1、 ICS 65.020.30 CCS B43 4113 南阳市地方标准 DB 4113/T 008 2021 牛人工授 精技术操 作规范 2021-11-22 发布 2021-11-30 实施 南阳市市 场监督 管 理局 发 布 DB 4113/T 008 2021 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分：标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定起草。本文件 由南 阳市 农业 农村 局提出 并归 口。本文件 起草 单位：南 阳黄 牛科技 中心、南 阳市 动物 卫生监 督所、南 阳市 宛城 区动物 卫生 监督 所、内乡县动 物疫 病预 防控 制中
2、心、南 阳市 卧龙 区石 桥镇 农业农 村服 务中 心、桐柏 县农业 农村 局。本文件 主要 起草 人：王海 利、王 伟廉、孙 志和、李 清兰、马震、丁 煦峰、陈 希鹃、胡军、张 蔚、张云征、苏新 路、唐建 伟、杜世泰、王 哲、徐玉 村、张宾、马军 生、姜林、王 健懿、袁虎。DB 4113/T 008 2021 1 牛人工授 精技术 操作规范 1 范围 本文件 规定 了 牛 人工 授精 站（点）设施 设备、输精 前准备、输 精、繁 殖母 牛 配种年 龄及 体重、发 情鉴定、授精 时间、妊 娠检 查 等要 求。本文件 适用 于南 阳市 牛人 工授精 操作 运用。2 规范性 引用 文件 下列文 件
3、中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB 4143 牛冷 冻精 液 GB/T 5458 液 氮生 物容 器 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。冻精 将收集 的原 精液 用稀 释液 等温稀 释、平衡 后快 速冷 冻、分 装，在液 氮中 保存。输精 用器 械将 公畜 精液 输送 到发情 母畜 子宫 适当 部位 的操作。发情 母牛发 育到 一定 时期，表 现出周 期性 的生
4、理活 动。妊娠 指从受 孕至 分娩 的生 理过 程。配种 使雌雄 动物 的生 殖细 胞结 合而繁 殖后 代。冻精解 冻 使冻精 重新 恢复 活力 的处 理方法。4 人工授 精站（点）设 施设 备 DB 4113/T 008 2021 2 贮存要 求 冻精贮 存在 装有 足够 液氮 的生物 贮存 容器 中，定 期检 查，及时 添加 液氮（液氮 保 存按照GB/T 5458）。设施设 备 应配备 液氮 生物 容器、显 微镜、输 精枪、输精 枪套、解 冻盒、润滑 油、镊 子、细 管剪、温度 计、一次性长 臂塑 料手 套或 长臂 胶手套 等器 具。5 输精前 的准 备 输精设 备的 清洗 消毒 5.1
5、.1 各种输 精设 备使 用后，先 用肥皂 水 或 2 的小 苏打 水洗刷 除污，再用 温开 水 冲洗干 净。5.1.2 玻璃、金属 器械、胶 球(用 纱布包 好)和布 类用 蒸汽 灭 菌 30min 或干 热灭 菌。金 属和玻 璃器 械也可用 75 的酒 精擦 拭和 吸 注消毒，并 在酒 精火 焰上 烘干。5.1.3 每 1 头母 牛应 使用 1 支 消 毒过的 输精 枪、一次 性使 用塑料 外套 管、长臂 塑料 手套或 长臂 胶手 套（消毒）。母牛准 备 5.2.1 将输精 母牛 固定 在保 定架 内，用 细绳 拴好 尾巴 拉向 一侧固 定。5.2.2 对输精 母牛 肛门 及外 阴清 洗、
