1、 ICS 65 . CCS B 0 广 Tec h 2021 - 02 0. 01 0 0 西 壮 陆 生 h nical s p - 11 - 27 发 壮族 生 野 生 p ecifica t 发 布 广西 壮 族 自 生 动 物 t ion for inf e 壮 族自治 区 自 治 物 疫 病 sampli n e ctious 区 市场监 督 区 病 采 样 n g of te disease s 督 管理局 地 D B 样 技 术 r restria s 发 布 45 方 标 B 45/T 24 0 术 规 范 a l wildl i 2021 - 1 布 5 标准 0 2 202
2、1 范 i fe-born e 1 2 - 25 实 准 e 实 施D B4 5/ T 24 022 02 1 I 目次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引 用文件 . 1 3 术语和定 义 . 1 4 采样要求 . 1 5 采样设备 . 2 6 采样 . 2 7 样品标记 和采样记录 . 5 8 样品保存 . 6 9 废弃物的 处置 . 6 10 安全操 作要求 . 6 附录 A（资料 性） 陆生 野生动物疫病样品采集工作用表 . 8 DB 45 /T 2 40 2 20 21 II 前言 本文件按照GB/ T 1 .12 0 20标准化工作导则 第1部分：标 准化文件的 结构和
3、起草 规则的规 定 起草。 本文件由广西壮族自治区林业局提出、归口并宣贯。 本文件起草单位：南宁市动物园、广西壮族自治区陆生野生动物救护研究与疫源疫病监测中心。 本文件主要起草人：吴俊仪、陈月妃、阙腾程、雷伟、黄宁、杨露、陈盘余、吴媛琼、何梅红、 农汝、冯华娟、陆兵兵、曹佳媛、黎寿生。 D B4 5/ T 24 022 02 1 1 陆生野生动物疫病采样技术规范 1 范围 本文件规定了陆生野生动物疫病采样技术的术语和定义、 采样要求、 采样设备、 采样、 样品标记和 采样记录、样品保存、废弃物的处置、安全操作要求。 本文件适用于广西区内陆生野生动物疫病样品的采集。 2 规范性引用文件 下列文件
4、中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件； 不注日期的引用文件， 其最新版本 （包括所有的修改单） 适用于本 文件。 LY /T 1 95 9 陆生野生动物疫源疫病监测技术规范 农业农村局农医发20 0 52 5号 病 死和死因不明动物处置办法（试行） 农业农村局农医发20 1 72 5号 病 死动物无害化处理技术规范 3 术语和定义 LY /T 1 95 9界 定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3 .1 陆生野生动物 te rr es t ri al w il dl i fe 依靠陆地、 水面进行生存、 繁衍的野
5、生动物， 包括哺乳类、 鸟类、 爬行 类、 大部分两栖类和部分无 脊椎动物。本文件特指哺乳类、鸟类、爬行类和两栖类动物。 3 .2 陆生野生动物疫病 t err es tr ia l wil d- bo rn e inf ec ti ou s dis ea se s 在陆生野生动物之间自然传播、 流行， 对野生动物种群构成威胁或可能传染给人类和饲养动物的传 染病。 4 采样要求 4 .1 审批要求 采集疫病样品，应报告和获得审批，采样程序应符合有关法律法规的要求。 4 .2 强度要求 4. 2. 1 采样动物数量参照 L Y/ T 1 95 9 的 规 定。 4. 2. 2 应采集病变特征明显
