1、43湖南省地方标准ICSCCS 65.120B 46DB43/T2347 2022 发 布 湖南省市场监督管理局 2022-05 发 布-06 2022-08 实 施-06饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇快速检测超导量点免疫荧光法Detection of deoxynivalenol in feedRapid quantitative method of superconducting dotsimmunofluorescence techniqueDB43/T 23472022 I 目 次 前言 1 范围 1 2 规 范性 引用 文件 1 3 术 语和 定义 1 4 原理 1 5 试 剂与 材料 1
2、 6 仪 器与 设备 1 7 样 品制 备 2 8 样 品测 定 2 9 注 意事 项 2 10 结 果表 述 2 11 重 复性 3 附录A（规 范性）超导 量点免 疫荧 光快 速定 量检 测卡性 能要 求及 评价 4 DB43/T 23472022 II DB43/T 23472022 III 前 言 本文件 按 照 GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第 1 部 分：标准 化文 件的 结 构和起 草规 则 的规定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本文件 由湖 南省 农业 农村 厅提出。本文件 由湖 南
3、省 农业 标准 化技术 委员 会归 口。本文件 起草 单位：湖 南省 饲料工 业协 会、湖南 普菲 克生物 科技 有限 公司、湖 南省兽 药饲 料监 察所、湖南喜 来高 动物 保健 品有 限公司、湖 南绿 亨世 源动 物药业 有限 公司、湖 南中 科基因 技术 有限 公司。本 文件主 要起草人：黄 勇、李 艳 平、李 裕、周 宇 骏、张 敏、刘 亚 力、胡 春 灿、苗 超、邹 建 曾、蒋岳华。DB43/T 23472022 IV DB43/T 23472022 1 饲料中脱 氧雪腐 镰刀菌烯 醇快速 检测 超 导量点 免疫荧光 法 1 范围 本文件 规定 了饲 料中 脱氧 雪腐镰 刀菌 烯醇
4、的超 导量 点免疫 荧 光 快速 定量 检测 方法。本文件适用于植物性饲料原料、配合饲料、浓缩饲料、精料补充料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的快 速检测。2 规 范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动 物饲 料 试样的 制备 3 术 语和 定义 本文件
5、 没有 需要 界定 的术 语和定 义。4 原理 本方法 基于 超导 量点 标记 的抗原 抗体 反应，采 用荧 光侧向 免疫 层析 原理。试 样提取 液中 的脱 氧雪 腐镰 刀 菌烯 醇 与检 测 卡上 标记 的 抗体 相 结合 并 发出 荧光，荧光 强 度与 试 样中 脱氧 雪 腐镰 刀 菌烯 醇 含量 相关。层析 结束 后，用免 疫 荧光分 析仪 测定 检测 卡上 的检测 线和 控制 线的 荧光 强度，仪 器根 据内 置标 准 曲线自动 算出 试样 中脱 氧雪 腐镰刀 菌烯 醇的 含量。5 试 剂与 材料 5.1 试剂 均为 分析 纯，实 验室用 水应 符 合GB/T 6682 中三 级水
6、的要 求。5.2 稀释 缓冲 液：使 用超 导量点 免疫 荧光 定量 检测 卡配套 的稀 释缓 冲液，或 根据产 品使 用说 明书 配 制。5.3 提取 液：三级 水。5.4 检测 卡：性能 指标 应 符合附 录 A 要求。5.5 滤纸：采 用中 速定 量 滤纸。6 仪 器与 设备 6.1 天平：感 量0.01 g。6.2 小型 粉碎 机。DB43/T 23472022 2 6.3 分子 筛：20 目。6.4 离心 机：转速 4000 r/min。6.5 涡旋 振荡 器。6.6 免疫 荧光 分析 仪：可 测定并 显示 检测 卡的 测定 结果。6.7 计时 器。7 样 品制 备 7.1 采样 按
