1、 ICS 13.060.50 CCS Z 16 DB 42 湖北省地方标准 DB42/T 1790 2021 水中百草 枯和敌草 快的测定 液相色谱 串联 质谱法 Determination of paraquat and diquat residues in water by Liquid chromatography mass spectrometry 2021 - 12 - 23 发布 2022 - 02 - 23 实施 湖北 省市 场监督管理 局 发 布 DB42/T 17902021 I 目 次 前言 . III 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1
2、4 原理 . 1 5 试剂和材料 . 2 6 仪器和设备 . 2 7 试样制备和保存 . 2 8 试验步骤 . 2 9 试验数据处理 . 4 10 定量限 . 4 11 回收率 . 5 附录A（资料性） 标准物质离子对相对丰度图和离子色谱图 . 6 附录B（资料性） 添加水平、回收率 . 9 DB42/T 17902021 III 前 言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由湖北省农产品质量安全检测中心提出。 本文件由湖北省农业农村厅归口。
3、本文件起草单位：湖北省农产品质量安全检测中心、武汉产品质量监督检验所、湖北大学生命科学 学院、潜江市公共检验检测中心。 本文件主要起草人：郭自国、高进、赵静、方慧文、彭宇、余静、王伟、唐澈、陈华斌、杨艳、曾 军、李佳文。 本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话：027-87665821，邮箱： ；对本文件的有关修改意见建议请反馈至湖北省农产品质量安全检测中心，联系电话： 027-87286579，邮箱：。 DB42/T 17902021 1 水 中百草 枯和敌草 快的测 定 液相色 谱串联 质谱法 警告 ： 百 草枯 剧毒 ， 对人 体 健康有 毒害 作用 且无 特效 解毒药
4、 ， 实验 中溶 液配 制 及样品 前处 理过 程应 在通风 橱中 进行 ，并 按规 定佩戴 防护 用具 ，避 免接 触皮肤 和衣 物 。 1 范围 本文件规定了水中百草枯和敌草快测定的液相色谱串联质谱法的原理、试剂、材料、仪器设备、试 样制备和保存、试验步骤、试验数据处理、定量限和回收率等内容。 本文件适用于农田灌溉水、养殖用水和地表水中百草枯和敌草快的测定。 2 规范性 引用 文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 668
5、2 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27417 合格评定 化学分析方法确认和验证指南 GB/T 32467 化学分析方法验证确认和内部质量控制 术语及定义 HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范 NY/T 396 农用水源环境质量监测技术规范 3 术语和 定义 GB/T 27417和GB/T 32467界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 定量限 limit of quantification; LOQ 样品中被测组分能被定量测定的最低浓度或最低量，此时的分析结果应能确保一定的正确度和精 密度。 来源：GB/T 27417-2017，3.14 回收率 recovery 检测开始前向
6、样品中加入一定量的目标分析物，或使用原有分析物有证标准物质，通过特定的程序 检测所获得样品的目标组分含量或浓度，与加入样品中或存在于样品中的目标分析物含量或浓度的百 分比。 来源：GB/T 32467-2015，4.1 4 原理 DB42/T 17902021 2 样品直接经PWCX小柱富集净化，HILIC亲水型液相色谱柱分离，液相色谱串联质谱法检测，采用外 标法定量。 5 试剂 和 材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯及以上，水为GB/T 6682规定的一级水。 乙腈（CH3CN）：色谱纯。 甲醇(CH3OH)：色谱纯。 甲酸(HCOOH)：色谱纯。 乙酸（CH3COOH）：色谱纯。 乙酸
7、铵(CH3COONH4) ：色谱纯。 甲醇-水溶液（5+95，体积比）：分别量取 5 mL 甲醇（见5.3）与 95 mL水，充分混匀。 甲酸-乙腈溶液（10+90，体积比）：分别量取 10 mL 甲酸（见 5.4）与90 mL 乙腈（见 5.2），充 分混匀。 甲酸-水溶液（1+999，体积比）：分别量取 1 mL甲酸（见5.4）与999 mL 水，充分混匀。 乙腈-甲酸水溶液（50+50，体积比）：分别量取50 mL 乙腈（见5.2）与 50 mL甲酸-水溶液（见 5.9），充分混匀。 50 mmol/L乙酸铵水溶液（pH=3.7）：称取3.8 g乙酸铵（见5.6）溶于1000 mL 水中
8、，加入乙酸 （见 5.5）调节pH为3.7。 标准物质：百草枯二氯酸盐（C12H14Cl2N2，CAS号 1910-42-5），敌草快二溴酸盐（C12H12Br2N2，CAS 号 85-00-7）。 标准储备溶液： 分别准确称取适量百草枯和敌草快标准物质 （见5.12） ， 用甲酸-水溶液 （见5.9） 分别配制成 1000 mg/L的标准储备液，04冰箱保存，有效期为 6个月。 混合标准工作溶液：准确移取适量百草枯和敌草快的标准储备溶液（见 5.13），用乙腈-甲酸水 溶液（见 5.10）稀释成百草枯和敌草快浓度为 2.0 g/L、5.0 g/L、10.0 g/L、20.0 g/L、50.0
9、g/L、 100.0 g/L、200.0 g/L的混合标准工作溶液。 PWCX小柱：60 mg/3 mL 或相当者。 滤膜：0.22 m，尼龙滤膜。 6 仪器 和 设备 液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。 分析天平：感量0.01 mg和0.01 g。 涡旋混合器。 pH 计。 氮吹仪。 7 试样制 备和 保存 样品的采集应符合HJ/T 91和NY/T 396的规定，使用PP材质或PVC材质采样瓶采集样品，密封避光 04保存，并在7天内尽快完成测定。 8 试验步 骤 DB42/T 17902021 3 样品处 理 分别用1.0 mL甲醇（见5.3）和1.0 mL水活化固相萃取小柱（见5.
