1、湖南省地方标准DB43湖南省市场监督管理局 发 布DB43/T136 2020 9ICS 65.020.20CCS B 352020-12-29发布 2021-03-29实施饲料中黄曲霉毒素 B快速检测 超导量点免疫荧光法1Detection of aflatoxin B in feed Rapid quantitative method of superconducting dots immunofluorescence technique1DB43/T 19362020 I 目 次 前言 1 范围 1 2 规 范性 引用 文件 1 3 原理 1 4 试 剂与 材料 1 5 仪 器与 设备
2、1 6 样 品制 备 2 7 上 机测 定 2 8 结 果表 述 2 9 重 复性 2 附录A（规 范性）超导 量点免 疫荧 光快 速定 量检 测卡性 能评 价要 求 3 DB43/T 19362020 II DB43/T 19362020 III 前 言 本文件 按 照GB/T 1.1 2020 给 出的 规则 起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利，本文 件的 发布机 构不 承担 识别 这些 专利的 责任。本文件 由湖 南省 农业 农村 厅提出。本文件 由湖 南省 农业 标准 化技术 委员 会归 口。本文件 起草 单位：湖 南省 兽药饲 料监 察所、湖 南九 鼎科技（集 团
3、）有 限公 司、湖南省 饲料 工业 协会。本文件 主要 起草 人：黄勇、李裕、李 艳平、刘 芬、张敏、雷加、周 灿、曹霞。DB43/T 19362020 IV DB43/T 19362020 1 饲料中黄 曲霉毒 素 B1 快速检测 超导量点 免疫荧 光法 1 范围 本文件 规定 了饲 料中 黄曲 霉毒 素 B1 的超 导量 点免 疫 荧光测 定方 法的 原理、试 剂与材 料、仪器 与设备、样 品制 备、上机 测定 与结果 表述。本文件 适用 于我 省植 物性 饲料原 料、配合 饲料、浓 缩饲料 中黄 曲霉 毒 素B1 的 快速检 测。2 规 范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文
4、中的规 范性 引用 而构 成 本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动 物饲 料 试样的 制备 3 原理 本方法 基于 超导 量点 标记 的抗原 抗体 反应，采 用荧 光侧向 免疫 层析 方法 学原 理。试 样提 取液 中的 黄曲霉毒 素B1 与 检测 卡上 标 记的抗 体相 结合 并发 出荧 光，荧 光强 度与 试样
5、中黄 曲霉毒 素 B1 含 量相 关。层析结束 后，用免 疫荧 光分 析仪测 定检 测卡 上的 检 测 线和控 制线 的荧 光强 度，仪器根 据内 置标 准曲 线 自 动算出试 样中 黄曲 霉毒 素B1 的含量。4 试 剂与 材料 4.1 除另 有说 明外，所 用 试剂均 为分 析纯，实 验室 用水应 符 合GB/T 6682 中 三级水 的要 求。4.2 稀释 缓冲 液：由超 导 量点免 疫荧 光定 量检 测卡 配套提 供，或根 据产 品使 用说明 书配 制。4.3 提取 液：量取550mL 甲醇加 入 450mL 水中，混 匀。5 仪 器与 设备 5.1 天平：感 量0.01g。5.2 粉
6、碎 机：粉碎 后全 部 通过 20 目 分析 筛。5.3 离心 机：转速 4000 r/min。5.4 涡旋 振荡 器。5.5 检测 卡：储存 条件 参 照使用 说明；技 术指 标应 符合附 录 A 要求。5.6 免疫 荧光 分析 仪：可 测定并 显示 检测 卡的 测定 结果。DB43/T 19362020 2 5.7 滤纸：采 用中 速定 量 滤纸。5.8 计时 器。6 样 品制 备 6.1 采样 按GB/T 14699.1 的 规定 执行。6.2 样品 处理 6.2.1 试 样制 备按GB/T 20195 的规 定执 行。用粉 碎机（5.2）粉 碎至 全部 通 过20 目分 析筛。6.2.
