欢迎来到麦多课文档分享! | 帮助中心 海量文档,免费浏览,给你所需,享你所想!
麦多课文档分享
全部分类
  • 标准规范>
  • 教学课件>
  • 考试资料>
  • 办公文档>
  • 学术论文>
  • 行业资料>
  • 易语言源码>
  • ImageVerifierCode 换一换
    首页 麦多课文档分享 > 资源分类 > PDF文档下载
    分享到微信 分享到微博 分享到QQ空间

    DB43 T 2327-2022 羊肚菌菌种质量检验规程.pdf

    • 资源ID:1535128       资源大小:812.52KB        全文页数:13页
    • 资源格式: PDF        下载积分:5000积分
    快捷下载 游客一键下载
    账号登录下载
    微信登录下载
    二维码
    微信扫一扫登录
    下载资源需要5000积分(如需开发票,请勿充值!)
    邮箱/手机:
    温馨提示:
    如需开发票,请勿充值!快捷下载时,用户名和密码都是您填写的邮箱或者手机号,方便查询和重复下载(系统自动生成)。
    如需开发票,请勿充值!如填写123,账号就是123,密码也是123。
    支付方式: 支付宝扫码支付    微信扫码支付   
    验证码:   换一换

    加入VIP,交流精品资源
     
    账号:
    密码:
    验证码:   换一换
      忘记密码?
        
    友情提示
    2、PDF文件下载后,可能会被浏览器默认打开,此种情况可以点击浏览器菜单,保存网页到桌面,就可以正常下载了。
    3、本站不支持迅雷下载,请使用电脑自带的IE浏览器,或者360浏览器、谷歌浏览器下载即可。
    4、本站资源下载后的文档和图纸-无水印,预览文档经过压缩,下载后原文更清晰。
    5、试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓。

    DB43 T 2327-2022 羊肚菌菌种质量检验规程.pdf

    1、Regulations for quality inspection of morchella strains羊肚菌菌种质量检验规程发 布 湖南省市场监督管理局 2022-05 发 布-0643湖南省地方标准ICSCCS 67.080B 31DB43/T2327 2022 2022-08 实 施-06DB43/T 23272022 I 目 次 前言 1 范围 1 2 规 范性 引用 文件 1 3 术 语和 定义 1 4 抽样 1 5 感 官检 验 1 6 杂 菌及 害虫 检验 1 7 菌 种鉴 定 2 8 菌 种活 力检 验 2 9 栽 培检 验 3 10 判 定规 则 3 11 档 案管 理

    2、 4 附录A(资 料性)羊肚 菌基因 组 DNA 提 取方 法 5 附录B(资 料性)PCR 扩 增体系 和扩 增程 序 6 附录C(资 料性)羊肚 菌菌种 质量 检验 档案 7 DB43/T 23272022 II DB43/T 23272022 III 前 言 本文件 按 照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分:标 准化 文件 的结 构和起 草规 则 的规定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本文件 由湖 南省 农业 农村 厅提出。本文件 由湖 南农 业标 准化 技术委 员会 归口。本文件 起草

    3、 单位:湖南 省 微生物 研究 院、湖 南湘 蕈 生物科 技有 限公 司、湖 南 双红农 科生 态工 程有 限公司。本文件 主要 起草 人:许 隽、喻 桃生、雷潇、邵 晨霞、唐少军、贺月 林、靳 磊、吴胜莲、杨祎、任锐、孙志光、何 晓林。DB43/T 23272022 IV DB43/T 23272022 1 羊肚菌菌 种质量 检验规程 1 范围 本文件 规定 了羊 肚菌 菌种 质量检 验的 术语 和定 义、抽样、感观 检验、杂 菌及 害虫检 验、菌种 鉴定、菌种活 力检 验、栽培 检验、判定 规则、档 案管 理等 技术要 求。本文件 适用 于羊 肚菌 母种、原种 和栽 培种(以 下简 称“菌

    4、 种”)的 质量 检验。2 规 范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中,注日 期的 引用 文件,仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件;不注 日期 的引 用文件,其 最新 版本(包 括所有 的修 改单)适 用 于 本文件。GB/T 12728 食 用菌 术语 GB/T 30989 高 通量 基因 测序技 术规 程 NY/T 1284 食 用菌 菌种 中 杂菌及 害虫 的检 验 NY/T 1846 食 用菌 菌种 检 验规程 DB43/T 1908 羊肚 菌简 易 拱棚栽 培技 术规 程 3 术 语和 定义 GB/T