6、的组织，相同的样品不少于 2 份。 4. 2. 3 50 m 内分点 采集土壤 5 份，每份 20 g50 g；1 00 m 内分点采集 中 层水5 份，每份 50 0 mL。 4. 2. 4 空气流通不良的饲养环境可采集空气样品， 用平板暴露法采集空气，采 样 高度距离地面 80 cm 15 0 cm ，对角线 分点放置4 5 份营养琼 脂培养基，暴露5 mi n 。 DB 45 /T 2 40 2 20 21 2 4 .3 时间要求 4. 3. 1 陆生野生动物死 亡后 ，应 立即 采集样品， 夏季 不应 超 过6 h ， 冬季 不应 超 过2 4 h 。 4. 3. 2 用于 免 疫 效
7、果评价 的样品，应在 免 疫 后 21 d 采 集。 4 .4 其他要求 4. 4. 1 怀疑患 有 炭疽等 不 宜解剖 的陆生野生动物，应由 具 有资 质 的单位或部 门 进行采样。 4. 4. 2 采样人 员 应 经 过 专 业技术 培训 ， 熟悉 采样 器具 的 使 用， 掌握正确 的采样 方 法。 4. 4. 3 采样人 员 应 做好个 人 防 护。 4. 4. 4 所有容 器 和采集 器械 应 经 过 消毒且完整 无 缺 ， 避免 样品的 交叉污 染。 5 采样设备 5 .1 保定器械 麻醉吹管 、 麻醉针等 。 5 .2 采样器械 离 心 机 、 镊子 、 手 术 剪 、 酒精灯
8、、 酒精棉 、 碘酊棉 、注 射器 、 一次 性采 血针 、 血液 生化 管 、T 形管 、 U形管 、不 同型 号的 密封袋 、 灭菌棉签 、保存 液等 。 5 .3 解剖器械 解剖剪 、 手 术 刀柄 和 刀片 、 止血钳 、 解剖刀 、 钢锯 、 骨剪 、 尺子 、 酒精灯 、 接 种 环 、病 理 组织 存 放 瓶 、 细菌培 养 基 、 组织固 定 液等 。 5 .4 防护物品 一次 性口 罩 、 N 95 口 罩 、 一次 性 帽套 、 一次 性 连体防 护 服 、 一次 性乳 胶手套 、 胶鞋 、 一次 性 隔离衣 、 一次 性 防 水 鞋套 、 免洗消毒液 、护 目镜等 。 5
9、 .5 记录材料 记号 笔 、采样单、标 签纸 、记录本 等 。 5 .6 其他物品 样品保存 箱 、试 管架 、 胶布 、 封 口 膜 、 封 条、 冰袋 、医 疗 废物 袋等 。 6 采样 6 .1 体液样品 6 .1 .1 血液样品 6 .1 .1 .1 采血部位 D B4 5/ T 24 022 02 1 3 陆生哺乳动物可选择动脉、 静脉采血； 鸟类动物可选动脉、 静脉和心脏采血； 啮齿动物可从尾尖采 血或是眼窝内的血管丛采血；爬行动物可从尾静脉采血；两栖动物可从心脏采血。 6 .1 .1 .2 采血方法 对采血部位进行清理消毒， 待干燥后进行采血， 将血液滴到或抽入试管内。 鸟类等
10、少量血清样品的 采集，可用塑料T形管采 集。 6 .1 .1 .3 血液处理 6. 1. 1. 3. 1 全 血 进行血液学分析， 细菌、病 毒或原虫培养， 用全血样品。 所采集的血液应装入抗凝管， 摇匀， 低温 保存备用。血液寄生虫样品应采集末梢血液直接涂片固定备用。 6. 1. 1. 3. 2 血 清 分离血清的样品不加抗凝剂 ， 采集的血液应在室温下静置， 待血清析出后， 收集备用； 或进行离心 分离。 6. 1. 1. 3. 3 血 浆 所采集的血液应装入抗凝管，摇匀，离心抽取上清液。 6 .1 .2 胃液 6 .1 .2 .1 活体动物 可安全保定的野生动物， 将胃管插入胃内用注射器
11、抽取； 或是将胃管外端连接在吸引器的负压瓶上， 加压后，取胃液。 6 .1 .2 .2 死亡动物 解剖后直接提取胃液。 6 .1 .3 胆汁、脓液、粘液或关节液 经烫烙等方法消毒后，抽取所需样品，密封待用。 6 .1 .4 乳汁 应将乳房洗净消毒， 去除最初的乳汁后， 采集适量乳汁置于灭菌器具中。 进行血清学检验的乳汁不 应冻结、加热或强烈震动。 6 .1 .5 精液 活体动物可用假阴道法、电刺激法 等人工方法采集；死体则消毒后从睾丸直接抽取。 6 .2 组织样品 6 .2 .1 皮肤及附属组织 DB 45 /T 2 40 2 20 21 4 宜 采集病 变 的 皮肤 包括 痂皮 、 未破裂