6、消 毒后 擦干。冻精准 备 5.3.1 冻精应 来自于 取得 省级以 上农业 农村行 政主 管部门 颁发的 种畜 禽生 产经营 许可证 的冻 精 生产站（点）。5.3.2 冻精冻 后活 力不 能低 于 0.35，每 周应检 查一 次冻 精 的活力。每次 输精 量为 冻 精细 管 1 支。（冻精要求 按 照GB 4143）5.3.3 根据母 牛的 品种、胎 次、往配情 况决 定冻 精的 选择。冻精解 冻 5.4.1 解冻盒 内水 浴温 度 应 在38 40 范围 内。5.4.2 取冻精 取下液 氮罐 盖，选择 冻精 袋，将 冻精 袋提 到冷 冻线 上方（不能 把冻 精袋 拿出 罐口外），用镊 子
7、选 出所需冻 精细 管，取出 冻精 细管迅 速放 入解 冻盒 内(选、取冻 精应 在5s 内完 成）。5.4.3 解冻 轻轻摇 动解冻 盒15s，放 置15min 20min 之内 使用（解冻后 的冻精 细管 在使用 前应镜 检活力，活 力不低于0.35），解冻 后的 冻精细 管不 应再 冷冻。5.4.4 装枪 DB 4113/T 008 2021 3 将冻精 细管 从解 冻盒 中取 出，干 净纸 巾吸 干，核对 冻精细 管标 记的 品种、生 产日期 及公 牛号。将 输精枪回 拉撞 针至120mm 180mm，快 速将 细管 棉塞 端穿 入枪内。把装 好的 输精 枪 垂直握 在齐 眼高，用清
8、洁的细管 剪 剪 去细 管的 封口 端。用 带有 防污 外套 膜的 枪 套将枪 管套 上，用手 捻枪 套 向下直 到枪 的圆 锥座 处，并确认 紧固。将 装好 的输 精枪放 在保 温箱 上备 用。6 输精 配种员 准备 配种员 将手 指甲 剪短、磨 光，长 臂手 套套 在拟 进入 直肠操 作的 手臂 上，放入 温水中 加温，并 涂少 量润滑油。输精操 作 6.2.1 拟进入 直肠操 作的 手缓缓 按摩外 阴部，并拢 手指形 成锥形，缓缓 进入 直肠，直至手 腕位置，手腕按压 外阴，使外 阴张开，另一 只手持 输精 枪斜向 上 30 插入 阴道（输精 枪 头在进 入阴道 时不 能与 阴门外壁 接
9、触）。当 输精枪 进入阴 道 15cm 20cm，将 枪的后 端适当 抬起，撕掉 防污外 套膜，使枪 头从 外套膜前 端穿 出，然后 继续 向前推 至子 宫颈 外口。6.2.2 当枪头 到达子 宫颈 时，能 感觉到 不同于 软组 织的较 硬的子 宫颈穹 隆顶 住输精 枪。这 时在直 肠 内的手握 住子 宫颈，用枪 头 轻柔触 碰穹 隆并 找到 子宫 颈口，当 枪通 过子 宫颈 口 时，用直 肠内 手的 中指 和 食指将子 宫颈 的前 端定 位，另一只 手轻 柔将 枪向 前推 进，推 进不 畅时，左 手虚 握子宫 颈使 之平 直，轻 柔 试探推进，直 到枪 头到 达子 宫体部 位（如有 必要 可
