1、I C S 6 5 . 0 2 0 . 9 9 C C S B 6 2 DB50 重 庆 市 地 方 标 准 D B 5 0 / T 1 1 4 8 2 0 2 1 白 掌 种 苗 组 培 快 繁 技 术 规 程 2021 - 1 1 - 01 发 布 2 0 2 2 - 0 2 - 0 1 实 施 重 庆 市 市 场 监 督 管 理 局 发 布D B 5 0 / T 1 1 4 8 2 0 2 1 I 前 言 本 文 件 按 照 G B / T 1 . 1 2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分 ： 标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定 起 草
2、。 本 文 件 由 重 庆 市 农 业 农 村 委 员 会 提 出 并 归 口 。 本 文 件 起 草 单 位 ： 重 庆 市 农 业 科 学 院 。 本 文 件 主 要 起 草 人 员 ： 杨 小 艳 、 谢 树 章 、 王 忠 伟 、 韩 垚 、 林 清 、 吴 红 、 王 虹 。D B 5 0 / T 1 1 4 8 2 0 2 1 1 白 掌 种 苗 组 培 快 繁 技 术 规 程 1 范 围 本 文 件 规 定 了 白 掌 种 苗 组 培 快 繁 的 设 施 设 备 、 操 作 流 程 等 技 术 要 求 。 本 文 件 适 用 于 白 掌 种 苗 的 生 产 。 2 规 范 性 引
3、 用 文 件 下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款 。 其 中 ， 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件 ； 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。 G B / T 6 6 8 2 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法 G B / T 8 3 2 1 农 药 合 理 使 用 准 则 G B 1 9 4 8 9 实 验 室 生 物 安 全 通 用 要
4、 求 N Y / T 4 9 6 肥 料 合 理 使 用 准 则 通 则 3 术 语 和 定 义 下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件 。 3 . 1 白 掌 S p a t h i p h y l l u m f l o r i b u n d u m 又 名 白 鹤 芋 、 苞 叶 芋 、 银 苞 芋 ， 为 天 南 星 科 白 鹤 芋 属 多 年 生 常 绿 草 本 花 卉 。 3 . 2 组 培 快 繁 t i s s u e c u l t u r e a n d r a p i d p r o p a g a t i o n 从 植 物 体 分 离 出 符 合 需 要
5、 的 器 官 或 组 织 材 料 ， 通 过 无 菌 操 作 ， 在 人 工 控 制 条 件 下 进 行 离 体 培 养 ， 在 短 时 间 内 获 得 大 量 遗 传 性 一 致 个 体 的 方 法 。 3 . 3 外 植 体 e x p l a n t 从 自 然 生 长 的 活 体 植 物 上 获 取 的 用 于 建 立 植 物 组 培 快 繁 体 系 的 起 始 材 料 。 3 . 4 组 培 苗 p l a n t l e t 利 用 植 物 组 织 、 器 官 或 细 胞 等 作 为 起 始 材 料 ， 通 过 植 物 组 织 培 养 方 式 生 产 获 得 的 植 株 。 4 缩
