1、 ICS 65.020.01 CCS B05 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 2540 2022 羊肚菌菌 种 制作技 术规程 Regulation of strain manufacture for morehella esculenta 2022-04-25 发布 2022-05-25 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 2540 2022 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（SAM/TC 25）归口。本文件
2、起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、赤峰市克什克腾旗农牧局、内蒙古瑞福杨种植专业合作社。本文件主要起草人：于传宗、孙国琴、王海燕、庞杰、李亚娇、慕宗杰、于凤玲、刘瑞、田永雷、韩凤英、云伏雨、田文龙。DB15/T 2540 2022 1 羊肚菌菌 种制作 技术规程 1 范围 本文件 规定 了羊 肚菌 菌种 生产技 术要 求。本文件 适用 于 羊 肚菌 母种、原种 和栽 培种 菌种 生产 技术。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引
3、 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB 4806.7 食 品安 全国 家 标准 食品 接触 用塑 料材 料 及制品 NY/T 528 食用 菌菌 种生 产技术 规程 NY/T 1731 食 用菌 菌种 良 好作业 规范 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。羊肚菌 morehella esculenta 真菌学 分类 属盘 菌目，羊 肚菌科，羊肚 菌属。羊肚 菌 由羊肚 状的 可孕 头状 体菌 盖和一 个不 孕的 菌柄组成。表面 形成 许多 凹坑，似羊 肚状，淡黄 褐色，柄白色，菌 盖表 面有 网状 棱的子 实层，边 缘与 菌柄 相连。菌
4、柄圆 筒状、中 空，表面平 滑或 有凹 槽。菌种 spawn 通过生 产试 验验 证具 有特 异性、均一 性和 稳定 性，丰产性 好、抗性 强的 菌株 或品种，生 长在 适宜 基质上具 结实 性的 菌丝 培养 物，包 括母 种、原种 和栽 培种。母种 stock culture 经各种 方法 选育 得到 的具 有结实 性的 菌丝 体纯 培养 物及其 继代 培养 物。也称 为一级 种、试管 种。原种 pre-culture spawn DB15/T 2540 2022 2 由母种 移植、扩 大培 养而 成的菌 丝体 纯培 养物。常 以菌种 瓶（玻璃 菌种 瓶或 塑料菌 种瓶）或（12 17）cm
5、（2228）cm（0.04 0.05）mm聚 丙烯 塑料袋 为容 器。也称 为二 级种。栽培种 spawn 由原种 移植、扩 大培 养而 成的菌 丝体 纯培 养物。常 以菌种 瓶（玻璃 瓶或 塑料 瓶）或（1517）cm（3335）cm（0.04 0.05）mm 聚丙 烯塑 料袋 为容 器。栽培 种只 能用 于扩 大到 栽 培出菇 袋或 直接 出菇，不可以 再次 扩大 繁殖 菌种。也称 为三 级种。4 菌种生 产要 求 人员 生 产 所 需要 的 技术 人 员和检 验 人 员经 过 专业 培 训、掌 握 基 础知 识 及菌 种 生产技 术 规 程要 求 的相 应专业技 术人 员。场地、厂房 要
6、求 菌种生 产应 选择 地势 高，通风良 好，空气 清新，水 源近，排水 通畅，交 通便 利的场 所。菌种生 产厂 房要 求有 各自 隔离的 摊晒 场、原材 料库、配料分 装库。配 套有 配料 室、搅拌 室、装袋（瓶）室、灭 菌室、冷 却室、接 种 室、培 养室（通 风好，有 纱 窗）、菌种 检测 室及 菌种 冷 藏库等 各环 节的 设施。冷却室、接 种室，培 养室 都要有 离子 净化 设施。生产设 备 菌种生 产需要 粉碎 机、电 子秤、搅拌机、装 袋（瓶）机、高压灭 菌锅 或常压 灭菌锅、离子 净化 器、超净工 作台 或接 种箱、恒 温培养 箱、培养 架、摇床、液体 菌种 灌（30 L 6
7、00 L）、显 微镜 等设 备。符合NY/T 528 规定。5 母种生 产 培养基 马玲薯200 g(煮汁)，葡 萄 糖20 g，琼 脂20 g，蛋白 胨0.5 g，牛肉 膏0.5 g，水1000 ml。容器 试管选 用18 mm 180 mm 或者20 mm 200 mm；培养 皿 选用直 径7 cm 9 cm 玻璃 培养皿 或一 次性 塑料培养 皿。分装和 灭菌 5.3.1 斜面培 养基 分装 和灭 菌 分装培 养基至 试管1/4 处，用棉塞 或硅胶 塞封 闭试管 口，每5 支试 管为1 把，牛 皮纸包 棉塞，橡皮 筋扎紧，棉塞 向上 放置。棉 塞应采 用梳 棉，不能 使用 脱脂棉。121