10、小 心地推 到卵 泡端 子宫 角处）。6.2.3 排放精 液应 缓慢，排完 后 停顿 5s，然 后将 枪缓 缓拉 出，手 臂慢慢 地从 直肠 中 退出。检查输 精枪套内是 否有 精液 回流，如 有回流，重 新输 精一 支。检查枪 套管 上是 否沾 有异 常血液 或脓 液。做好 记录。6.2.4 使用过 的空 冻精 管、枪套、纸巾、脏手 套放 入指 定地 点或污 物箱 内。对输 精枪 进行清 洗和 消毒，放入工 具箱 内。输精操 作注 意事 项 6.3.1 操作动 作温 和、轻柔，不 能过于 用力。6.3.2 操作过 程要 疏缓 放松，不 能着急。7 配种年 龄及 体重 配种年 龄 南阳牛 因导
11、 入外 血不 同。其配种 年龄 不同，一 般比 较早熟 的改 良肉 牛（如导 入皮埃 蒙特 牛、安格 斯牛 外 血）应 在14 15月 龄初 配，相 对 晚熟 改 良肉 牛（如 导入 西 门塔 尔 牛、夏洛 莱 牛外 血）应 在1518月龄初 配。配种体 重 母牛体 重应 达 到350kg 400kg（成年 母牛 体重 的70%以上）。8 发情鉴 定 DB 4113/T 008 2021 4 外部观 察法 8.1.1 发情初 期：母牛兴 奋不 安，追爬 其他母 牛，但拒绝 爬跨；阴户肿 胀，粘液透 明，不 呈牵丝 状，粘性强。8.1.2 发情盛 情：母牛 温顺，接 受爬跨，阴 户肿 胀。粘液
12、透明，量多，呈 牵丝 状，粘性强。8.1.3 发情末 期：母牛 拒绝 爬跨，阴户 肿胀 消退，粘 液半 透明、粘稠，粘 性差，牵 丝较短。试情法 将试情 公牛 接近 母牛，如 母牛喜 靠公 牛，并作 弯腰 弓背姿 势，表示 该母 牛可 能发情。阴道检 查法 用消毒 的阴道 开膣 器来观 察阴道 的粘膜、分 泌物和 子宫颈 口的变 化。发情母 牛阴道 黏膜充 血潮 红，表面光 滑湿 润；子 宫 颈外 口 充血、松弛、柔软 开张，排 出大量 透明 的纤 维性 粘液，如玻棒 状（俗称 吊线），不易折 断。粘液 最初 稀薄，随着 发情 时间 的推 移，逐渐变 稠，量也 由少 变多，到发 情后 期，量
13、逐渐 减 少且粘性 差，颜色 不透 明，有时含 淡黄 色细 胞碎 屑或 微量血 液。不发 情的 母牛 阴道苍 白、干燥，子 宫 颈 口紧闭，无粘 液流 出。直肠检 查法 检查者 应将 指甲 剪短、磨 光、戴上 长臂 手套，涂润 滑 剂，先用 手抚 摸肛 门，然 后 将手指 并拢 成锥 形，以缓慢 的旋 转动 作伸 入肛 门，掏 出粪 便；再 将手 伸 入肛门，手 掌展 平，掌 心 向下，按压 抚摸，在骨 盆 腔底部可 摸到 一个 长圆 形质 地较硬 的棒 状物，即为 子宫 颈。沿子 宫颈 再向 前摸，在 正前方 可摸 到一 个浅 沟，即为角 间沟。沟 的两 旁为 向前向 下弯 曲的 两侧 子宫
14、 角；沿 着子 宫角 大弯 向下 稍向外 侧，可摸 到卵 巢。用手指检 查子 宫角 的形 状、大小、反应 以及 卵巢 上卵 泡的发 育情 况，来判 断母 牛的发 情。8.4.1 发情判 定 8.4.1.1 发情初 期：在子 宫角 的两 侧，可 摸到 两个 卵巢，卵 巢上发 育的 卵泡 突出 卵巢 表面，光滑，触 8.4.1.2 摸时略 有波 动，卵泡 直 径0.5cm 左右，触 诊时 为一 软化点。8.4.1.3 发情盛 期：卵泡 增大 到 1cm 1.5cm，呈圆 形，明显 突出于 卵巢 表面，波 动明 显。8.4.1.4 发情末 期：卵泡 不再 增大，泡壁 变薄，紧 张度 增加，有一 触即
