1、 ICS 13.100 CCS C 50 DB32 江苏省 地 方 标 准 DB32/T 3762.20 2022 新型冠状 病毒检测 技术规范 第20 部分：核酸荧 光 PCR 检测质量控 制 Technical specifications for SARS-CoV-2 detection Part 20:Real-time fluorescence PCR test quality control 2022-07-19 发布 2022-08-19 实施 江 苏 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB32/T 3762.20 2022 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规 范性
2、 引用 文件.1 3 术 语和 定义.1 4 实 验室 资质.1 5 生 物安 全防 护.2 6 质 量管 理体 系文 件.2 7 人员.2 8 环 境设 施.2 9 仪 器设 备和 供应 品.3 10 检 测样 本.3 11 性 能验 证.4 12 内 部质 量控 制.4 13 外 部质 量控 制.4 14 实 验环 境消 毒与 废弃 物处理.5 DB32/T 3762.20 2022 II 前 言 本 文件 按照 GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结 构 和起草 规则 的 规定起草。本文件 为 DB 32/T 3762 新型 冠状 病毒 检测
3、技术 规范 的第20部 分。DB32/T 3762 目 前分 为以 下部分：第1部 分：生物 样本 采 集、运 输和 保存；第2部 分：病毒 分离 与 鉴定；第3部 分：核酸 荧光PCR 检测 程序；第4部 分：重组 酶介 导 等温扩 增程 序；第5部 分：血清IgM 和IgG 抗体 酶联 免疫 吸附检 测 程序；第6部 分：血清IgM 和IgG 抗体 胶体 金免 疫层析 检 测程序；第7部 分：空气 样本 检 测与评 估；第8部 分：物体 表面 检 测与评 估；第9部 分：医务 人员 职 业暴露 检测 与评 估；第10部 分：微量 血清 中和试 验；第11部 分：全基 因组 高通量 测序；第
4、12部 分：药物 体外 抗病毒 效果 测定；第13部 分：叠氮 溴化 丙锭-荧光PCR 检测 程序；第14部 分：N 亚基 因 组荧光PCR 检测 程序；第15部 分：血清/血浆IgM 和IgG 抗 体磁 微粒 化学 发光法 检测 程序；第16部 分：核酸 数字PCR 法；第17部 分：核酸 检测 用假病 毒阳 性质 控品；第18部 分：规模 化核 酸检测 程序；第19部 分：全自 动核 酸快速 一体 化检 测；第20部 分：核酸 荧光PCR 检测 质量 控制。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本 文件 由江 苏省 卫生 标准
5、 化技术 委员 会 提 出产 归口。本 文件 主要 起草 单位：江 苏省疾 病预 防控 制中 心、苏州市 疾病 预防 控制 中心、南 通市 疾病 预防 控制中心。本 文件 主要 起草 人：陈敏、徐金 水、崔仑 标、朱文 静、吉 文亮、李 建、熊海 平、徐 佳南、刘 兴 莹。DB32/T 3762.20 2022 1 新 型冠状 病毒检测 技术规 范 第 20 部分：核酸荧 光 PCR 检测质量 控制 1 范围 本文件 规定 了新 型冠 状病 毒核酸 荧光PCR 检测 实验 室在实 验室 资质、生物 安 全防护、质量 管理 体系文件、人员、环境 设施、仪器设 备和 供应 品、检测 样本、性能 验