    5、 12728 界 定的 以及 下 列术语 和定 义适 用于 本文 件。3.1 羊肚菌 morchella spp.隶属子 囊菌 门(Ascomycota)、盘菌 纲(Discomycetes)、盘菌目(Pezizales)、羊肚 菌 科(Morchellaceae)、羊肚菌 属(Morchella),因 其外表 凹陷 状似 羊肚 而得 名。4 抽样 菌种的 抽样 应符 合NY/T 1846 的 规定。5 感 官检 验 样品的 感官 检验 应符 合NY/T 1846 的 规定。6 杂 菌及 害虫 检验 样品的 杂菌 及害 虫检 验应 符合 NY/T 1284 的规 定。DB43/T 232720

    6、22 2 7 菌 种鉴 定 7.1 菌丝 体培 养 将活化 的羊肚 菌菌 块接种 于液体 土豆培 养基,20 静置培 养 7 d 10 d,然 后收集 菌丝体,用 无菌水反 复清 洗干 净,再用 灭菌滤 纸吸 干水 分,直接 使用或-20 保 存。7.2 基因 组DNA 提取 基因 组DNA 的提 取方 法参 见附 录 A,得到 的DNA 浓 度不宜 低 于 50 ng/l,1.7A260/A2802.0。7.3 PCR 扩增 选择 ITS 通 用引 物 ITS1/ITS4:TCCGTAGGTGAACCTGCGG/TCCTCCGCTTATTGATATGC。PCR 扩增 体系 和扩增程序 参见

    7、附 录 B。7.4 电泳 检测 采用琼 脂糖 凝胶 电泳 检 测PCR 产 物,用 凝胶 成像系 统 拍照并 记录 电泳 条带,黑 色羊肚 菌类 群(包 括梯棱羊 肚菌、六妹 羊肚菌、七妹 羊肚菌 等)条带应 为 800 bp,条带大 小正 确 且无其 他杂带 的样 品应进行双向 测序,测 序方 法应 符合 GB/T 30989 的 规定。7.5 数据 库比 对 获得的 测序 结果 应 在NCBI 数据库 进 行Blastn 比对(https:/blast.ncbi.nlm.nih.gov/),或者 在RDP 数 据库 进行Classifier 比对(http:/rdp.cme.msu.edu

    8、/classifier/classifier.jsp),初 步分 析测序菌 种的 分类 地位。7.6 系统 发育 树的 构建 下载准 确的 的羊 肚 菌 ITS 序列,利用 软 件 CLUSTAL 进行多 序列 比对,用 软 件 MEGA 通过 最大 简约 法(maximum parsimony,MP)和邻位相 连法(neighbour joining,NJ)分别 构建分 子系统发 育树,初步 确定测序 菌种 的分 类地 位。适宜生 产的 菌种 分类 地位 应为梯 棱羊 肚菌、六 妹羊 肚菌、七妹 羊肚 菌等。8 菌 种活 力检 验 8.1 平板 继代 培养 在含 PDA 固 体培 养基 的培

    9、 养皿中 央接 种初 始菌 种的 菌块,20 避光 培 养 2 d 3 d,当 菌丝 生长 至距离培 养皿 边缘 约 1 cm 处 时,用 打孔 器取 菌丝 前端 直径 0.5 cm 的圆 形菌 块,转接至 新 的 PDA 培养 皿 中继代培 养。8.2 菌种 萌发 检验 菌块应 在继 代培 养6 h 10 h 后 萌发。8.3 菌丝 生长 速率 检验 采用十 字交 叉法 分别 在继 代培 养 1 d、2 d、3 d 时 测 量羊肚 菌菌 落直 径,计算 菌丝生 长速 率,羊肚DB43/T 23272022 3 菌菌丝 平均 生长 速率 应大 于 10 mm/d。8.4 菌丝 长势 检验 菌丝

    10、应 均匀,菌 落边 缘应 整齐。8.5 菌丝 微观 形态 检验 继代培 养2 d 3 d 后,使 用体视 显微 镜观 察主 菌丝 和二级 菌丝 分枝 的夹 角,夹角应 小 于 30。8.6 菌核 检验 继代培 养 5 d 10 d 后,菌落上 应产 生白 色颗 粒,培养 14 d 后白 色颗 粒应 变 成黄棕 色菌 核;无菌核产生 的菌 种不 宜用 于生 产。8.7 菌落 颜色 检验 继代培 养10 d 15 d 后,菌落应 无色 素或 色素 较浅;色素 产生 多的 菌种 不宜 用于生 产。9 栽 培检 验 9.1 试验 场地 宜选择 温湿 度、光照、通 风等可 控的 菇房 或人 工气 候培养

