1、43湖南省地方标准ICSCCS 65.120B 46DB43/T2347 2022 发 布 湖南省市场监督管理局 2022-05 发 布-06 2022-08 实 施-06饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇快速检测超导量点免疫荧光法Detection of deoxynivalenol in feedRapid quantitative method of superconducting dotsimmunofluorescence techniqueDB43/T 23472022 I 目 次 前言 1 范围 1 2 规 范性 引用 文件 1 3 术 语和 定义 1 4 原理 1 5 试 剂与 材料 1
2、 6 仪 器与 设备 1 7 样 品制 备 2 8 样 品测 定 2 9 注 意事 项 2 10 结 果表 述 2 11 重 复性 3 附录A(规 范性)超导 量点免 疫荧 光快 速定 量检 测卡性 能要 求及 评价 4 DB43/T 23472022 II DB43/T 23472022 III 前 言 本文件 按 照 GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第 1 部 分:标准 化文 件的 结 构和起 草规 则 的规定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本文件 由湖 南省 农业 农村 厅提出。本文件 由湖 南
3、省 农业 标准 化技术 委员 会归 口。本文件 起草 单位:湖 南省 饲料工 业协 会、湖南 普菲 克生物 科技 有限 公司、湖 南省兽 药饲 料监 察所、湖南喜 来高 动物 保健 品有 限公司、湖 南绿 亨世 源动 物药业 有限 公司、湖 南中 科基因 技术 有限 公司。本 文件主 要起草人:黄 勇、李 艳 平、李 裕、周 宇 骏、张 敏、刘 亚 力、胡 春 灿、苗 超、邹 建 曾、蒋岳华。DB43/T 23472022 IV DB43/T 23472022 1 饲料中脱 氧雪腐 镰刀菌烯 醇快速 检测 超 导量点 免疫荧光 法 1 范围 本文件 规定 了饲 料中 脱氧 雪腐镰 刀菌 烯醇
4、的超 导量 点免疫 荧 光 快速 定量 检测 方法。本文件适用于植物性饲料原料、配合饲料、浓缩饲料、精料补充料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的快 速检测。2 规 范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中,注日 期的 引用 文件,仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件;不注 日期 的引 用文件,其 最新 版本(包 括所有 的修 改单)适 用 于 本文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动 物饲 料 试样的 制备 3 术 语和 定义 本文件
5、 没有 需要 界定 的术 语和定 义。4 原理 本方法 基于 超导 量点 标记 的抗原 抗体 反应,采 用荧 光侧向 免疫 层析 原理。试 样提取 液中 的脱 氧雪 腐镰 刀 菌烯 醇 与检 测 卡上 标记 的 抗体 相 结合 并 发出 荧光,荧光 强 度与 试 样中 脱氧 雪 腐镰 刀 菌烯 醇 含量 相关。层析 结束 后,用免 疫 荧光分 析仪 测定 检测 卡上 的检测 线和 控制 线的 荧光 强度,仪 器根 据内 置标 准 曲线自动 算出 试样 中脱 氧雪 腐镰刀 菌烯 醇的 含量。5 试 剂与 材料 5.1 试剂 均为 分析 纯,实 验室用 水应 符 合GB/T 6682 中三 级水