7、2 称取 5 g（精确 至0.01 g）试 样 于50 mL 离 心管中，加 入 25.0 mL 试 样提取 液（4.3），用 涡旋振荡器（5.4）振荡10 min；静置 后用 滤纸（5.7）过 滤，或 取 1.0 mL 1.5 mL 混合液 于离 心管 中，经离心机（5.3）以 4000 r/min 离心 35 min。取滤 液 或离心 后的 上清 液100 L 于另 一洁 净离 心管 中，加入400 L 稀 释缓 冲液（4.2），充 分混 匀待 测。注：黄曲霉毒素 B1 超导量点免疫荧光定量检测卡所用的样品处理方法可能不同，应按照产品使用说明中规定的方法进行操作。7 上 机测 定 7.1
8、开启 免疫 荧光 分析 仪（5.6）。7.2 将检 测卡（5.5）取 出，加 样孔 朝上 平放。7.3 准确 移取75L 待 测 液（6.2.2），加 入检 测卡 加样孔 中。7.4 检测 卡加 样后，水 平 静置 15 min 反 应（5.8），然后 在 3 min 内（5.8）将 检测卡 插入 免疫 荧光 分析仪（5.6），仪 器将 自动 进行检 测。7.5 结果 读取 7.5.1 荧 光分 析仪（5.6）将 在 13 秒内 完成 数据 读 取、分 析，免疫 荧光 分析 仪自动 显示 试样 中黄 曲霉毒素B1 的 含量 并保 存检 测 结果。7.5.2 异 常结 果处 理 若免疫 荧光 分
9、析 仪的 显示 值50 g/kg，需移 取100 L 滤液 或上 清液，加 入 300 L 试样 提取液（4.3），充分 混匀 后 取100 L 至 一洁 净的 离心 管中，加 入400 L 稀释 缓冲液（4.2），充分 混匀，按照7.2 7.5 进行 测定。注：免疫荧光分析仪的使用方法可能有所不同，应按照产品说明书的规定进行操作。7.6 本方 法检 出限 为0.5 g/kg。8 结 果表 述 试样中 黄曲 霉毒 素B1 的 含 量由免 疫荧 光分 析仪 自动 计算并 显示，单 位为 g/kg。9 重 复性 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值不超 过算 术平 均
10、值 的 20。DB43/T 19362020 3 附录 A（规范 性）超导量 点免 疫荧 光快 速定 量检测 卡性 能评 价要 求 本附录 规定 了饲 料中黄 曲 霉毒 素 B1 超 导量 点免 疫荧 光快速 定量 检测 卡的技 术 性能要 求，用于 对饲料中黄 曲霉 毒 素B1 超导 量 点快速 定量 检测 类产 品的 技术性 能进 行验 证，以确 保其适 用于 本方 法。A.1 准确 性评 价 采用 0 g/kg、5 g/kg、10 g/kg 和20 g/kg 4 个 浓度 水平 的黄 曲霉 毒 素 B1 实物 标准 样品，每个浓 度平 行测 定不 低 于6 次。计算 检测 卡检 测结 果
11、 与实物 标准 样品 的相 对偏 差，4 个浓 度的 相对 偏差均应控 制在-20+20 之间。A.2 精密 度评 价 采用10 g/kg 黄曲 霉毒 素 B1 的实 物标 准样 品，平 行测定 不低 于6 次，计 算 检测卡 批 内 变异 系数，变异系 数应 20。A.3 批间 稳定 性评 价 采用 10 g/kg 黄曲 霉毒 素 B1 的 实物 标准 样品，随 机选取 至 少 6 个 批次 产品，每个 批 次 产 品 测 定不低 于2 次，批 内测 定取 其平均 值，计算 检测 卡批 间变异 系数，变 异系 数应 20。A.4 批内 稳定 性评 价 采用 10 g/kg 黄曲 霉毒 素 B1 的 实物 标准 样品，随 机选 取 1 个 批次 产品 测定，平行 测定 不低 于 6次，计 算检 测卡 批内 变异 系数，变异 系数 应20。
