1、 ICS 65.020.01 CCS B 15 34 安徽省地方标准 DB34/T 4208 2022 草地贪夜 蛾抗药性 监测技术 规范 Guideline for insecticide resistance monitoring of the fall armyworm 2022-06-29 发布 2022-07-29 实施 安徽省市 场监督 管 理局 发 布 DB34/T 4208 2022 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文
2、件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本 文件 由安 徽 农 业大 学提出。本文件 由安 徽省 农业 农村 厅归口。本 文件 起草 单位：安 徽农 业大学、肥 西县 农业 综合 服务中 心、安徽 省 植 物保 护总站、凤 台县 植保 植检站、宿州 市植 检植 保站、安徽 省农 业科 学院、宿 州市埇 桥区 大店 镇农 业综 合服务 中心、宿 州市 埇 桥 区桃园镇 农业 综合 服务 中心。本 文件 主要 起草 人：操海 群、盛 成旺、廖 敏、蒋兴 川、周 建、李秀 霞、李桂 亭、黄 超、黄勇、董 永成、蒋 山、高全、肖 金京、郑兆 阳、吴向 辉、马书 芳、徐 丽娜、陈 浩梁、张 前进、
3、梅最 英。DB34/T 4208 2022 1 草地贪夜 蛾抗药 性监测技 术规范 1 范围 本文件 规定 了草 地贪 夜蛾Spodoptera frugiperda(J.E.Smith)抗 药性 监测 的 化学药 剂、监测 点的确定、监 测方 法、抗性 水平的 判断。本文件 适用 于草 地贪 夜蛾 的抗药 性监 测。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。NY
4、/T 2058 水 稻二 化螟 抗 药性监 测技 术规 程 NY/T 2916 棉 铃虫 抗药 性 监测技 术规 程 NY/T 3539 叶 螨抗 药性 监 测技术 规程 3 术语和 定义 本文件 没有 需要 界定 的术 语和定 义。4 化学药 剂 氯虫苯 甲酰 胺、溴氰 虫酰 胺、乙 基多 杀菌 素、虱螨 脲 和其 它取 得登 记的 化学 药剂。5 监测点 的确 定 设置原 则 根据安 徽省 玉米 种植 分布 和 草地 贪夜 蛾入 侵和 发生 分布特 点，在 长江 以南、淮 河以北、以及 江淮 之间各个 地区 选择 代表 性玉 米种植 区 进 行设 置。设置数 量 在长江 以南 草地 贪夜
5、蛾迁 飞过渡 区选 取 1 个2 个市县、江 淮之 间选 取 2 个3 个 市县、淮 河以北草 地贪 夜蛾 重点 防治 区选取 3 个4 个 市县，每个监 测点 面积 不少 于 0.5 hm2。6 监测方 法 监测时 间 根据安 徽省 草地 贪夜 蛾的 发生规 律，监测 时间 为每 年 5 月至 10 月。DB34/T 4208 2022 2 试虫的 采集 和饲 养 选取代 表性 玉米 田 3 块5 块，每 块田 采 用“W”型 五 点取样，每个 监测 点 采 集 草地贪 夜蛾 卵块 200块以上，或 采集 幼虫、蛹 500 头 以上，或 利用 诱虫 灯诱集 活成虫 200 头以 上。采集 的
6、卵 块孵 化后，幼虫生长 至 3 龄初，可 直接 用于生 物测 定。其他 虫态 室内饲 养至 F1 代，3 龄 初幼虫 用于 生物 测定。饲养条件 为（261），相 对湿度 为 40 70，光 周期L/D=16h/8h，幼虫 采 用人工 饲料 饲养，人 工饲料的配 方参 见附 录A 所示，成虫饲 喂 10 蜂蜜 水。药剂的 配制 6.3.1 母液配制 准确称 取一 定 量 的杀 虫剂 原药，用丙 酮或 二甲 基亚 砜等有 机溶 剂溶 解，配制 成母液。6.3.2 饲料混 毒法 使用同 一溶 剂稀 释母 液，配制系 列浓 度的 工作 液，再与人 工饲 料按 照质 量比 1:99 均匀 混合，加入