6、的要 求。5.2 稀释 缓冲 液:使 用超 导量点 免疫 荧光 定量 检测 卡配套 的稀 释缓 冲液,或 根据产 品使 用说 明书 配 制。5.3 提取 液:三级 水。5.4 检测 卡:性能 指标 应 符合附 录 A 要求。5.5 滤纸:采 用中 速定 量 滤纸。6 仪 器与 设备 6.1 天平:感 量0.01 g。6.2 小型 粉碎 机。DB43/T 23472022 2 6.3 分子 筛:20 目。6.4 离心 机:转速 4000 r/min。6.5 涡旋 振荡 器。6.6 免疫 荧光 分析 仪:可 测定并 显示 检测 卡的 测定 结果。6.7 计时 器。7 样 品制 备 7.1 采样 按
7、 GB/T 14699.1 的 规定 执 行。7.2 样品 处理 7.2.1 取 有代 表性 的样 品 约500 g,用小 型粉 碎机 粉碎至 全部 通 过20 目 分 析 筛,混 合应 均匀。7.2.2 称取 5 g(精确 至0.01 g)试 样 于 50 mL 离 心管中,加 入 25.0 mL 提 取液,用涡 旋振 荡器 振荡5 min;静置 后用 滤纸 过滤,或 取 1.0 mL 1.5 mL 混 合液于 离心 管中,经 离心 机以4000 r/min 离心3 5 min。取 滤液 或离 心后 的 上清液 100 L 于另 一离 心管中,加 入 100 L 三级 水混匀,再 加入 20
8、0 L稀释缓 冲液,充 分混 匀待 测。8 样 品测 定 8.1 开启 免疫 荧光 分析 仪。8.2 将超 导量 点免 疫荧 光 定量检 测卡 取出,加 样孔 朝上平 放。8.3 准确 移取75 L 待 测液(见 7.2.2),加入 检 测卡加 样孔 中。8.4 检测 卡加 样后,水 平 静置 15 min 反应,然 后 在3 min 内将 检测 卡插 入免 疫 荧光分 析仪,仪 器将 自动进行 检测。8.5 免 疫荧 光分析 仪完 成 数据读 取、分 析,免疫荧 光分析 仪自动 显示 试样中 脱氧雪 腐镰刀 菌烯 醇的含量并保 存检 测结 果。8.6 若免 疫荧 光分 析仪 的 显示值 25
9、00 g/kg,需 移取 100 L 待 测液(见 7.2.2),加 入 300 L提取液,充分 混匀 后取100 L 至另 一离 心管 中,加 入100 L 三级 水混 匀,再加 入200 L 稀释 缓冲液,充 分混 匀,按照8.2 8.5 进 行测 定,若显 示值 仍 2500 g/kg,则 按8.6 重复测 定,直至 显示 值2500 g/kg。8.7 本方 法检 出限 为50 g/kg。9 注 意事 项 不同厂 家超 导量 点免 疫荧 光定量 检测 卡及 免疫 荧光 分析仪 的使 用方 法可 能不 同,应 按照 产品 使用 说明中规 定的 方法 进行 操作。10 结 果表 述 试样中
10、脱氧 雪腐 镰刀 菌烯 醇的含 量由 免疫 荧光 分析 仪自动 计算 并显 示,单位 为g/kg。DB43/T 23472022 3 11 重 复性 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的相 对偏 差不应 超 过10。DB43/T 23472022 4 附 录 A(规范 性)超导量 点免 疫荧 光快 速定 量检测 卡性 能要 求及 评价 A.1 准确 性 采用500 g/kg、1000 g/kg 和3000 g/kg 3 个 浓度水 平的 脱氧 雪腐 镰刀 菌烯醇 实物 标准 样品,每个浓 度平 行测 定不 低 于6 次。计算 检测 卡检 测结 果 与实物 标准 样品 的相 对
11、偏 差,3 个浓 度的 相对 偏差均应控 制在-10+10 之间。A.2 精密 度 采用1000 g/kg 脱 氧雪 腐镰刀 菌烯 醇的 实物 标准 样品,平行 测定 不低 于 6 次,计 算检 测卡 批内 变异系数,变 异系 数应 10。A.3 批间 稳定 性 采用1000 g/kg 脱 氧雪 腐镰刀 菌烯 醇的 实物 标准 样品,随机 选取 至少6 个 批次产 品,每个 批次 产品测定 不低 于 2 次,批内 测定取 其平 均值,计 算检 测卡批 间变 异系 数,变异 系数应 10。A.4 批内 稳定 性 采用1000 g/kg 脱 氧雪 腐镰刀 菌烯 醇的 实物 标准 样品,随机 选取1 个 批次 产品测 定,平行 测定 不低于 6 次,计算 检测 卡批 内变异 系数,变 异系 数应 10。