    11、 箱。9.2 栽培 方式 宜采用 塑料 筐覆 土或 床架 覆土方 式进 行小 量栽 培试 验,每 个菌 种栽 培面 积应 不少 于 3 m2,至 少有3个随机 小区 重复,栽 培管 理参 见 DB43/T 1908。9.3 菌种 萌发 检验 播种1 d 3 d 菌种 应萌 发。9.4 分生 孢子 检验 播种5 d 10 d 菌丝 应在 土壤中 迅速 扩延,应 产生 适量的 菌霜(分 生孢 子)。9.5 外源 营养 袋检 验 施加外 源营 养 袋20 d 30 d,营 养袋 应充 满羊 肚菌 菌丝。9.6 羊肚 菌原 基检 验 土壤表 面应 产生 大量 原基,原基 应有 分化 为幼 菇的 趋势。

    12、10 判 定规 则 菌种的 感官 检验、杂 菌及 害虫检 验、菌种 鉴定、菌 种 活力检 验、栽培 检验 均符 合要求 的为 合格 菌种。DB43/T 23272022 4 11 档 案管 理 应建立 羊肚 菌菌 种检 验档 案,档 案内 容应 包括 但不 限于感 官检 验、杂菌 及害 虫检验、菌 种鉴 定、菌种活力 检验、栽 培检 验等 内容,档案 应保 存 3 年以 上。DB43/T 23272022 5 附 录 A(资料 性)羊肚菌 基因 组DNA 提 取方 法 羊肚菌 基因 组DNA 提取 按 照以下 步骤 进行:a)将 菌丝 体加 入液 氮研 磨成粉 末,取 约0.1 g 粉 末转移

    13、 至无 菌 的 2 ml 离 心 管中;b)加入 700 l 裂 解液(CTAB 2,pH=8.0)65 裂 解 1.5 2.0 h,每 隔10 min 颠 倒混 匀;c)12000 r/min 离心 10 min,取上 清液 转移 至新 的 离心管;d)加 入等 体积 的PCA(苯酚:氯仿:异戊 醇=25 241),缓慢 混匀;e)12000 r/min 离心 10 min,取上 清液 加入 等体 积CA(氯 仿:异 戊醇=24 1),缓 慢混 匀;f)12000 r/min 离心10 min,取 上清 液加 入2 倍体 积的无 水乙 醇,缓慢 混匀,置20 静 置1 h以上;g)12000

    14、 r/min 离心 10 min 弃 上清 留下DNA 沉淀;h)用1 mL 75 乙 醇清 洗 DNA 沉淀,离 心弃 上清;i)用含 1 RNase A 的 TE 缓冲液(Tris-HCl 10 mmol/L,EDTA 1 mmol/L)或灭菌双蒸水溶解沉淀;j)采 用超 微量 分光 光度 计或琼 脂糖 凝胶 电泳 检 测DNA 浓 度和 质量。DB43/T 23272022 6 附 录 B(资料 性)PCR 扩 增体 系和 扩增 程序 B.1 PCR 扩增 体系 PCR 扩 增的 总体 积为50 l,其 中10 PCR Buffer 5 l,dNTPs 5 l,引 物ITS1/ITS4

    15、各1 l,Taq 聚 合酶0.5 l,模 板DNA 2 l,双蒸 水35.5 l。B.2 PCR 扩增 程序 首 先 94 预 变 性 5 min;然后 94 变 性 30 sec,55 退 火 30 sec,72 延伸 60 sec,30 个循环;最 后 72 延 伸7 min。DB43/T 23272022 7 附 录 C(资料 性)羊肚菌 菌种 质量 检验 档案 表1 羊肚 菌菌 种质 量检 验档案 表 菌种名称 菌种来源 菌种级别 接种日期 保藏条件 联系人 菌种质量检验步骤 感官检验 气味 瓶塞(盖)松紧度 菌种颜色 干燥度 记录人 杂菌及害虫 检验 斑点 液体培养检验 液体培养检验 镜检 记录人 菌种鉴 定 DNA 浓度 电泳结果 测序结果 进化树分析 记录人 菌种活力检验 菌种萌发 菌丝生长速率 菌丝长势 菌丝微观形态 菌落颜色 菌核 记录人 栽培检验 菌种萌发 分生孢子 原基数量/m2 记录人 判定结果 是否合格 记录人


    注意事项

    本文(DB43 T 2327-2022 羊肚菌菌种质量检验规程.pdf)为本站会员(孙刚)主动上传,麦多课文档分享仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知麦多课文档分享(点击联系客服),我们立即给予删除!




    关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服 - 联系我们

    copyright@ 2008-2019 麦多课文库(www.mydoc123.com)网站版权所有
    备案/许可证编号:苏ICP备17064731号-1 

    收起
    展开