1、ICS 65.020.20 CCS B 05 DB21 辽宁省 地 方 标 准 DB21/T 3596 2022 蛹虫草试 管菌种检 验规范 Testing Specification for Tube strain of Cordyceps militaris 2022-06-30 发布 2022-07-30 实施 辽 宁 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB21/T 35962022 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1-2020 标准 化工 作导 则 第1部分：标 准化 文件 结构 和起 草规则 的 规定 起草。本文件 由辽 宁省 农业 农村 厅提出 并归 口。本文件 起草 单
2、位：辽 宁省 海洋水 产科 学研 究院,辽 宁 省农产 品加 工流 通中 心。本文件 主要起 草人：孟楠，李亚 洁，温 志新，都兴 范，李 学军，米锐，孙永 欣，马 淑慧，李树 英，王弘，杨远，李 世轩。本 文件 发布 实施 后，任何 单 位和个 人如 有问 题和 意见 建议，均可 以通 过来 电和 来 函等方 式进 行反 馈，我们将 及时 答复 并认 真处 理，根 据实 际情 况依 法进 行评估 及复 审。归口管 理部 门通 讯地 址：辽宁省 农业 农村 厅（辽宁 省沈阳 市和 平区 太原 北街2 号），邮 编：110001，联系电 话：024 23447862。文件 起 草单 位通 信地
3、址：辽 宁省海 洋水 产科 学研 究院（大连市 沙河 口区 黑石 礁街50 号），联系 电话：041184671027。DB21/T 35962022 1 蛹 虫草试 管菌种检 验规范 1 范围 本 文件 规定 了 蛹 虫草 试管 菌种的 质量 要求、描 述了 试验方 法、检验 规则 等要 求。本 文件 适用 于蛹 虫草 试管 菌种质 量的 检验。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修
4、改单）适 用 于 本文件。GB/T 2828.1 计数 抽样 检 验程序 第1 部分：按 接收 质量限（AQL）检索 的逐 批 检验抽 样计 划 GB/T 4789.28 食品 卫生 微生物 学检 验染 色法、培 养基和 试剂 GB/T 12728 食 用菌 术语 NY/T 528 食用 菌菌 种生 产技术 规程 NY/T 1742 食 用菌 菌种 通 用 技术 要求 NY/T 1846 食 用菌 菌种 检 验规程 DB21/T 3187 蛹虫 草贮 藏 技术规 程 3 术语 和定 义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 试管菌 种 tube strain 以玻璃 试管 为培 养容
5、器和 使用单 位 的 菌种。3.2 母种 stock culture 经各种 方法 选育 得到 的具 有结实 性的 菌丝 体纯 培养 物及其 继代 培养 物,也称 一 级种。3.3 原种 mother spawn 由母种 移植、扩 大培 养而 成的菌 丝体 纯培 养物，移 植、扩 大次 数不 超过4代，也称二 级种。3.4 角变 sectoring DB21/T 35962022 因菌丝 体局 部变 异或 感染 病毒而 导致 菌丝 变细、生 长缓慢、菌 丝体 表面 特征 成角状 异常 的现 象。3.5 生物 学效 率 biological efficiency 单位质 量培 养料 的风 干物
6、质所培 养产 生出 的子 实体 或菌丝 体质 量（鲜重），常 用百分 数表 示，如 风干料100kg 产生 了新 鲜子 实 体50kg，即 为生 物学 效率50%。3.6 种性 characters of variety 蛹虫草 的品 种特 性是 辨别 蛹虫草 菌种 或品 种优 劣的 重要标 准之 一。一 般包 括对 温度、湿 度、酸 碱 度、光线和 氧气 的要 求，抗逆 性、丰 产性、出菇 迟早、出菇潮 数、栽培 周期、商 品质量 及栽 培习 性等 农 艺 性状。4 仪器设 备 应 符合NY/T 1846-2010 中规 定。5 抽样 应符合GB/T 2828.1-2003 中规定。试管菌
7、种抽 样方 案见 附录A。6 检 验内 容和 方法 6.1 感官 检测 6.1.1 容器 肉眼观 察试 管有 无破 损。6.1.2 棉塞 或胶 塞 手触是 否干 燥；肉眼 观察 是 否洁净，对 光源 仔细 观察 是 否有粉 状物；松 紧度 以手 提 起棉塞（或 胶塞）或拔出 棉塞（或 胶塞）的 状况检 查；棉塞（或 胶塞）透气 性和 滤菌 性以 及观 察塞入 试管 口内 或 漏 出 试 管口外棉 塞（或胶 塞）的长 度检查。6.1.3 培 养基 灌入 量 肉 眼观 察培 养基 灌入 量多少。6.1.4 斜 面长 度 用卡尺 测量 斜面 顶端 到试 管口的 距离。6.1.5 接 种量 用 卡尺
