1、 ICS 65.020.01 CCS B 10 2301 黑龙江省哈尔滨市地方标准 DB 2301/T 1042022 大豆根瘤 菌固氮能 力与共生 匹配性评 价 技术规程 2022-07-18 发布 2022-08-17 实施 哈尔滨市 市场监 督 管理局 发 布 DB 2301/T 1042022 I 前 言 本文件 按照 GB/T 1.12020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本文件 由哈尔 滨市 农业 农村 局 提出 并归 口。
2、本文件 起草 单位：中 国科 学院东 北地 理与 农业 生态 研究所 农业 技术 中心、哈 尔滨市 农业 技术 推广 总站。本文件 主要 起草 人：严君、王崇 生、邹文 秀、陆欣 春、陈 旭、许艳 丽、居瀚 寻、韩 阳。DB 2301/T 1042022 1 大豆根瘤 菌固氮 能力与共 生匹配 性评价技 术规程 1 范围 本文件 规定 了大 豆根 瘤菌 固氮能 力和 共生 匹配 性评 价的术 语和 定义，盆 栽试 验实施 及评 价原 则，田间试验 管理 及评 价原 则和 生产档 案。本文件 适用 于哈 尔滨 市行 政区内 大豆 种植 区大 豆根 瘤菌固 氮能 力和 共生 匹配 性评价。2 规范
3、性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB/T 9823 粮油 检验 植物 油 料饼 粕总 含氮 量的 测定 GB 20287 农 用微 生物 菌剂 NY 410 根瘤 菌肥 料 NY/T 1535 肥料 合理 施用准 则 微 生物 肥料 NY/T 1536 微 生物 肥料 田 间试验 技术 规程 及肥 效评 价指南 NY/T 1735 根瘤 菌生 产菌株 质 量评
4、价技 术规 范 DB2301/T 93 高 效大 豆根瘤 菌 菌株 筛选 技术 规程 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。根瘤菌 共生 固氮 能力 根瘤菌 通过 与豆 科作 物共 生结瘤，将 空气 中的 氮气 转化为 豆科 植物 可吸 收利 用的氨 的能 力。共生匹 配性 在大豆 根系 上形 成具 有固 氮能力 的有 效根 瘤。参比菌 株 已被认 可并 广泛 使用 的根 瘤菌生 产菌 株，作为 根瘤 菌生产 质量 控制 的参 照标 准。4 盆栽试 验 试验准 备 基质选 用蛭 石。蛭石 过 100 目 筛，去除 大的 颗粒 和杂物，121 条 件下 间歇 性灭菌 2 次，每
5、次 1 h，然后将 灭菌 后的 蛭石 置于 阴凉通 风处 2 d 3 d 备用。盆钵 用 5%氯酸 钠或 0.1%高 锰酸 钾溶 液消 毒后用无菌 水冲洗 2 次 3 次，将灭 菌后的蛭石装 入盆钵中，浇适量无菌水 备用。用无 菌的蒸馏水将 参比菌株和 待测菌株，分别制备成菌 体数量1.0109 cfu/mL的接 种液，接种 液制备应按 照NY/T 1735的规 定DB 2301/T 1042022 2 执行。选择当地主 栽大豆品种。大豆种子表 面消毒后备 用，大豆种子 表面灭菌应 按照DB2301/T 93 的规定执行。试验实 施 设置不 接种、接种 参比 菌 株和接 种待 测菌 株处 理。
6、不接种 处理：将已 表面 消 毒的大 豆种 子播 种于 灭菌 后 的蛭 石中，作为 空白对 照。接种 参比 菌株 处理：将 已 表面 消毒 的大 豆种 子在 参 比菌 株接 种液 中浸 泡 1 min 2 min 后，移植到灭菌 后的蛭石 中。接种待测菌 株处理：操作方法与接种 参比菌株 处理相同。每个处理 5 个重复。接种 后每粒大 豆种子 上至少含 有根瘤菌：小粒 种子 103 个，大粒 种子 105 个，根瘤菌活菌 菌落 计数 应按 照 NY 410 的规 定执 行。大豆 在昼温/夜温=25/20 下培养，叶面 光照 强度 7 000 lx 8 000 lx，每天 光照 12 h。每 盆
7、定 植 1 株 2 株 大豆。结瘤情 况调 查 于 大 豆初 花期，将大 豆连根 取 出后 用清 水洗 净，观察 根 系结 瘤情 况和 根瘤 菌的 有 效性。凡是 肉眼 可见的根 瘤为 结瘤，使 用刀 片将较 大的 根瘤 切开，若 根瘤内 部为 粉红 色、红色 或褐色 为有 效瘤，白 色 或 绿色为无 效瘤。植株含 氮量 测定 在完成4.3 的 同时，分别 取 不接种、接种 参比 菌株和 接种待 测菌株 处理 下的大 豆地上 部分（即子 叶痕以上），于 105 杀青 5 min 10 min，再在 80 下烘干至恒重，测 定每 盆大豆地上植株干 重和含氮量。计算 植株 总含 氮量 和待测 接种
8、 菌株 处理 较不 接种处 理植 株总 氮量 的增 加量。植株 含氮 量测 定 应 按照GB/T 9823中的 规定 执行，植 株含 氮量 计算 应符 合NY/T 1735中的 规定。盆栽试 验评 价原 则 接种待 测菌 株处 理与 不接 种处理 相比，收获 大豆 植 株总氮 量增 加20%以 上，统计 检 验达 到显 著水 平。总含氮 量的 增加 量计 算应 符合NY/T 1735 中 的规 定。5 田间试 验 试验设 计 试验设 计应 符合NY/T 1536 的规定。试验准 备 试验地处理应符合NY/T 1536 的规定，按试验设 计准 备所需的根瘤菌接种 液的 质量应符合GB 20287
9、中的规 定，大豆 品种 为当 地主栽 大豆 品种。试验实 施和 田间 管理 试验实 施、田间 管理 和计 产等工 作，应按 照NY/T 1535 和NY/T 1536 的 规定 执行。田间试 验评 价原 则 接种待 测根 瘤菌 菌株 处理 与不接 种处 理产 量相 比，籽粒产 量增 加10%以 上，统计 检 验达 到显 著水 平；接种待测 根瘤菌菌株处理与接种参 比菌株处理相比，籽粒产 量增加5%以 上，统计检验 达到显著水平。计算方 法应 符合NY/T 1735 中的规 定。DB 2301/T 1042022 3 6 生产档 案 应建立 生产 档案，内 容包 括：盆 栽试 验和 田间 试验 准备、实施 和评 价原 则等。档案 保存 至少3年。