12、水 泡 的水 泡液 、水 泡皮 、 羽毛 用 消毒 的 器械直接 采 取皮肤 及 皮 肤 附 属 组织 ， 放入经消毒 过的保存容 器 中。 6 .2 .2 肌肉及实质器官 切开 皮肤 ，无 菌取 肌肉 和 器 官 ， 密封低温 保存。 剖 开腹腔时 ，不要 损坏肠 道 。 6 .2 .3 胃肠道 选择 病 变 最明 显 的 胃 肠 道 部分， 灭菌 生理 盐 水 冲 洗 弃 去 内容物， 剪取胃 肠 道组织密封低温 保存。 6 .2 .4 脑、脊髓 较小 的动物， 取整个 头 部， 无 菌 纱 布 包 裹 并 密封待 用； 较 大的动物， 可 开颅 无 菌取 样， 置于保存 液 中备用。 6
13、 .3 内容物 6 .3 .1 肠内容物 烧 烙 肠壁 表面， 抽取 肠 内容物置于保存 液 中；或结 扎肠 管 两 端 ， 从 两 端剪 断 密封低温 保存。 6 .3 .2 胃内容物 可安全保定的 反刍 动物，可 从 口 腔 采集 反刍 的 食团 。其 他 动物可 插入胃管抽取胃液 。 6 .4 拭子及镜检样品 6 .4 .1 呼吸道拭子 将灭菌棉 拭 子插入 鼻腔 、 咽喉 或 气管 内， 轻轻旋转 3 圈粘 取 分 泌 物， 将 样品 端剪 下， 放入 保存 液 中， 密封 。 6 .4 .2 肛门或泄殖腔拭子 将灭菌棉 拭 子插入 肛 门 或 泄殖腔 内1 cm 左右 ， 轻轻旋转
14、3 圈粘 取 分 泌 物， 将 样品 端剪 下， 放入 保存 液 中， 密封 。 6 .4 .3 生殖道拭子 将灭菌棉 拭 子 粘 取 生 殖 道 、 阴道 分 泌 物或包 皮 冲 洗液 ， 将 样品 端剪 下， 放入 保存 液 中， 密封 。 6 .4 .4 眼睛拭子 将灭菌棉 拭 子 轻轻擦拭 眼 结 膜 表面 后 ， 将 样品 端剪 下， 放入 保存 液 中， 密封 。 6 .4 .5 物体表面拭子 物 体 面 积 10 0 cm 2 ，应 取 全部物 体 表面；物 体 面 积 10 0 cm 2 ，则 取 10 0 cm 2 。用5 cm 5 cm 的标准 灭 菌 规 格 板 ， 放
15、在 被 检 物 体 表面，用 浸 有生理 盐 水采样 液 的 棉 拭 子 1 支 ，在 规 格 板 内 横竖往返均 匀涂 擦 5 次 ，并 随 之 转 动 棉 拭 子 ， 连 续 采样4 个 规 格 板 。 门 把 手等 不规则物 体 表面用 灭菌棉 拭 子直接涂 擦 采样， 放入 保存 液 中， 密封 。 6 .4 .6 培养样品 D B4 5/ T 24 022 02 1 5 用灭菌接种环经消毒部位插入，提取病料接种在培养基上，密封备用。 6 .4 .7 镜检样品 6 .4 .7 .1 直接镜检 采集病变组织碎屑、体液等，置载玻片上稀释，火焰固定后密封保存。 6 .4 .7 .2 病理切片
16、镜检样品 采集病灶 及 正 常 组织交 界处的组织 块 ， 组织块厚 度 不 超 过 0.5 cm ， 组织块 避免挤 压 、 刮摸和水 洗 ， 放入10福 尔马林溶液中固定。冷冻切片样品，直切采集组织块密封，0 4 保存，24 h内 送检。 6 .5 排泄物 6 .5 .1 粪便样品 应选择新鲜 有患病特征 的粪便，可 用灭菌棉签 取粪便放入 盛有灭菌的30%甘油磷酸缓冲盐水保 存液 中送检。 6 .5 .2 尿液 活体动物直接收集，宜取晨尿；死体，解剖后消毒膀胱表面直接抽取。 6 .6 其他样品 6 .6 .1 动物胚胎 采集整个胚胎，密封打包后装入器具内低温保存。 6 .6 .2 寄生虫
