1、 ICS 65.020.01 CCS B16 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 2559 2022 油菜抗黑 胫病室内 鉴定技术 规程 Technical code of practice for indoor resistance evaluation of canola against leptosphaeria biglobosa 2022-05-25 发布 2022-06-25 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 2559 2022 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草
2、规则 的 规 定起草。本文件 由内 蒙古 自治 区农 牧厅提 出。本文件 由内 蒙古 自治 区农 业标准 化技 术委 员会（SAM/TC 20）归 口。本文件 起草 单位：内 蒙古 自治区 农牧 业科 学院、特 泥河农 牧场 有限 公司。本文件 主要 起草 人：宋 培 玲、李子 钦、杨 永青、燕 孟娇、皇 甫海 燕、贾 晓清、皇 甫九 茹、郭 晨、赵丽丽、史志 丹。DB15/T 2559 2022 1 油菜抗黑 胫病室 内鉴定技 术规程 1 范围 本文件 规定 了油 菜黑 胫病 的室内 鉴定 技术 中孢 子悬 浮液制 备、接种 方法、病 情 调查及 抗病 性评 价 和鉴定的 方法。本文件 适用
3、于 内蒙 古油菜 生产品 种、新 育成 品-种、区域试 验品种、亲 本及育 种中间 材料的 黑胫 病抗性鉴 定和 抗性 评价。2 规范性 引用 文件 本文件 没有 规范 性引 用文 件。3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。油菜黑 胫病 phoma stem canker 小球腔 菌 属Leptosphaeria biglobosa 侵 染引 起的 油菜病 害。L.biglobosa 侵 染叶 片后，形成具 有黄 色外 缘的 典型 病斑，病斑 内含 有黑 色分 生 孢子器。患 病茎 秆，在茎上 部形 成灰 白色 病斑，其上 有黑 色分 生孢 子器，病斑 具有 黑色 边界。4
4、病原菌 病原菌 来源 病原菌 从内蒙 古油 菜地中 发病植 株上分 离获 得，结 合形态 学和分 子水 平鉴定 为（L.biglobosa），中等致 病力。病原菌 的培 养及 孢子 悬浮 液的制 备 将低温 保存 的黑 胫病 菌菌 丝体接 种在PDA 平板 上，置 于25 恒 温培 养箱 中活 化 培养。培养14 d 后，将3 ml 5 mL 无菌 水加 在 已产孢 的 Lbiglobosa 平 板内，静置10 min，无菌 载玻片 轻刮 平板 表面，使分生孢 子充 分释 放并 悬浮 于无菌 水中，2 层无 菌纱 布过滤 获得 孢子 悬浮 液，利用血 球计 数板 计数 并 将 浓度调整 为1
5、107 个/mL，备 用。5 鉴定品 种幼 苗培 养 将供试 材料 的种 子播 种在 装有无 菌土 的营 养钵（13 cm 13 cm）中，每 个品 种 播种3 钵，每钵 播10粒，置 于25、16 h/8 h（光照/黑 暗）条件 下，待 油菜长 出两 片子 叶时，用 于接种。DB15/T 2559 2022 2 6 抗病性 鉴定 子叶穿 刺接 种 油菜 子叶期，用无 菌针在子叶 中央轻刺一下，伤口处接 种10 L 1 107个/mL 黑 胫 病 菌 孢 子 悬 浮液，同 时 以 接 种 等 量 无 菌 水 为 对 照。接 种 后，套 上 内部湿 润的 塑料 袋，21 下黑暗 保湿 培养48
6、h以上。病情调 查 接种10 d 后，根据 油菜 黑 胫病子 叶接 种鉴 定病 情分 级标准（表1）对接 种叶 片 进行调 查，并计 算病情指数。表1 油菜黑 胫病 子叶 接种 鉴定 病情分 级标 准 病级 症状 0 接种点周围无症状可见 1 接种点周围呈轻微黑色，有黄色晕圈 3 接种点周围出现 1.5-3.0 mm 坏死斑，或有黄色晕圈，有的产生孢子 5 接种点周围出现 3.0-6.0 mm 坏死斑，有的坏死组织有明显的边缘 7 组织灰绿色萎蔫，3.0-6.0 mm 坏死斑，有明显的边缘，有的形成分生孢子器 9 病斑腐烂，叶片枯死，上面有大量的分生孢子器 病情指 数（ID）计算 公式：（1）
7、式中：ID 病 情指 数；i 病害 级别，i=0,1,3,.，n（0 健 株级 别；n 最严 重病 害级 别）；Xi 第i 级的 病株 数（i=0 时，X0为0级 健株 数）；求和 号，表示 对 它后面 的变 量（i Xi）求 和，即从 第一 个（i=1）累 加到最 后一 个（n）；Xini=1一一调 查 总 株数（病 株和 健株）。品种抗 性水 平划 分 依据病 情指 数计 算公 式计 算病情 指数，根 据表2进 行 油菜抗 黑胫 病等 级划 分。DB15/T 2559 2022 3 表2 油菜黑 胫病 抗性 分级 标准 抗病性 病情指数 抗病性 病情指数 高抗(H)DI=0 低感(LS)4
8、0 DI60 中抗(M)0 DI20 中感(MS)60 DI80 低抗(L)20 DI 40 高感(HS)DI 80 DB15/T 2559 2022 4 参考文 献 1 李 欣洲,宋培 玲,郝丽 芬等.油菜 黑胫 病菌(Leptosphaeria biglobosa)侵 染条件 研究J.华北农学报.2013，28(2):235-238.2 Delwiche PA Genetic aspects of blackleg(Leptosphaeria maculans)resistance in rapeseed(Brassica napus)D.Madison:University of Wisconsin，1980，144 3 Somda I，Renard M，Brun H Seedling and adult plant reactions of Brassica napus-Bjuncea recombinant lines towards A and B group isolates of Leptosphaeria maculans J Annals of Applied Biology，1998，132:187-196
