1、 ICS 65.CCS B 3贵Techn2022-020 30 州板栗ical Regu-06-23发州栗印度ulation f发布 贵省度块菌for ProduMycor贵州省市场地 菌菌根uction ofrrhizal 场监督管理方根苗培f CastaneSeedling理局 发方DB育技术a mollisgs 发 布 52标B52/T 167术规程sima-Tub2022-12 准772022程 ber indic10-01实准 2 cum 实施DB52/T 16772022 I 目次 前言.II 引言.III 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 培育无外生
2、菌根菌幼苗.2 5 接种前准备.3 6 接种.4 7 接种后管理.4 8 病虫害防治.4 9 检验.4 DB52/T 16772022 II 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由贵州省生物研究所提出。本文件由贵州省农业农村厅归口。本文件起草单位：贵州省生物研究所、贵州科学院、中国科学院昆明植物研究所、贵州省植物园、贵州省植保植检站、贵州中科易农科技集团有限公司。本文件主要起草人：杨彝华、李鹏、曾维军、王晶、王万坤、康超、蒋影、和耀威、刘忠玄、孔轲、杨玲、郑旋、罗丽平、向准、于富强、赵光程。DB52/T 16772022
3、 III 引言 板栗是块菌的共生树种，块菌隶属于子囊菌门(Ascomycota)块菌目(Tubrales)块菌科(Tuberaceae)块菌属(Tuber），国内市场商品块菌基本来源于野生资源，由于块菌生长的特殊性和不正确的采挖方式对天然菌塘及其生态环境造成严重破坏，块菌产量急剧下降，已远远不能满足市场需求。实验研究中得到一套完整的培育板栗-印度（中国）块菌菌根苗技术，菌根苗造林5年7年后板栗树挂果，地下块菌子实体形成，同期可获得地上的板栗和地下的块菌收益。标准化培育优质菌根苗，既增强板栗苗木抗逆性，进行植树种菌，在发展板栗产业的同时又发展了块菌产业，立体培育森林经济，增加单位面积收益。1 范
4、围本文质量等要本文2 规范下列仅该日期文件。DB53 术语下列 3.1 板栗在植栗属（Ca形，果皮丰富，是 3.2 印度真菌实体生于色；表面褐色、黑或不规则面有离散 3.3 宿主为菌 文件规定了板要求。文件适用于板性引用文件 列文件中的内期对应的版本2/T 294-200和定义 列术语和定义栗 castanea 植物分类学上Castanea）落皮红褐色、灰是我国记载最度块菌 tuber菌分类学中隶于地表下，球有明显的金字黑褐色或黑色则形，无色，散的刺。子实主 host 菌根真菌提供板栗板栗印度块菌板栗印度块菌内容通过文中本适用于本文07 主要造林义适用于本文mollissima上隶属于双子落叶
5、乔木或灌灰褐色至深褐最早的著名食r indicum 隶属于子囊菌球形、近球形字塔形或多角色，由无色薄常无柄；子实体成熟时营供依附和形成栗印度块菌菌菌根苗培育菌菌根苗的培中的规范性引文件；不注日林树种苗木质文件。a 子叶植物纲（D灌木，成熟果实褐色，长1.8 c食用坚果之一菌门(Ascomy形、椭圆形或不角形尖顶瘤突薄壁的交织菌子囊孢子14.3营养丰富，有成共生关系的 菌菌根苗育、接种前准备培育及检验。引用而构成本期的引用文件质量等级 Dicotyledon实两侧为平面cm3.5 cm，一。板栗作为ycota)块菌目不规则性块状突；产孢组织丝组成；有3 um 45 um有特殊芳香气的植物体。苗培
6、育技备、接种、接 文件必不可少件，其最新版neae）山毛榉面形，或内侧宽1.0 cm块菌的共生宿(Tubrales)块状，幼时紫红织幼时白色或白色、分枝、12 um 40 um味，与宿主共术规程 种后管理、病少的条款。其版本（包括所榉目（Fagale侧平面性、外2.5 cm，高1宿主，根部形块菌科(Tubera红褐色，成熟灰白色，随着迷路状细菌m，深褐色，共生。DB52/T 病害防治、检其中，注日期的所有的修改单es）壳斗科（外侧为半圆形1.5 cm3 cm形成菌根。aceae)块菌属熟后紫褐色、着成熟逐渐变菌脉。子囊球卵圆形、长167720221 检验与判断、的引用文件，单）适用于本（Fag