7、 GB/T 14699.1 的 规定 执 行。7.2 样品 处理 7.2.1 取 有代 表性 的样 品 约500 g，用小 型粉 碎机 粉碎至 全部 通 过20 目 分 析 筛，混 合应 均匀。7.2.2 称取 5 g（精确 至0.01 g）试 样 于 50 mL 离 心管中，加 入 25.0 mL 提 取液，用涡 旋振 荡器 振荡5 min；静置 后用 滤纸 过滤，或 取 1.0 mL 1.5 mL 混 合液于 离心 管中，经 离心 机以4000 r/min 离心3 5 min。取 滤液 或离 心后 的 上清液 100 L 于另 一离 心管中，加 入 100 L 三级 水混匀，再 加入 20
8、0 L稀释缓 冲液，充 分混 匀待 测。8 样 品测 定 8.1 开启 免疫 荧光 分析 仪。8.2 将超 导量 点免 疫荧 光 定量检 测卡 取出，加 样孔 朝上平 放。8.3 准确 移取75 L 待 测液（见 7.2.2），加入 检 测卡加 样孔 中。8.4 检测 卡加 样后，水 平 静置 15 min 反应，然 后 在3 min 内将 检测 卡插 入免 疫 荧光分 析仪，仪 器将 自动进行 检测。8.5 免 疫荧 光分析 仪完 成 数据读 取、分 析，免疫荧 光分析 仪自动 显示 试样中 脱氧雪 腐镰刀 菌烯 醇的含量并保 存检 测结 果。8.6 若免 疫荧 光分 析仪 的 显示值 25
9、00 g/kg，需 移取 100 L 待 测液（见 7.2.2），加 入 300 L提取液，充分 混匀 后取100 L 至另 一离 心管 中，加 入100 L 三级 水混 匀，再加 入200 L 稀释 缓冲液，充 分混 匀，按照8.2 8.5 进 行测 定，若显 示值 仍 2500 g/kg，则 按8.6 重复测 定，直至 显示 值2500 g/kg。8.7 本方 法检 出限 为50 g/kg。9 注 意事 项 不同厂 家超 导量 点免 疫荧 光定量 检测 卡及 免疫 荧光 分析仪 的使 用方 法可 能不 同，应 按照 产品 使用 说明中规 定的 方法 进行 操作。10 结 果表 述 试样中
10、脱氧 雪腐 镰刀 菌烯 醇的含 量由 免疫 荧光 分析 仪自动 计算 并显 示，单位 为g/kg。DB43/T 23472022 3 11 重 复性 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的相 对偏 差不应 超 过10。DB43/T 23472022 4 附 录 A（规范 性）超导量 点免 疫荧 光快 速定 量检测 卡性 能要 求及 评价 A.1 准确 性 采用500 g/kg、1000 g/kg 和3000 g/kg 3 个 浓度水 平的 脱氧 雪腐 镰刀 菌烯醇 实物 标准 样品，每个浓 度平 行测 定不 低 于6 次。计算 检测 卡检 测结 果 与实物 标准 样品 的相 对
11、偏 差，3 个浓 度的 相对 偏差均应控 制在-10+10 之间。A.2 精密 度 采用1000 g/kg 脱 氧雪 腐镰刀 菌烯 醇的 实物 标准 样品，平行 测定 不低 于 6 次，计 算检 测卡 批内 变异系数，变 异系 数应 10。A.3 批间 稳定 性 采用1000 g/kg 脱 氧雪 腐镰刀 菌烯 醇的 实物 标准 样品，随机 选取 至少6 个 批次产 品，每个 批次 产品测定 不低 于 2 次，批内 测定取 其平 均值，计 算检 测卡批 间变 异系 数，变异 系数应 10。A.4 批内 稳定 性 采用1000 g/kg 脱 氧雪 腐镰刀 菌烯 醇的 实物 标准 样品，随机 选取1 个 批次 产品测 定，平行 测定 不低于 6 次，计算 检测 卡批 内变异 系数，变 异系 数应 10。