6、证、内部 质 量控制、外 部质 量控 制以 及实验环 境消 毒与 废弃 物处 理方面 的通 用要 求。本文件 适用 于新 型冠 状病 毒核酸 荧光PCR 检测 的质 量控制。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB 19489 实验 室 生物安 全通用 要求 RB/T 214 检 验检 测机 构 资质认 定能 力评 价 检验 检 测机构 通用 要求 CNAS
7、-CL02 医学实 验室 质量和 能力 认可 准则 全国临 床检 验操 作规 程 原中华 人民 共和 国国 家卫 生和计 划生 育委 员会 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 荧光 PCR real-time fluorescence PCR 通过荧光染料或荧光 标记 的特异性的探针，对 PCR 产物进行标记跟踪，实时 在线监控反应过程，结合相 应的 软件 对产 物进 行分析，计 算待 测样 本模 板的初 始浓 度，用于 鉴别 病原微 生物。3.2 质量控 制 quality control 为达到 质量 要求 所采 取的 作业技 术和 活动。3.3 内部质 量控
8、制 internal quality control 实 验 室 为持 续 监控 测 量过程 和 测 量结 果 以确 定 结果是 否 足 够可 靠 达到 可 以发布 的 程 度而 采 取的 一组操作。4 实验室 资质 DB32/T 3762.20 2022 2 生物安 全二 级实 验室（BSL-2）应向设区的 市级 人民 政府卫 生主 管部 门备 案，临床检 测机 构基 因扩增实验 室还 应取 得 临床 基 因扩增 检验 实验 室 资质，并在核 定的 范围 内开 展工 作。5 生物安 全防 护 未 经 培 养 的 感 染 性 材 料 的 操 作 在 采 用 可 靠 方 法 灭 活 前 进 行
9、核 酸 提 取 及 样 本 灭 活 等 操 作，应 在 BSL-2 进行，同时 采用 生 物安全 三级 实验 室（BSL-3）的个 人防 护，配备 N95 及以 上 级 别防 护口 罩、医用无 纺布 帽、护目 镜或 防护面 屏、连体 防护 服、一次性 手术 衣、一次 性 PE 手套、乳 胶手 套、鞋 套、防水靴 套等 防护 装备；感 染性材 料或 活病 毒在 采用 可靠方 法灭 活后 进行 的核 酸检测 操作 应在 BSL-2 进行。6 质量管 理体 系文 件 实验室 应依 据 GB 19489、RB/T 214、CNAS-CL02、全 国临 床检 验操 作规 程 等 文件 建立 质量 管理体
10、系 文件。7 人员 7.1 采样人 员 从事新 冠病 毒核 酸检 测样 本采集 的人 员应 经过 生物 安全培 训，熟悉 样本 种类 和采集 方法，熟 练 掌 握样本采 集操 作流 程及 注意 事项，做好 样本 信息 的记 录，确保 样本 质量 符合 要求、样本及 相关 信息 可追 溯。7.2 检测人 员 实验室 检测 人员 应具 备实 验室工 作经 历以 及相 关专 业技术 技能，接受 过新 冠病 毒核酸 PCR 检测技能和生 物安 全培 训。检 测 机构应 按照 所开 展检 测项 目及样 本量 配备 实验 室检 测人员，以保 证及 时、高 效完成检 测和 结果 报告。8 环境设 施 8.1
11、 实验室 总体 布局 和各 部位 的安排 应减 少潜 在的 对样 本的污 染和 对人 员的 危害。8.2 开展新 冠病 毒核 酸检 测的 实验室 一般 设置 以下 区域：试剂 储存 和准 备区、样 本制备 区、扩增 分析区，各 区的 主要 功能 包括：a)试剂储 存和 准备 区：贮存 试剂的 制备、试 剂的 分装 和扩增 反应 混合 液的 制备，以及 离心 管、吸头等消 耗品 的贮 存和 准备。b)样本制 备区：转 运箱 的开 启、样 本的 灭活，核 酸提 取及其 加入 至扩 增反 应管（孔）等。c)扩增分 析区：核 酸扩 增和 产物分 析。8.3 根据所 使用 仪器 的功 能，区域可 适当