7、aceae）形，或呈近圆m。果实营养属(Tuber)，子黑褐色或黑变为黄褐色、球形、椭圆形长椭圆形，表2 本圆养子黑形表DB52/T 1672 3.4 外生菌菌根真之间延伸生菌套(mantl 3.5 菌根性外生菌 3.6 无外生相对于主树种形成 3.7 孢种液指用成 3.8 菌根苗块菌与 3.9 单株菌单株菌 3.10 炼苗 h在专用锻炼，提高4 培育无外种子保 4.1 4.1.1 印度4.1.2 带湿0 6 低772022 菌根 ectomyc真菌菌丝体侵生长并不穿透le)，同时侵性食用菌 edi菌根真菌与植生菌根菌幼苗于全无菌洁净成共生关系的液 spore flu成熟块菌子实苗 mycor
8、rhiz与板栗共培育菌根率 mycor菌根苗中，培hardening-s用温室（棚）培高其抗逆性，外生菌根菌幼保存 度块菌菌种保湿润泥土或洗低温保存3orrhizae 染宿主植物透到细胞内部入到根的皮层ble mycorrh植物根系建立共 ectomycor空间而言，在大型真菌孢子id 体组织研磨得al seedling形成的菌根苗rhizal rate育形成的菌根eedling 培育的菌根苗使其适应野外幼苗 保存：成熟的洗净泥沙晾30 d。尚未木栓化的，而形成的一层组织细胞间hizal fungi共生关系后，rhizal-free在包含空间、子（菌种）的得到的孢子悬g 苗。e per pla
9、nt根量占菌根苗苗木，先采取外环境条件，的印度块菌子至子实体表的营养根，并一种共生结构间形成哈氏网i，能产生人类e seedling、容器、基质的育苗环境里悬浮液。t 苗全部根系的取适当控温、，刺激菌根活子实体。表面无水渍装并且菌根真菌构。主要特征网(Hartig n类可食用的子 质、树种、水里，培育出的的百分比。控水措施，活力，缩短缓装入自封袋，菌菌丝体仅在植征是菌丝在植物et)。子实体的大型水等在内的必的根系没有共再将幼苗移缓苗时间的过用手排除空植物根的皮层物营养幼根表型真菌的统称须条件中没有共生菌根的幼移至室外，对幼过程。空气或抽真空层细胞壁表面形成称。有能与宿幼苗。幼苗强行空后置于4.
10、1.3 4.1.4 层种子覆育 4.2 在专（棚）外苗床床面基 4.3 育苗装袋，在育 4.4 用5种 4.5 板栗min消毒培 4.6 播种有3条5 接种制 5.1 印度用无菌小配 5.2 搅拌搅拌机，水配制成保存，5配 5.3 将准 板栗种子保存无菌水清洗后覆一层沙进行苗设施 专用育苗温室外顶应有可开面150cm180质准备 苗基质草炭：在121、1苗盘及盆钵消高锰酸钾溶子消毒及播种栗种子用无菌，捞起用无菌育无外生菌根种后的容器置5条侧根，无前准备 种用块菌子实度块菌成熟子小刀削去子实制孢种原液 拌机用75%酒精加入无菌水成浓度为10%d内用完。制接种基质 准备好的基质存：选择新鲜后用浓度
11、为行层积贮储。室或大棚培育开关的遮光率0cm；育苗床珍珠岩：河沙10 kPa的高温消毒 溶液浸泡2 h种 菌水选法除去菌水洗净药液根菌幼苗 置于温室（棚无外生菌根菌实体消毒 子实体于常温实体表皮，切精擦拭后，用水400 mL50的孢种原液质加入无菌水鲜、成熟、饱5的高锰酸 育菌根苗，育率80%的遮阳床床面距地面沙（或山砂）按温高压下灭菌h，取出后用去泥沙和霉烂液，播入消毒棚）中培育60菌幼苗达到接温室内，洗净切成约1 cm用无菌水冲洗00 mL，搅拌机，装入已灭菌水拌均匀，用石饱满，无虫蛀酸钾溶液浸泡育苗室（棚）门阳网，内应有面60cm高。按体积比6:3菌2 h后冷却到无菌水洗去浸烂种子后放入
12、毒后盆钵或育0 d150 d，幼接种要求。净表面，置于1 cm小方块。洗，反复3次机8000 rpm/菌的瓶中密封石灰或Ca(OH蛀板栗。泡种子 10 min门、窗应具有有可开关的保 3:1混合，加入到室温待用。浸泡液。入30%双氧水中育苗盘中，表幼苗长至3片于75酒精中。，每次称取切/min19000封，宜随制随H)2将pH值调到n，进行表面有防虫网，有保温膜；有空入无菌水拌均 中3 min5 mi表面覆土2cm片5片真叶，中3 s5 s,用切成小块的子rpm/min粉碎随用或容器密到pH6.5pHDB52/T 面消毒，采用有顶窗通风条空中喷灌设施均匀，含水率in或洁尔灭中3cm，用无主根系