8、测量 接种 块大 小。6.1.6 菌 种外 观及 菌丝 生 长状态 肉眼观 察菌 丝生 长量、菌 丝体特 征、菌丝 表面 状态、菌丝 表面 有无 分泌 物，菌落表 面是 否整 齐，有无其他 色泽 及异 常，必要 时用5 倍放 大镜 观察。DB21/T 35962022 3 6.1.7 气味 在 无菌 条件下 拔出 棉 塞（或 胶塞），将 试管口 置于距 鼻5cm 10cm 处，屏 住呼吸，用清 洗干 净、酒精棉球 擦拭 过得 手在 试管 口上方 轻轻 煽动，顺 风鼻 闻。6.2 菌种 生物 学检 验 6.2.1 杂菌 和害虫 用放大 倍数 不低 于1040 的 光学显 微镜 对培 养物 的水
9、封片进 行观 察，每一 检样 应观察 不少 于50 个 视野。6.2.2 细菌 应将检 验样 本按 无菌 操作 接种于GB/T 4789.28 中规 定的营 养琼 脂培 养基 或PDA 培养基 中，（37 1）培养24h，培养 基浑 浊或 表 面 出现 细菌 菌落 者为 有细 菌污染。6.2.3 霉菌 应将检 验样 本按 无菌 操作 接种于PDA 培养 基中，（281）培 养2d 3d，培 养 基上出 现霉 菌菌 落者为受霉 菌污 染，必要 时进 行水封 片镜 检。用显 微镜 检测培 养基 中有 霉菌 分生 孢子者 为受 霉菌 污染。6.3 菌丝 生长 速度 用直径90mm 的无 菌培 养皿，
10、在 无菌 条件 下倒 入CPDA 培养基20ml，自然 凝固 制 成平板。取斜 面上 位于一半处3mm 5mm 3mm 5mm 菌 种一块，菌丝朝上接种于 平板 中 央，接种平板5个，至于（201）下培养，记录 菌丝 长满 平皿 天数。6.4 菌种 栽培 性状 将试管 菌种用PDA 培 养基 制 成液体 菌种。用附 录B 中配 方，制作 蛹虫 草45 瓶。接 种 后平均 分三 组进 行常规管 理，根 据表1 所列 项 目，做 好栽培 记录，统计 检验结 果。同 时将 该 菌种 的出发 菌株设 为对 照，亦做同样 处理。对 比二 者的 检验结 果。表1 菌种栽 培性 状检 验记 录 检验项目 检
11、验结果 检验项目 检验结果 试管菌种长满所需时间，d 总产，g 液体菌种达到所需浓度时间，d 平均单产，g 液体菌种接种至铺满菌所需天数，d 生物学效率，%液体菌种接种至转色所需天数，d 子实体形态、色泽 液体菌种接种至子实体生长成熟所需时间，d 子实体直径、长度，mm 7 质 量要 求 7.1 试 管菌 种感 官要 求 应符合 表2 规定。DB21/T 35962022 表2 试管菌 种感 官质量 要求 项目 要求 容器 完整，无损 棉塞或硅胶塞（母种用胶塞）干燥、洁净、松紧适度，能满足透气和滤菌要求 培养基灌入量 为试管总容积的三分之一至四分之一 培养基斜面长度 顶端距管口60 mm 80
12、 mm 接种量（接种块大小）（3 5）mm（3 5）mm 菌种外观 菌丝生 长量 长满斜面 菌丝体特征 表面分生孢子层均匀、橘黄色 菌丝体表面 均匀、平整、无角变，菌丝分泌物 无 菌落边缘 整齐 气味 有虫草菌特有的香味，无酸、臭、霉等异味 7.2 生 物学 要求 试管菌 种生 物学 要求 应符 合表3 规定。表3 试管菌 种生 物学 要求 项目 要求 杂菌 无 螨虫 无 细菌 无 霉菌 无 7.3 菌 丝生 长速 度 按照6.3 方法，菌丝 一般10d15d 长满平皿。具体的 生长速 度 也与 培养 基配方、菌株 品种有 关，天数也可 根据 具体 情况 进行 调节。7.4 栽 培性 状 对照
13、6.4 操 作后，以 时间 计 的检验 项目 中，被检 试管 菌 种的任 何一 项时 间较 对照 菌株推 迟5d 以上（含5天）者，为 栽培性 状 不 合 格；产 量显著 低于 对照菌 株者，为 栽培 性状 不合格；子实 体外观 形态 与对 照明显不 同或 畸形 者，为 栽 培性状 不合 格。8 判定 规则 菌种的 感官 要求，生 物学 要求、生长 速度 以及 栽培 性状均 符合 要求 的，为合 格菌种。其 中任 何 一 项不符合 要求，均 为不 合格 菌种。DB21/T 35962022 5 附 录 A（资料 性）蛹虫草 菌种 抽样 方案 采用一 般检 验水 平 的一 次抽样 方案，方 案规
14、 定 的AQL（不合 格品 百分 数）为 0.5%。一次抽 样方 案由 样本 量 n、接收 数Ac 和拒 收数Re 组 成。Re=Ac+1。一次 抽样检 验方案 表现 为N，n，Ac 或（n，Ac），（n，Ac，Re）等。其中：N 交 验批 的批 量；n 样本 大小；Ac 合格 判定 数。当样本 中检 出的 不合 格数d Ac，判批 合格；当dRe，判批 不合 格。DB21/T 35962022 附 录 B（资料 性）液体菌 种常 用培 养基 及其 配方 B.1 植物培 养基（小 麦培 养基）小麦30g，营养 液4.5ml。B.2 添加营 养液 葡萄糖 20g，磷 酸二 氢钾3g，硫 酸镁1.5g，维 生素B2 2mg，水 1000ml，pH 值 自然。_