6、 略 语D B 5 0 / T X X X X X X 2 下 列 缩 略 语 适 用 于 本 文 件 。 6 - B A ： 6 - 苄 基 腺 嘌 呤 （ 6 - b e n z y l a m i n o p u r i n e ） I B A ： 吲 哚 丁 酸 （ 3 - i n d o l e b u t y r i c a c i d ） M S ： 一 种 常 用 基 本 培 养 基 （ M u r a s h i g e 和 S k o o g （ 1 9 6 2 ） ） N A A ： 萘 乙 酸 （ n a p h t h y l e n e a c e t i c a
7、c i d ） T w e e n - 2 0 ： 聚 氧 乙 烯 失 水 山 梨 醇 单 月 桂 酸 酯 （ P o l y o x y e t h y - l e n e ( 2 0 ) S o r b a i t a n M o n o l a u r a t e ） 5 设 施 设 备 5 . 1 设 施 要 求 包 括 准 备 室 、 药 品 室 、 培 养 基 配 制 室 、 灭 菌 室 、 洗 涤 室 、 更 衣 室 、 接 种 室 、 培 养 室 、 驯 化 室 等 ， 根 据 生 产 工 艺 流 程 （ 生 产 流 水 线 ） 有 序 排 布 。 接 种 室 和 培 养 室
8、应 防 潮 、 隔 热 保 温 、 保 持 清 洁 ， 定 期 进 行 环 境 消 毒 。 周 边 环 境 应 干 燥 、 安 静 、 通 风 透 光 、 空 气 清 新 。 5 . 2 仪 器 设 备 要 求 包 括 高 压 灭 菌 器 、 紫 外 灯 、 臭 氧 发 生 器 、 电 子 天 平 、 p H 计 、 冰 箱 、 微 波 炉 、 超 净 工 作 台 、 微 量 移 液 器 、 接 种 器 具 （ 电 热 杀 菌 器 ） 、 石 英 玻 璃 珠 、 枪 状 镊 子 、 手 术 刀 柄 刀 片 、 切 割 碟 子 、 温 度 计 、 光 照 培 养 箱 、 培 养 架 （ 包 括
9、日 光 灯 ） 、 调 速 振 荡 器 、 组 培 瓶 、 试 管 、 盛 装 器 皿 （ 烧 杯 、 试 剂 瓶 等 ） 、 计 量 器 皿 （ 量 筒 、 容 量 瓶 等 ） 以 及 其 他 常 用 消 耗 品 等 。 仪 器 设 备 应 符 合 G B 1 9 4 8 9 的 规 定 。 6 组 培 快 繁 操 作 流 程 6 . 1 接 种 前 准 备 6 . 1 . 1 培 养 基 配 制 和 灭 菌 6 . 1 . 1 . 1 培 养 基 配 制 芽 诱 导 培 养 基 ： M S + 1 m g / L 6 - B A + 0 . 0 5 m g / L N A A + 3 0
10、g / L 蔗 糖 + 7 g / L 琼 脂 ， p H 值 为 5 . 6 5 . 8 。 继 代 增 殖 培 养 基 ： M S + 0 . 4 m g / L 6 - B A + 0 . 0 5 m g / L I B A + 3 0 g / L 蔗 糖 + 7 g / L 琼 脂 ， p H 值 为 5 . 6 5 . 8 。 生 根 培 养 基 ： 1 / 2 M S + 0 . 0 5 m g / L I B A + 3 0 g / L 蔗 糖 + 7 g / L 琼 脂 ， p H 值 为 5 . 6 5 . 8 。 配 制 培 养 基 用 水 应 不 低 于 G B / T
11、6 6 8 2 规 定 的 三 级 水 。 6 . 1 . 1 . 2 培 养 基 灭 菌 培 养 基 配 制 完 后 ， 分 装 至 组 培 瓶 中 。 1 2 1 高 压 灭 菌 1 5 m i n 2 0 m i n ， 取 出 冷 却 备 用 。 6 . 1 . 2 超 净 工 作 台 消 毒 超 净 工 作 台 （ 或 洁 净 无 菌 接 种 室 ） 提 前 3 0 m i n 打 开 紫 外 灯 ， 灭 杀 菌 3 0 m i n 后 关 掉 紫 外 灯 ， 然 后 开 机 通 风 ， 打 开 接 种 用 电 热 灭 菌 器 ， 1 5 m i n 2 0 m i n 后 人 员