7、药液量 不少 于 2 g。6.3.3 点滴法 用同一 溶剂 将母 液稀 释为 系列浓 度的 工作 液，每个 浓度药 液量 不少 于2 mL。6.3.4 浸叶法 将母液 用 0.1 Triton-100 水 溶液 梯度 稀释 至工 作 液浓度，每 个浓 度药 液量 不少于 400 mL。测定方 法 6.4.1 方法的 选择 根据防 治药 剂的 作用 特点 和作用 方式，选 择饲 料混 毒法、点滴 法和 浸叶 法等。6.4.2 饲料混 毒法 选取生 长一 致、健康 的3 龄 初幼虫 作为 试虫。在 12 孔培养 板中 加入 适量 混毒 人工饲 料，并接 入 1头试虫。12 头为 一个 重复，每个
8、浓度 重复 3 次；每 个药剂 设置 5 个7 个 浓 度梯度。以 添加 相同 溶剂处理 的饲 料作 为对 照。处理后 的试 虫转 移至（26 1）、相对 湿度 为 40 70、光周 期L/D=16h/8h的条件 下饲 养。6.4.3 点滴法 选取生 长一 致、健康 的 3 龄初幼 虫作 为试 虫。用微 量点滴 器将 0.2 L 药 液 点滴在 幼虫 的胸 部 背板，从 低浓 度到 高浓 度依 次处理。12 头 试虫 为一 个 重复，每个 浓度 重复 3 次，每个 药剂 设置 5 个7 个浓 度梯 度。以点 滴相 同 溶剂的 试虫 作为 对照。处 理 后的试 虫转 移至 12 孔培 养板饲 养
9、，每孔 1 头，并加入 适量 人工 饲料 或新 鲜玉米 叶片，于（26 1）、相 对湿 度为 40 70、光 周期L/D=16h/8h 的条件下 饲养。6.4.4 浸叶法 选取生 长一 致、健康 的 3 龄初幼 虫作 为试 虫。采集 未接触 任何 农药 的新 鲜玉 米叶片，用 打孔 器 打成直径 略小 于 12 孔培 养 板孔径 的叶 碟，浸入 待测 药液中 10 s，取出 置于 吸 水纸自 然晾 干，每孔 放入DB34/T 4208 2022 3 3 个叶 碟，接入 1 头试 虫。12 头 试虫 为一 个重 复，每个浓 度重 复 3 次，每个 药剂设 置 5 个7 个浓度梯 度。以相 同溶
10、剂的 0.1 Triton-100 水 溶 液处理 的叶 碟饲 喂组 为对 照。处 理后 的试 虫转 移至（26 1）、相对 湿度 为 40 70、光周 期L/D=16h/8h 的 条件 下饲 养。药剂处 理后 的检 查时 间 根据药 剂发 挥作 用的 快慢 确定检 查时 间。氯虫 苯甲 酰胺和 溴氰 虫酰 胺，处理 后 48 h 检 查结 果；乙基多杀 菌素 处理 后 72 h 检查结 果；虱螨 脲处 理后 96 h 检查。试 虫触 碰无 反 应或不 能协 调运 动，或处理组草 地贪 夜蛾 体长 小于 对照组 体长 一半 以上，即 判定为 死亡。检 查结 果填 于附录B中表B.1。统计分 析
11、 利用SAS、SPSS、POLOplus 等软件，采 用浓 度对 数-机 率值分 析法，计 算LC50 值及其 95 置信 限、斜率 标准 误（bSE）、卡方值 和自 由度，计 算结 果填于 附录C中表C.1。7 抗性水 平的 判断 抗性倍 数的 计算 参照 NY/T 2058、NY/T 2916 和 NY/T 3539 的 规定，根据 敏感 品系 的LC50 值（S）和 监测 地区 种群的LC50 值（T），按公 式（1）计算 监测 地区 种群 的抗 性倍数（RR），计算 公式 如下：RR=TS(1)式中：RR 监 测地 区种 群的 抗性倍 数；T 监 测地 区种 群的LC50 值；S 敏
12、感品 系的LC50 值，部分 杀虫 剂的 敏感 品系 的LC50 值参 见附 录D。抗性水 平的 评估 参照 NY/T 2058、NY/T 2916 和 NY/T 3539 的 规定，抗性 分级 标准 表如 下表1：表1 抗性水 平的 分级 标准 抗性水平等级 抗性倍数RR 敏感性下降 1.0RR5.0 低水平抗性 5.0RR10.0 中等水平抗性 10.0 RR 100.0 高水平抗性 RR100.0 DB34/T 4208 2022 4 附录A（资料 性）草地贪 夜蛾 人工 饲料 配方 A.1 A 组份 分别 称取 黄豆 粉 100 g，麦 麸 80 g，酵母 粉 26 g，干 酪素 8
