北地 理与 农业 生态 研究所 农业 技术 中心、哈 尔滨市 农业 技术 推广 总站。本文件 主要起 草人：许艳 丽、王 崇生、陆欣 春、严 君、潘 凤娟、宋洁、董丽 民、胡 岩峰、邹文 秀、陈旭、居瀚 寻。DB 2301/T 1022022 2 大豆胞囊 线虫生 理小种鉴 定技术 规程 1 范围 本文件 规定 了大 豆胞 囊线 虫（Heterodera glycines Ichinohe）温室 定量 接种 鉴定 方法，包括 土壤 和 蛭石准备、鉴 别寄 主准 备、接种物 制备、线 虫卵 或线 虫接种、调 查、鉴定 有效 性，及 鉴定 档案 的建 立。本文件 适用 于哈
3、尔滨 市行 政区内 大豆 种质 资源 和品 种对大 豆胞 囊线 虫生 理小 种的鉴 定与 评价。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。NY/T 3059 大豆 抗胞 囊线 虫鉴定 技术 规程。3 术语和 定义 NY/T 3059 界 定的 术语 和定义 适 用于 本文 件。4 接种前 准备 土壤和 蛭石 准备 采集没 有种 过豆 科植 物的 土壤，过 20 目
4、筛，与同 样 过筛后 的沙 子以 21 的比例 混 合成 沙土，121 湿热灭 菌 2 h 后，装入 直径 5 cm、高 20 cm 的无 底 塑料柱 中备 用。蛭石 也经 121 湿 热灭 菌 2 h。鉴别寄 主准 备 4.2.1 鉴别寄 主 大豆抗 胞囊 线虫 生理 小种 鉴别寄 主有 PI88788、PI90763、Peking、Pickett和感病 品 种 Lee。4.2.2 鉴别寄 主催 芽 将 5 个鉴 别寄 主的 大豆 种 子分别 置于 灭菌 蛭石 中催 芽。4.2.3 鉴别寄 主移 栽准 备 将 5 个塑 料柱 一起 放在 同 一个有 底塑 料桶 中，每个 塑料柱 中装 600
5、 g上述 混合的 灭 菌沙 土。4.2.4 鉴别寄 主移 栽 当鉴别 寄主 大豆 子叶 即将 展开时，选 根长 相同 的幼 苗移栽 于塑 料柱 中，每个 塑料桶 中的 5 个 塑料柱里分别 对应 5 个鉴 别寄 主 大豆，每个 塑料 柱栽植 1 株，每 个待 鉴定 大豆胞 囊 线虫样 本用 4个 桶，即 4 次重 复，将塑 料桶 放置 在日光 温 室内，随机 摆放，温 室 22 28、16 h 光 照条件。每 天正 常浇 水管 理。DB 2301/T 1022022 3 5 接种 接种物 制备 将待测样本 的胞囊置 于 200 目和 500 目套筛上，用 组织研磨器 将 200 目 筛上 的胞
6、囊进行 破壁研磨，或用橡 皮塞 在 200 目 筛上研 磨，释放 出胞 囊内 的卵，然后 用强 水流 冲洗 200 目筛上 物，同时 收集 500 目筛上的 卵，制备 成 150 粒/mL 的卵 或线 虫悬 液，4 保存备 用。线虫卵 或线 虫接 种 鉴别寄 主大 豆苗 移栽 3 d 后 接种大 豆胞 囊线 虫卵 或线 虫悬浮 液。采 用根 围接 种 法，每株 苗接 种10 mL线虫卵 悬浮 液（150 粒/mL），即 接种1500 粒 卵或 线虫/株。6 调查及 鉴定 有效 性 调查 接种线 虫 28 d 35 d 后，检 查 感病 寄主 品种Lee 根部大 豆 胞囊 线虫 发育 情况。当
7、大 豆胞 囊线 虫黄 白色雌虫 突出 根表 皮时，取 出所有 鉴别 寄主 大豆 苗，取全根 系，轻轻 抖掉 根上 土，调 查大 豆根 上大 豆 胞 囊线虫雌 虫的 数量，并 计算 雌虫指 数。试验 设置 4 次 重复。鉴定有 效性 判断 当1株 感病 寄主Lee 根上 附着 的 雌虫 大于 30 个时，结果 有 效，否则 无效。7 生理小 种确 定 生理小 种确 定根 据雌 虫指 数(FI)划 分。雌虫指 数(FI)按 公 式（1）计算。FI=100(1)式中：T 每株 鉴别 寄主 根上 雌 虫平均 数量；C 每株 感病 品种 Lee 上 的雌虫 平均 数量。雌虫指 数 FI 10 时为 感，
8、记 作“+”，10 时为 抗，记 作“-”。根据Riggs 等 生理 小种 划分 标 准鉴 定生 理小 种。见NY/T 3059 附录A。8 结果记 录和 报告 撰写 根据鉴 定结 果，撰写 鉴定 报 告，并 附原 始数 据。大豆 抗 胞囊线 虫生 理小 种鉴 定原 始记录 表见 表A.1，大豆抗 胞囊 线虫 生理 小种 鉴定结 果记 载表 见表A.2。9 鉴定档 案的 建立 DB 2301/T 1022022 4 应建立 鉴定 档案，内 容包 括土壤 样品 采集、接 种前 准备、接种、调查、生理 小种确 定、结果 记录 和报告撰 写及 鉴定 档案 的建 立。档 案保 存3 年 以上，建档 备
9、 查。DB 2301/T 1022022 5 A A 附录A（规范 性）大豆抗 胞囊 线虫 生理 小种 鉴定记 录表 A.1 大豆抗 胞囊 线虫 生理 小种 鉴定 原始 记录 表见表 A.1。表A.1 大豆抗 胞囊 线虫 生理 小种 鉴定原 始记 录表 鉴别寄 主 待鉴定线虫样品在鉴别寄主根系附着雌虫数（个/株）重复 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Peking I II III 平均 PI88788 I II III 平均 PI90763 I II III 平均 Pickett I II III 平均 Lee I II III 平均 注1：鉴定地点 注2：接种生理小种编号 来源 注3：接种日期 调 查日期 鉴定技 术负 责人（签 字）：DB 2301/T 1022022 6 A.2 大豆抗 胞囊 线虫 生理 小种 鉴定结 果记 载表 见表 A.2。表A.2 大豆抗 胞囊 线虫 生理 小种 鉴定结 果记 载表 样品号 Peking PI88788 PI90763 Pickett Lee 胞囊 数目（个/株）生理小种 胞囊 数目（个/株）雌虫 指数 胞囊 数目（个/株）雌虫 指数 胞囊 数目（个/株）雌虫 指数 胞囊 数目（个/株）雌虫 指数 1 2 3 4 5