10、15），弃去流出液，保持填料不漏 出液面，准确移取10.0 mL水样通过固相萃取柱。用1.0 mL甲醇-水溶液（见5.7）淋洗，弃去流出液，用 2.0 mL甲酸-乙腈溶液（见5.8）溶液洗脱并挤干，流速保持约1 mL/min2 mL/min，收集洗脱液于塑料离 心管中，于45的水浴氮气吹干后，用1.0 mL乙腈-甲酸水溶液（见5.10）振荡溶解，过0.22 m尼龙滤 膜（见5.16）于PP或PVC进样瓶，待测。 测定 8.2.1 液相色 谱参 考条 件 液相色谱条件见表1，梯度洗脱条件见表2。 表1 液相色 谱条 件 序号 条件 参数 1 色谱柱型号 HILIC（100 mm2.1 mm，1.
11、7 m i.d.）或其他性能相当的色谱柱 2 流动相 A为乙酸铵水溶液（见5.11），B为乙腈（见5.2） 3 流速 500 L/min 4 进样量 2.00 L 5 柱温 35 表2 梯度洗 脱程 序 时间 min 流动相A % 流动相B % 0.0 20 80 2.0 20 80 3.5 85 15 4.0 85 15 4.5 20 80 10.0 20 80 8.2.2 质谱参 考条 件 质谱条件见表3，化合物定性离子定量离子对及碰撞能信息见表4。 表3 质谱条件 序号 条件 参数 1 离子化模式 电喷雾电离（ESI） 2 质谱扫描方式 正离子模式 3 检测方式 多反应监测（MRM） 4
12、 离子源温度 500 5 雾化气1压力 氮气0.44 Mpa 6 雾化气2压力 氮气0.44 Mpa 7 气帘气压力 氮气0.24 Mpa DB42/T 17902021 4 表4 化合 物定 性定 量离 子对及 碰撞 能 化合物 保留时间 min 母离子 m/z 子离子 m/z 碰撞能量 eV 去簇电压 V 百草枯 2.59 185 170 a 28 80 158 30 80 敌草快 2.62 183 157 a 30 60 130 35 60 注： a 为定量离子 8.2.3 定 性测定 按照上述试验步骤（见本文件第8章）测定样品和标准工作溶液，样品中待测物的色谱峰保留时间 与相应标准色谱
13、峰的保留时间相比，偏差范围应在2.5%之内，并且样品中待测物离子丰度比与浓度相 当的标准溶液离子丰度比相比，允许偏差不超过表5规定的范围，则可判断样品中存在对应的待测物， 标准物质百草枯和敌草快离子对相对丰度图和离子色谱图见附录A。 表 5 定性 确证 时相 对离 子丰度 的最 大允 许偏 差 相对离子丰度 /% 允许的相对偏差 /% 50 20 2050（含） 25 1020（含） 30 10 50 8.2.4 定量测 定 在仪器最佳工作条件下，对混合标准工作溶液和样品进样，以定量离子峰面积为纵坐标，浓度为横 坐标绘制标准工作曲线，按外标法定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范
14、围内。 9 试验 数 据处 理 采用仪器数据处理软件外标法或按照式（1）计算水样中百草枯和敌草快的残留量： = 1 1000 1000 (1) 式中： X试样中百草枯和敌草快的含量，单位为微克每升（g/L）； c试样处理溶液中百草枯和敌草快的浓度，单位为微克每升（g/L)； V1试样定容的体积，单位为毫升（mL）； V试样取样体积，单位为毫升（mL）。 10 定量限 本文件地表水中百草枯和敌草快的定量限为2.0 g/L，养殖水和灌溉水中百草枯和敌草快的定量限 为3.0 g/L。 DB42/T 17902021 5 11 回收率 本文件在地表水、养殖水和灌溉水3种水样中添加回收率见附录B。 DB
15、42/T 17902021 6 A A B B 附录A （资料 性） 标准物 质离子 对 相对 丰度 图和离 子色 谱 图 标准物质离子对相对丰度图和离子色谱图见图A.1-图A.6。 响应值 时间（min) 图A.1 百 草枯 离子 对相 对丰度 图 响应值 时间（min) 图 A.2 百 草枯 离子 色 谱图 （m/z185170 ） DB42/T 17902021 7 响应值 时间（min) 图A.3 百 草枯 离子 色 谱图 （m/z185158 ） C 响应值 时间（min) 图A.4 敌 草快 离子 对相对 丰度 图 响应值 C 时间（min) 图A.5 敌 草快 离子 色谱 图（m
16、/z183157 ） DB42/T 17902021 8 响应值 时间（min) 图 A.6 敌草 快 离子 色谱 图（m/z183130 ） DB42/T 17902021 9 D 附录B （资料 性） 添加水 平、 回收 率 水样中添加回收率见表B.1。 表B.1 百 草枯 和敌 草快 在 3 种 样品 中添 加回 收范 围 样品 化合物 添加浓度 g/L 回收率 % 地表水 百草枯 2.0 69.8-78.1 5.0 82.1-93.4 10.0 71.4-77.1 敌草快 2.0 101.5-129.3 5.0 71.2-76.7 10.0 94.6-103.1 养殖水 百草枯 3.0 98.3-109.2 5.0 83.4-88.9 10.0 86.4-97.1 敌草快 3.0 73.7-98.3 5.0 108.5-111.5 10.0 105.0-114.2 灌溉水 百草枯 3.0 69.3-97.4 5.0 70.1-73.8 10.0 97.1-124.7 敌草快 3.0 71.1-79.3 5.0 93.1-113.1 10.0 82.7-122.2