12、合并。如 采用 样本处 理、核酸 提取 及扩 增检测 为一 体的 自动化分析 仪，样本 制备 区和 扩增分 析区 可合 并。DB32/T 3762.20 2022 3 8.4 各区域 在物 理空 间上 应完 全相互 独立，不 得有 空气 的直接 相通，各 区域 应有 明确的 标记，不 同区域内的 设备、物 品不 得混 用。8.5 人员开 展工 作应 严格 遵守 从“试 剂储 存和 准备 区 标本制 备区 扩 增分 析区”的单 一流 程制 度，不得逆 向进 入前 一工 作区。8.6 试剂储 存和 准备 区宜 采用 常压或 正压，样 本制 备和 扩增分 析区 采用 常压 或负 压且两 区压 力持
13、平。有正压 控制 的工 作区，从 缓冲间 到核 心工 作间 压力 递增；有 负压 控制 的工 作 区，从缓 冲间 到核 心工 作 间压力递 减；各房 间之 间压 差宜不 低于 10 Pa，可 通过 安装排 风扇、负 压排 风装 置或其 他可 行的 方式 实 现。8.7 当检测 方法 对环 境条 件有 要求或 环境 条件 影响 检测 结果时，应 监测、控 制和 记录环 境条 件，并设置允许 范围。9 仪器设 备和 供应 品 9.1 应选择 国家 药品 监督 管理 部门批 准的 试剂，扩 增仪 选用扩 增检 测试 剂盒 推荐 的型号，使 用核 酸提取仪时 宜使 用仪 器配 套的 提取试 剂。9.2
14、 宜选用 带滤 芯的 一次 性加 样器吸 头。9.3 对可能 影响 检测 质量 的供 应品（包括 实验 用水）应 在使用 前进 行符 合性 验收。9.4 应对检 测结 果的 准确 性或 有效性 有影 响的 设备，包 括用于 测量 环境 条件 等辅 助测量 设备 有计 划地实施检 定或 校准。设备 在 投入使 用前，应采 用核 查、检定或 校准 等方 式，以 确 认其是 否满 足检 测的 要求。9.5 对于没 有检 定、校准 规程，但需 出具 检测 数据 的仪 器设备，实 验室 应根 据随 机说明 书和 有关 技术资料确 定可 接受 标准、维 护 和验 证的 程序 及频 次。9.6 设备出 现故
15、 障或 者异 常时，实验 室应 采取 相应 措施，如停 止使 用、隔离 或加 贴停用 标签、标 记，直至修 复并 通过 检定、校 准 或核查 表明 能正 常工 作为 止。应 核查 这些 缺陷 或偏 离 对以前 检测 结果 的影 响。9.7 实验室 配制 的试 剂应 贴好 标签，并 在标 签上 注明 试 剂名称、容量、溶 剂类 型、配 制及 使用 日期 和/或保质 期。若试 剂有 特殊 使用说 明、有毒 有害 提示 或使用 限制 也应 在标 签上 注明。10 检测样 本 10.1 样本种 类 包括口咽拭子、鼻 咽拭子、深咳痰液、肺泡 灌洗液、支气管灌洗液、呼吸道吸取物、便标本/肛拭子、血 液、血
16、清、尿 液、物体表 面、污水 等。10.2 样本包装 所有 样 本应 放在 大小 适合 的带螺 旋盖、内 有垫 圈的 样本采 集管 里，拧紧。容 器外注 明样本 编 号、种类、姓 名及 采样 日期 或等 效标识。密 闭后 的样本 放 入大小 合适 的塑 料袋 内密 封，每 袋装 一份 样本。10.3 样本送 检 DB32/T 3762.20 2022 4 样本 采 集后 室温 放置 不超 过 4 h，应 在 4 h 内 送到 实 验室。如果 需要 长途 运输 样本，应采 用干 冰 等制冷方 式进 行保 存，严格 按照相 关规 定包 装运 输。10.4 样本接 收 应在生 物安 全柜 内打 开内