8、 122（0.11 MPa 0.12 MPa）恒温灭菌25 min。DB15/T 2540 2022 3 降温至（65 5）时 取 出试管，在 空气 清洁 的室 内 摆斜面，要 求斜 面长 度不 超 过试管 长度 的2/3，自然降 温凝 固后 成斜 面。从摆好 的试 管中 抽取3%5%的 试管，在28 下 培 养48 h，无微 生物 长出为灭菌合 格。5.3.2 平板培 养 基 分装 和灭 菌 培养基 装入300 ml 500 ml 三角 瓶至 刻度 的2/3 处，用带滤 膜的 封口 膜封 口后 放入灭 菌锅；玻 璃 培养皿用 报纸 包好，放入 灭 菌锅。在 温度 升至 102 105 排净
9、冷空 气后 升 压，升至121 122（0.11 MPa 0.12 MPa）恒温灭 菌25 min。降温至（65 5）时，在 超净工 作台 内将 三角 瓶中 的培养 基分 装至 无菌 培养 皿中，培养 基占 培 养皿高度 的1/3 1/2。接种 在超净 工作 台或 接种 箱内 接种，接种 前用 紫外 灭菌 灯照射30 min，之 后用75%酒精 进行 表面 消毒。接菌 过 程严 格执 行无 菌操 作，接 种后 及时 贴好 标签 并做好 记录。接种的 菌块3 mm 5 mm，接种在 培养 皿或 试管 的中 部。培 养皿 需用 石腊 封口 膜密封。菌丝长 满试 管斜 面或 培养 皿表面 即可 使用
10、。培养 温度 控 制在18 26，空气 湿度 在75%以 下，通风避 光培 养。接种后 第3 d、第 5 d和 长满 培养基 后分 别进 行检 验，挑 出未活、污 染和 生长 不良 的 不合格 培养 器皿。检查方 式符 合NY/T 1731 规 定。6 原种、栽培 种生 产 培养基 以下培 养基 配方 任选 其一：a)柠条 粉72%、麦麸 25%、石膏1.5%、过 磷酸 钙 1.5%；b)玉米 芯53%、柠条 粉 30%、米 糖15%、石膏 1%、过磷酸 钙1%；c)谷粒或 麦粒 或玉 米 粒 90%、柠条 粉或 棉籽 壳或 木屑 或玉米 芯粉 或豆 秸 粉 9%、石 膏1%。容器 原种采 用
11、850 ml 以下、瓶 口直径 小于 等 于4 cm、耐126 高温 的透 明瓶 子或 菌种瓶，也 可以 采用（12 17）cm（2228）cm（0.04 0.05）mm 的聚 丙烯 塑料 袋。栽培种 采用 同原 种要 求相 同的瓶 子，也可 采用（15 17）cm（33 35）cm（0.04 0.05）mm 的聚丙烯 塑料 袋。以上聚 丙烯 塑料 袋均 符合GB 4806.7 要 求。装袋（瓶）采用装 袋（瓶）机 或人 工进 行装袋（瓶），人工 装袋（瓶）需 用打 孔器 在袋 口处 打孔，孔直 径1 cm 1.5 cm 深 度为8 cm 12 cm，每 袋（瓶）装培 养基 质500 g 60
12、0 g，塑料 袋用 无棉盖 体套 环封 口或 窝口海绵塞 封口。DB15/T 2540 2022 4 灭菌 可采用 高压 灭菌 和常 压灭 菌。高压灭 菌：组合 培养 料在121 122（0.11 MPa 0.12 MPa）下灭 菌2 h；粮 食 培养基 在 121 122（0.11 MPa 0.12 MPa）下灭 菌 2.5 h。常压灭 菌：在3 h 之 内使 温 度升至100，恒温 保持10 h 12 h。接种 高压灭 菌：组合 培养 料在121 122（0.11 MPa 0.12 MPa）下灭 菌2 h；粮食 培养基 在121 122（0.11 MPa 0.12 MPa）下灭 菌2.5
13、h。常压灭 菌：在3 h 之 内使 温 度升至100，恒温 保持10 h 12 h。培养 通风避 光、21 26 下培养。贮存 原种和 栽培 种在0 4 下贮 存，贮存 期不 超过50 d。7 检验 母种感 官要 求见表 1。表1 羊肚菌 母种 感官 要求 项目 要求 容器 完整、无损、洁净 棉塞或无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和过滤要求 培养基灌入量 为试管总容积的 1/4，培养皿 高的的 1/3 1/2 菌种外观 菌丝生长量 长满斜面或平板 菌丝体特征 菌丝洁白、绒毛状、生长致密、均匀、健壮 菌丝体表面 均匀、舒展、平整 菌丝体分泌物 无 菌落边缘 整齐 杂菌菌落 无 斜面背面
14、外观 培养基不干缩，无积水、颜色均匀、无暗斑、无色素 DB15/T 2540 2022 5 原种感 官要 求见表 2。表2 羊肚菌 原种 感官 要求 项目 要求 容器 完整、无破损、洁净 棉塞或无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶（袋）口的距离（50 5）mm 菌种外观 菌丝生长量 长满容器 菌丝体特征 菌丝体白、生长旺健、整齐 培养物表面菌丝体 生长均匀、无高温抑制线 培养基及菌丝体 紧贴瓶壁、无干缩 菌丝分泌物 无、允许少量无色至棕黄色水珠 杂菌菌落 无 子实体原基 无 栽培种 感官 要求 见表 3。表3 羊肚菌 栽培 种感 官要 求 项目 要求 容器 完整、无破损 棉塞或无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶（袋）口的距离（50 5）mm 菌 种 外 观 菌丝生长量 长满容器 菌丝体特征 生长均匀、色泽一致、无角变、无高温抑制线 培养基及菌丝体 紧贴瓶壁、无干缩 菌丝分泌物 无 杂菌菌落 无 子实体原基 允许少量、出现原基种类小于等于5%8 入库 检验完 成后 及时 入菌 种库，详细 记录 各生 产环 节，菌种库 温度0 4，避光，适当 通风，定 期对空间 进行 杀菌 处理。