15、 破之 感。8.4.1.5 不发情 的母 牛，子宫 颈细 而硬，子宫 较松 弛，收缩 反应差。8.4.2 直肠检 查注 意事 项 8.4.2.1 在直肠 内触 摸时 应用 指肚 进行，不应 用手 指强 抓，以免损 伤直 肠粘 膜。在母 牛努责（排 粪动 8.4.2.2 作）或 肠管 收缩 时不 应将 手臂硬 向里 推，可待 努责 或收缩 停止 后再 继续 检查。8.4.2.3 一般发 情正 常的 母牛 采用 外部观 察就 可准 确的 鉴定 发情，对屡 配不 孕的 牛采 用直肠 检查，但 8.4.2.4 应动作 轻柔，防 止触 破卵 泡，并 结合 外部 表现 判定 发情及 预测 排卵 时间。9
16、输精时 间 应在发 情结束 或即 将结束 时输精。即 早 上发 情的牛 在当天 下午配 种，下午发 情的牛 在第2 天早上 配种。年 轻母 牛应 授精 晚，老龄母 牛应 授精 早。DB 4113/T 008 2021 5 10 妊娠检 查 外部观 察法 10.1.1 母牛配 种 后2、3 个 情期 仍 未出现 发情 者，可初 步认 为妊娠。10.1.2 母牛妊 娠3 个月 后，性情 变得温 顺，食欲 增加，被 毛 出现光 泽。妊 娠 5、6 个 月 后，腹 围增 大，右侧腹 壁突 出，可在 腹壁 触到或 看到 胎动。直肠检 查法 10.2.1 母牛妊 娠1 个月，两 侧子 宫角不 对称，角 间
17、沟 清楚。孕角 较空 角稍 大变 粗、柔软，有液 体波 动感，弯 曲度 变小。孕 侧卵 巢较大，有 黄体 突出 于表 面。子 宫中 动脉 如麦 秆粗。10.2.2 母牛妊 娠 2 个 月，孕角 比 空角粗 约两 倍。角间 沟平 坦。孕 角薄 软，波动 明显。孕侧 卵巢 较大，有黄体。孕 侧子 宫中 动脉 增粗一 倍。10.2.3 母牛妊 娠3 个月，孕 角大 如婴儿 头，波动 感明 显，子宫开 始沉 入腹 腔，角间 沟已摸 不清 楚。孕侧子宫 中动 脉增 粗2 至3 倍，有 时可 摸到 特异 博动。激素诊 断法 在配种21d 27d，肌 肉注 射 促黄体 素释 放激 素200ug 500ug，
18、观 察35d 内是 否返 情，返情 即为 空怀，否则为 妊娠。阴道检 查法 母牛配 种后1 个月进 行检 查，已妊 娠的母 牛是 当开膣 器插入 阴道时，阻 力明显，有干 涩之感；阴 道黏膜苍 白，无光 泽；子宫 颈口偏 向一 侧，呈闭 锁状 态，为 灰暗 浓稠 的黏 液所 封闭。实验室 诊断 法 收取配 种30d 母 牛鲜 尿液10ml，盛 入试管 中，然后滴 入2ml 7 碘酒 溶液，充分 混合5min 6min，在亮处观 察试 管中 溶液 的颜 色，呈 暗紫 色为 妊娠；不 变色，或稍 带碘 酒色 为未 妊娠。B 超诊 断法 线阵超 声波 法用 于18d120d 妊娠 诊断，扇形 超声 波 法用于 怀孕 后30d 120d 妊 娠诊断。其操 作：超声探头 慢慢送 入直 肠，隔 着直肠 壁依次 扫查 左右子 宫 角、卵巢，对图 像不确 定时，反复缓 慢移 动探头。依据特 有的 波型 图像 判断 空怀或 怀孕。11 记录 做好配 种生 产记 录。见附 录A。DB 4113/T 008 2021 6 A A 附录A（资料 性）母牛配 种记 录表 见表A.1。表A.1 编号 时间 场名称（户主）品种 年龄 体重 胎次 发情时间 输精时间 种牛编号 冻精来源 复配时间 产犊日期 犊牛性别