17、 包装，样本 运送 人员 和接 收人员 对样本 进 行双 签收。10.5 样本保 存 样本应 尽快 进行 检测，能 在 24 h 内检 测的样本 可 置于 保存；24 h 内 无法检 测的 样本 则应置于-或 以下 保存（如 无-保 存条 件，则于-冰箱 暂存）。应设 立专库 或专 柜单 独 保 存样本，避免 反复 冻融。11 性能验 证 11.1 在用于 样本 检测 前，实验 室检测 人员 应对 由提 取试 剂、提 取仪、扩 增试 剂、扩 增仪等 组成 检 测 系统进行 必要 的性 能验 证，性能指 标包 括但 不限 于精 密度（至少 要有 重复 性）和最低 检测 限，以 确 认 能 否复现
18、商 品试 剂盒 说明 书载 明的性 能参 数，能 否达 到预 期的检 测目 的。宜 选用 高灵 敏的试 剂（检 测限 500拷贝/mL）。11.2 每当试 剂盒 的试 剂组 分或 试验过 程改 变，或使 用新 批号或 新货 运号 的试 剂盒 之前，应重 新进行性能验证。12 内部质 量控 制 12.1 标准操 作规 程制 定 实验室 应制 定并 严格 执行 标准操 作规 程，包括 试剂 准备、样本 前处 理、核酸 提取、核酸 扩增、结 果分析及 报告、可 疑样 本复 检流程。12.2 内部质 量控 制方 式 12.2.1 每批检 测至 少 有 1 份 弱阳 性质控 品（第三 方质 控品，通常
19、为检 出限 的 1.5 倍3 倍）、3 份阴性质控 品（生理 盐水）。质控品 随机 放在 待测 样本 中，参 与从 提取 到扩 增的 全过程。12.2.2 应选择 合适 的内 源性 对照 如 管家 基 因或 外源 性对 照如假 病毒 作为 内对 照以 评价实 验过 程的完整性。12.2.3 物品和 环境 样本 的采 集检 测，还 需在 采样 前及 采样 过 程中至 少设 一个 现场 空白 样本及 一个 运 输空白样 本，以进 行过 程中 的质量 控制。12.2.4 应定期 采用 保存 液、生理 盐水 或 DEPC（焦碳 酸二 乙酯）水开 盖放 置过 夜或 拭子擦 拭等 方式 对样品处 理区 域
20、（含生 物安 全柜）、提 取设 备、加样 器、冰 箱把 手、门把 手等 部位进 行环 境污 染监 测。12.3 实验结 果有 效性 的判 定 当出现 下述 情况 中的 任何 一种或 多种，当 次实 验结 果无效，查 找原 因，重做 实验。a)阴性质 控品 出现 扩增；b)阳 性质 控品 无扩 增；c)内对 照不 满足 试剂 盒 说明书 规定 的要 求。DB32/T 3762.20 2022 5 13 外部质 量控 制 实验室 应常 态化 参加 能力 验证计 划、测 量审 核、实 验 室间比 对或 质量 控制 考核，对 检测 量大 以及 承担重点 人群 筛查 等任 务的 实验室，需 适当 增加
21、频率。14 实验环 境消 毒与 废弃 物处 理 14.1 工作结 束后，应 立 即对工作区进 行清洁。工 作区的实验台 表面宜使用 含氯消毒剂（1000 mg/L）或 75%酒 精喷 洒或 擦拭 消毒，使用 可移 动紫 外灯（254 nm 波长）距实 验台 面 60 cm 90 cm 内照 射过夜。14.2 试剂 储存 和准 备区、扩增分 析区 的废 弃物 宜直 接打包 带出，无 需高 压处 理；样本 制备区 的原 始 样本应经 压力 蒸汽 灭菌 方法 处理，并作 为医 疗废 弃物 外送有 资质 的机 构处 置。14.3 所有 的危 险性 废弃 物应依 照统 一规 格化 的容 器 和标 示方 式，完整、合 规地标 示废 弃物 内容。