13、g，抗 坏 血酸 8 g，加入 蒸馏水 500 mL 充 分搅 拌均 匀。A.2 B 组份 称取 琼脂 26 g，加 入蒸馏 水 400 mL，充分 搅 拌均匀。A.3 C 组分 分别 称取 氯化 胆碱 1 g，山 梨酸 2 g，肌醇 0.2 g，青 霉素 钠 0.1 g，尼泊金 甲酯 2 g，加入蒸 馏水 100 mL 充分 搅拌均 匀。A.4 将B 组 中的 琼脂 与蒸 馏水 混合物 倒入 烧杯 中煮 至沸 腾，然 后加 入 A 组，继续 煮至沸 腾。A.5 煮沸后 冷却 至 70 80，加 入C 组 并搅 拌均 匀。A.6 待冷却 至 50 60，加 入微量 元素 组合 4 mL，并 搅
14、拌均 匀，微量 元素 组合 见表。表A.1 微量元 素组 合 序号 微量元素 重量（mg）1 烟酰胺(Nicotianamine)2086 2 泛酸钙(Calcium pantothenate)2086 3 核黄素（Riboflavin）1059 4 盐酸硫胺素（Thiamine hydrochloride）524 5 盐酸吡哆醇（Pyridoxine hydrochloride）524 6 叶酸（Folic acid）524 7 生物素（Biotin）51 8 钴胺素（Cobalamin,vitamin B12）13 注：准确称取以上各组分，加入蒸馏水 160 mL，并用玻璃棒搅拌 混匀，用
15、移液枪吸取 4 mL 分 装保存于-20 备用。A.7 将配制 完成 的饲 料倒 入 16.7cm12.3cm6cm 饲 料盒 中，待 饲料 冷却 后盖 上保 鲜膜，置于 4 冰箱保存。DB34/T 4208 2022 5 附录B（资料 性）草地贪 夜蛾 抗性 监测 实验 记录表 见表B.1。表B.1 药剂对 草地 贪夜 蛾生 物测 定原始 数据 记录 表 药剂名 称：测定时 间：测试地 理种 群：测定记 录人：药剂剂量或浓度（g/头或mg/L）重复组 处理的总虫数（头）处理后的死亡虫数（头）CK 1 2 3 A1 1 2 3 A2 1 2 3 A3 1 2 3 A4 1 2 3 A5 1 2
16、 3 A6 1 2 3 A7 1 2 3 DB34/T 4208 2022 6 附录C（资料 性）草地贪 夜蛾 抗性 监测 统计 结果 见表C.1。表C.1 草地贪 夜蛾 抗性 监测 统计 结果 测定时 间：测定纪 录人：药剂 种群（监测点）毒力回归线（y=a+bx）LC50 及95%置信限（g/头或mg/L）斜率标准误 卡方值（自由度）抗性倍数 A B C D DB34/T 4208 2022 7 附录D（资料 性）草地贪 夜蛾 对部 分杀 虫剂 的相对 敏感 基线 见表D.1。表D.1 草地贪 夜蛾 对部 分杀 虫剂 的相对 敏感 基线 药剂 名称 LC50（95%置信区间）g/g 或 m
17、g/L 斜率 标准误 测定方法 甲氨基阿维菌素苯甲酸盐 0.044（0.031 0.063）1.5 3 0.2 9 饲料混毒法 氯虫苯甲酰胺 0.25（0.15 0.30）6.0 9 2.0 3 饲料混毒法 氟苯虫酰胺 3.37（1.85 7.62）1.5 1 0.4 1 饲料混毒法 乙基多杀菌素 0.10（0.076 0.14）1.6 1 0.2 6 饲料混毒法 茚虫威 19.87（17.08 29.37）3.8 7 1.2 0 饲料混毒法 注：草地贪夜蛾对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、氯虫苯甲酰胺、氟 苯虫酰胺、乙基多杀菌素和茚虫威的相对敏感性数据，来源于本团队按照本标准的方法测定，虫源为2019 年5 月7 月第一批入侵安徽的草地贪夜蛾。