12、才 可 进 入 室 内 。 用 7 5 % 酒 精 擦 洗 超 净 工 作 台 台 面 消 毒 。 6 . 1 . 3 接 种 人 员 准 备D B 5 0 / T 1 1 4 8 2 0 2 1 3 接 种 人 员 应 在 更 衣 室 更 换 拖 鞋 、 穿 白 大 褂 （ 或 接 种 服 ） ， 戴 上 帽 子 和 口 罩 后 进 入 接 种 室 （ 或 经 过 风 淋 室 后 进 入 接 种 室 ） ， 操 作 前 和 操 作 中 经 常 用 7 5 % 酒 精 棉 球 擦 手 。 6 . 2 外 植 体 接 种 6 . 2 . 1 外 植 体 的 选 择 应 选 择 长 势 健 壮 、
13、 叶 色 浓 绿 有 光 泽 、 花 朵 大 、 无 病 虫 害 的 优 良 植 株 带 侧 芽 的 当 年 生 茎 段 。 6 . 2 . 2 外 植 体 的 消 毒 灭 菌 处 理 将 选 好 的 白 掌 侧 芽 茎 段 去 除 叶 片 后 ， 用 自 来 水 冲 洗 干 净 ， 切 除 在 外 暴 露 的 表 皮 ， 用 7 5 % 酒 精 浸 泡 消 毒 1 m i n ， 倒 出 酒 精 后 ， 用 无 菌 蒸 馏 水 冲 洗 2 次 ， 再 用 3 % 次 氯 酸 钠 溶 液 （ 现 配 现 用 、 避 光 ） 加 1 滴 2 滴 T w e e n - 2 0 消 毒 1 5 m
14、 i n 2 0 m i n ， 并 不 断 摇 动 。 将 次 氯 酸 钠 溶 液 倒 出 ， 用 无 菌 蒸 馏 水 冲 洗 5 次 6 次 ， 用 无 菌 滤 纸 吸 干 水 分 。 6 . 2 . 3 接 种 器 械 灭 菌 接 种 器 械 先 用 7 5 % 酒 精 擦 拭 ， 再 放 在 酒 精 灯 外 焰 上 灼 烤 ， 时 间 1 0 s 。 若 使 用 接 种 用 电 热 灭 菌 器 ， 接 种 器 械 先 用 7 5 % 酒 精 擦 拭 ， 待 电 热 灭 菌 器 温 度 升 至 2 5 0 3 0 0 ， 再 插 入 接 种 用 电 热 灭 菌 器 中 进 行 灭 菌 ，
15、 第 一 次 灭 菌 3 m i n 4 m i n ， 以 后 每 次 使 用 灭 菌 1 5 s 。 6 . 2 . 4 外 植 体 接 种 将 侧 芽 茎 段 平 放 在 无 菌 滤 纸 上 ， 用 解 剖 刀 剥 掉 外 层 叶 片 后 ， 切 取 顶 端 0 . 5 c m 0 . 8 c m 的 芽 组 织 ， 接 种 到 芽 诱 导 培 养 基 中 。 接 种 时 左 手 拿 组 培 瓶 ， 右 手 轻 轻 取 下 盖 子 ， 然 后 用 镊 子 将 材 料 送 入 瓶 中 ， 轻 轻 一 压 ， 使 外 植 体 与 培 养 基 紧 密 接 触 ， 并 使 外 植 体 在 瓶 内
16、 均 匀 分 布 。 接 种 完 毕 立 即 盖 上 瓶 盖 并 做 好 标 记 ， 注 明 材 料 名 称 、 接 种 日 期 、 培 养 基 类 型 、 接 种 人 等 事 项 。 6 . 3 培 养 6 . 3 . 1 芽 诱 导 外 植 体 接 种 到 芽 诱 导 培 养 基 后 ， 将 组 培 瓶 整 齐 、 均 匀 摆 放 在 培 养 架 上 ， 温 度 2 5 ， 光 照 强 度 2 0 0 0 l x 3 0 0 0 l x ， 光 照 1 2 h ， 黑 暗 1 2 h ， 诱 导 时 间 为 4 0 d 6 0 d 。 培 养 期 间 定 期 观 察 材 料 生 长 情 况
17、 ， 并 作 好 记 载 ， 如 发 现 污 染 ， 应 及 时 将 污 染 瓶 移 出 培 养 室 ， 待 高 温 灭 菌 后 清 洗 或 丢 弃 。 6 . 3 . 2 继 代 增 殖 快 繁 6 . 3 . 2 . 1 提 取 母 瓶 应 仔 细 检 查 ， 剔 除 污 染 母 瓶 。 6 . 3 . 2 . 2 取 苗 先 打 开 组 培 瓶 盖 ， 瓶 口 不 应 斜 向 外 ， 将 取 出 的 白 掌 丛 生 苗 放 于 无 菌 的 碟 子 上 分 苗 。 6 . 3 . 2 . 3 切 苗 接 种 用 解 剖 刀 将 白 掌 丛 生 苗 切 割 成 单 株 小 苗 或 小 团 块