13、长度用滤纸吸干表子实体65 g放碎10 s30 s密封置于0 H7.5，含水率167720223 用灭菌沙，一条件；育苗室施，喷头距育率25%30%，中30 min40无菌水浇灌。度5 cm或拥表面的酒精，放入准备好的s，加入无菌4 低温率25%30%。2 一室育0 拥的菌温 DB52/T 1674 6 接种 配制接 6.1 将制备接种 6.2 板栗无装入底径植于容器中7 接种后管水 7.1 培养初目测有菌根温度 7.2 室内温湿度 7.3 室内相8 病虫害防菌根苗9 检验 抽样 9.1 9.1.1 采取 772022 接种用孢种液备的10%孢种原无外生菌根菌8.5 cm、口径中，覆土，土管理
14、 初期应用无菌根形成,浇灌的温度最适20 相对湿度最适防治 苗初发白粉病取随机抽样方苗5010010050001000500液 原液用冷却无幼苗根部置于径10 cm、层距容器口2水浇灌，保持的水即可换为25，夏适60%70%。时，用0.5 m方法，用 DB5苗木株数 001000 0110000 0150000 01100000 01500000 001及以上 无菌水稀释到于稀释的孢种高度18 cm2 cm3 cm，持基质湿润，为洁净自来水夏季控温32mol/L浓度石52/T 294-20表1 苗到1%3%，pH种液中没过茎m容器，基质定根水浇无，基质湿度最水至棚外炼苗2；冬季控石灰水喷洒有0
15、07 4.1.2 方苗木检测抽样H值调到pH6.茎基部，浸泡质总量占容器无菌水，置于最适25%28苗。控温1。病植株或移除方法，按表 1样数量 5pH7.5,置泡15 min25器的1/22/3于育苗温室内%；接种培养 除病株。规则抽样。检测株数 50 100 250 350 500 750 置于敞口容器5 min；配制好，孢种液浸根培养。养30d70d随器。好的基质根的苗木随机抽检，抽 9.2 9.2.1 9.2.2 月4 月9.2.3 移栽定植检 9.3 9.3.1 20 倍接孢种，9.3.2 态结构。9.3.3 除、废弃9.3.4 如下：a)b)c)d)检时间 第一次抽检第二次抽检月或7
16、月8 月第三次抽检植。测方法与判断随机抽检：育手持放大镜观污染的则移镜检：每隔 分子检测：剪弃。菌根率计算制作计数板单株菌根计的小段，均的计数板上计算菌根率根据（1）单：苗木接种后：接种后 12月两个时间段：定植前的抽断 育苗期间不定观察菌根的发移除、废弃。30d60d 随剪切镜检合格：菌根苗接种板：计数板上计数：洗净根均匀散入装有上，分别计数率：取 3 次计式和（2）式单株菌根率=后 30d60d20d180d，段进行第二次抽检，检验菌定期随机抽检发育形态正常 随机抽取菌根格菌根苗的菌种 12 个月后上的小方格，根系，去除根有 1/2 清水作数有颜色的小方计数平均值。式计算一下单单株菌根单株
17、菌根量开始进行检检验菌根量次接种。菌根发育情况检，目测带土常、无污染，苗，取菌根切菌根，进行 D炼苗，炼苗期随机选 1/4根上附着的全作为分散剂的方格内的菌根 单株菌根量和根量=单株计数量/（单株菌根检查，感染其他量的多少，菌根况，菌根发育土苗木生长到放回容器继切片显微镜检DNA 检测，序期间采用随机染深颜色，全部基质（避的透明容器内根数量和苗根和单株菌根率数平均值4根量+单株非他杂菌应立即根率40%或良好，菌根率到基质表面的继续培育；无检测菌根，切序列比对，有机区组计数法免损坏菌根）内。容器放置根数量，更换4 菌根量）DB52/T 即移除。或无菌根的应率40%的菌的根部，有菌无菌根形成或切片应具有块有污染和非块法计算菌根率），将根剪成置于与底部内换不同计数板 100%167720225 应在第二年 2菌根苗可野外菌根时，再用或菌根量少补块菌菌根的形块菌菌根的移率。计算方法成长度 1 cm内径同等大小板计数 3 次。(1)(2)2 2外补形移法m小 DB52/T 1677-2022