17、 直接采集虫体密封后，低温保存。 6 .6 .3 环境 可采集动物死亡现场的土壤、周边的河流的水体、暂养场馆的空气等相关样品。 7 样品标记和采样记录 7 .1 采样记录 采样记录应清晰、完整，一个样品一条记录，标识和样品一致 ，采样新表参见附录A。 7 .2 标识要求 7 .2 .1 单个样品 样品保存管上直接填写动物种类、样品名称、编号、采样时间等，密封袋密封。 7 .2 .2 外包装 DB 45 /T 2 40 2 20 21 6 密封袋上 写 明动物种类、 样品 名称 、采 样 时 间 等 ，保 温箱外 应 贴 封 条， 封 条 上 采样人 签 字 ，注 明 贴 封 日期，标注 放 置
18、 方 向 。 7 .2 .3 危险标识 当 样品中 含 有 高 致 病性病 原 微 生物，包 装 材 料 上 应 加 贴 生物安全标 识 。 8 样品保存 8 .1 保存容器 8 .1 .1 盛放容器 拭 子 样品 管 应置于特定 塑 料 盒 或 冷 冻 盒 内； U型 或T 型离 心 管 内的 血清 样品 管 应置于 冷 冻 盒小格 内， 避免 晃 动。 8 .1 .2 运输容器 样品应 使 用保 温箱 或保 温瓶 保存 运输 。 8 .2 保存场所 样品应保存在 专 用 冰箱 和 冰 柜 中， 防 盗 和 防 泄漏 。 8 .3 保存温度 在2 4 h 内 送 到 实 验室 的样品应在2
19、8 温度 下保存； 长 期保存的样品在 - 70 或以下保存， 避 免 反复 冻 融 。 9 废弃物的处置 9 .1 采样器具处置 9 .1 .1 一次性用品 丢 弃前应 消毒 ， 双 层密封袋密封 ， 放入专 用的 防止污 染 扩散 的可 消毒 的容 器 内保存， 运输 到 当 地 具 有医 疗 废弃物处置资 质 的 专 业无害化处置 公司 集中 统 一 销毁 。 9 .1 .2 器械 弃置或 清洗 前应 高压灭菌 处理。 9 .2 废弃样品处置 动物 尸 体 残骸 和 质量 不 合 格 的样品应按照 病死和死因不明动物处置办法 （试行 ） 和 病死动物 无害化处理技术规范的规定 执 行。
20、1 0 安全操作要求 10 .1 应由 专 业人 员 实施 保定，操作 时 应 减 少动物应 激 ， 宜 在 麻醉 状态 下 开展 采样。 10 .2 使 用 麻醉 枪 或 是麻醉吹管 注 射麻醉剂 ， 麻醉 枪 应由 具 有 持枪证 且经 过 专 业 培训 的人 员使 用。 D B4 5/ T 24 022 02 1 7 10 .3 麻醉药应由执业兽医师开具和使用，缺乏麻醉技术物种，应避免采样。 10 .4 采样现场环境应进行终末消毒，避免产生环境污染。 DB 45 /T 2 40 2 20 21 8 A A 附录A （资料性） 陆生野生动物疫病样品采集工作用表 表A. 1给出了 陆生野生动
21、物疫病样品采集记录表。 表A .1 陆生野生动物疫病样品采集记录表 表单号： 物种名称 调查疫病 采样地点 采样时间 地理坐标 海拔高度 生 境 气候条件 种群数量 气候条件 种群特征 样品数量 野生动物发病 和死亡情况 与家畜 （禽） 及其 他动物接触情况 采样动物 性别 年龄 捕获方式 临床检查 剖检病变 样品采集 样品编号 样品名称 样品数量 样品编号 样品名称 样品数量 01 鼻（咽）拭 13 小肠 02 肛拭 14 结肠 03 血清 15 粪便 04 脑 16 草料 05 心 17 水源 06 肺 18 土壤 07 肝 19 空去 08 胰 20 09 脾 21 10 肾 22 11 淋巴结 23 12 胃 24 采样单位 采样人签 名： 年 月 日 中华人民共和国广西地方标准 陆生野生动物疫病采样技术规范 DB 45/T 2402 2021 广西壮族自治区市场监督管理局统一印刷 版权专有 侵权必究