18、 ， 每 个 小 团 块 3 株 4 株 小 芽 苗 ， 将 小 苗 或 小 团 块 接 种 到 继 代 增 殖 培 养 基 中 ， 宜 接 种 6 株 8 株 （ 团 ） / 瓶 。 接 种 完 毕 后 做 好 标 记 ， 注 明 材 料 名 称 、 接 种D B 5 0 / T X X X X X X 4 日 期 、 培 养 基 类 型 等 事 项 。 培 养 室 温 度 为 2 5 ， 光 照 强 度 2 0 0 0 l x 3 0 0 0 l x ， 光 照 1 2 h ， 黑 暗 1 2 h ， 3 0 d 继 代 一 次 。 6 . 3 . 3 生 根 壮 苗 从 继 代 增 殖
19、瓶 苗 中 提 取 母 瓶 ， 取 苗 放 置 于 无 菌 的 碟 子 上 ， 分 苗 切 取 生 长 健 壮 、 叶 色 正 常 、 叶 片 舒 展 、 适 于 生 根 的 幼 苗 接 种 到 生 根 培 养 基 中 ， 宜 接 种 1 0 株 / 瓶 。 接 种 完 毕 后 做 好 标 记 ， 注 明 材 料 名 称 、 接 种 日 期 、 培 养 基 类 型 等 事 项 。 光 照 强 度 2 0 0 0 l x 3 0 0 0 l x ， 光 照 1 2 h ， 黑 暗 1 2 h ， 3 0 d 后 检 查 幼 苗 基 部 新 根 生 长 情 况 。 其 它 操 作 要 求 参 照
20、6 . 3 . 2 。 6 . 4 组 培 苗 炼 苗 与 移 栽 管 理 6 . 4 . 1 组 培 苗 移 栽 要 求 生 根 培 养 3 0 d 后 ， 株 高 2 . 5 c m 5 . 0 c m ； 茎 干 粗 壮 ， 不 徒 长 ； 叶 数 3 片 5 片 ， 叶 色 翠 绿 ， 幼 苗 基 部 长 出 3 条 以 上 、 长 1 c m 3 c m 的 新 根 ， 根 系 粗 壮 有 活 力 。 6 . 4 . 2 炼 苗 将 生 根 后 的 瓶 苗 移 出 培 养 室 放 入 驯 化 室 松 盖 炼 苗 2 d 以 上 ， 炼 苗 时 温 度 为 2 0 2 8 ， 空 气
21、湿 度 为 6 0 % 8 0 % ， 光 照 强 度 为 3 0 0 0 l x 5 0 0 0 l x ， 保 持 环 境 洁 净 。 6 . 4 . 3 移 栽 基 质 准 备 用 粗 细 度 0 m m 1 0 m m 泥 炭 加 水 搅 拌 预 湿 ， 相 对 含 水 量 为 5 5 % 6 0 % 。 6 . 4 . 4 移 栽 用 镊 子 轻 轻 取 出 组 培 幼 苗 并 洗 净 其 根 部 培 养 基 ， 用 0 . 2 % 多 菌 灵 + 0 . 1 % 生 根 粉 溶 液 浸 泡 2 m i n 5 m i n 后 ， 种 植 至 装 有 基 质 的 5 0 孔 穴 盘
22、（ 长 宽 2 8 . 5 c m 5 4 c m ， 孔 径 3 c m 3 c m ） 中 ， 再 用 0 . 2 % 多 菌 灵 + 0 . 1 % 生 根 粉 溶 液 浇 透 基 质 。 6 . 4 . 5 移 栽 管 理 用 薄 膜 和 遮 阳 率 7 5 % 的 遮 阳 网 盖 膜 保 湿 遮 光 ， 空 气 湿 度 控 制 在 7 5 % 8 5 % ； 1 4 d 后 撤 掉 薄 膜 和 遮 阳 网 ， 不 应 强 光 直 晒 ， 保 持 基 质 湿 润 ， 养 护 温 度 为 2 5 2 8 ； 当 小 苗 有 新 根 和 新 叶 长 出 时 开 始 施 肥 。 选 用 肥 料 应 符 合 N Y / T 4 9 6 的 规 定 ， 病 虫 害 防 治 选 用 农 药 应 符 合 G B / T 8 3 2 1 的 规 定 。 6 . 5 种 苗 出 圃 当 种 苗 株 高 5 c m 8 c m ， 苗 健 壮 挺 拔 ， 形 态 完 整 ， 叶 数 5 片 1 0 片 ， 叶 色 浓 绿 有 光 泽 ， 根 系 成 团 时 可 出 圃 。
