1、I C S 6 5 . 0 2 0 . 0 1 C C S B 1 5 DB42 湖 北 省 地 方 标 准 D B 4 2 / T 1 7 8 0 2 0 2 1 绿 豆 尾 孢 菌 叶 斑 病 抗 性 鉴 定 技 术 规 程 C o d e o f p r a c t i c e f o r e v a l u t a i o n o f r e s i s t a n c e t o l e a f s p o t c a u s e d b y c e r c o s p o r a c a n e s c e n s i n m u n g b e a n 2 0 2 1 - 1 2
2、 - 2 3 发 布 2 0 2 2 - 0 2 - 2 3 实 施 湖 北 省 市 场 监 督 管 理 局 发 布D B 4 2 / T 1 7 8 0 2 0 2 1 I 目 次 前 言 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 引 言 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 范 围 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
5、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 规 范 性 引 用 文 件 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 术 语 和 定 义 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
7、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 . 1 绿 豆 尾 孢 菌 叶 斑 病 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 接 种 体 制 备 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
9、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 4 . 1 病 原 菌 的 分 离 及 鉴 定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
10、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 4 . 2 致 病 性 测 定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
11、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 4 . 3 病 原 菌 的 繁 殖 和 保 存 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
12、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 5 鉴 定 材 料 准 备 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
13、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 5 . 1 种 子 选 择 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
14、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 5 . 2 鉴 定 材 料 种 植 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
15、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 6 接 种 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
16、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 6 . 1 接 种 体 制 备 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
17、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 6 . 2 接 种 叶 片 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
18、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 6 . 3 接 种 方 法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
19、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 7 病 情 调 查 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
20、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 7 . 1 调 查 时 间 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
21、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 7 . 2 病 情 分 级 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
22、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 8 抗 病 性 评 价 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
23、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 8 . 1 鉴 定 有 效 性 判 别 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
24、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 8 . 2 抗 病 性 评 价 标 准 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
25、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 附 录 A （ 资 料 性 ） 培 养 基 制 备 方 法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
26、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 附 录 B （ 规 范 性 ） 鉴 定 记 载 表 格 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
27、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5D B 4 2 / T 1 7 8 0 2 0 2 1 I I I 前 言 本 文 件 按 照 G B / T 1 . 1 - 2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分 ： 标 准 化 文 件 的 结 构 与 起 草 规 则 的 规 定 起 草 。 请 注 意 本 文 件 的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利 。
28、 本 文 件 的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 这 些 专 利 的 责 任 。 本 文 件 由 湖 北 省 农 业 科 学 院 粮 食 作 物 研 究 所 提 出 。 本 文 件 由 湖 北 省 农 业 农 村 厅 提 出 并 归 口 管 理 。 本 文 件 起 草 单 位 ： 湖 北 省 农 业 科 学 院 粮 食 作 物 研 究 所 、 湖 北 省 农 业 科 学 院 植 保 土 肥 研 究 所 、 十 堰 市 农 业 科 学 院 。 本 文 件 主 要 起 草 人 ： 刘 昌 燕 、 万 正 煌 、 焦 春 海 、 李 莉 、 黄 薇 、 张 凡 、 陈 宏 伟 、 刘 良 军 、
29、 韩 雪 松 、 彭 宣 和 。 本 文 件 实 施 应 用 中 的 疑 问 ， 可 咨 询 湖 北 省 农 业 农 村 厅 ， 联 系 电 话 ： 0 2 7 - 8 7 6 6 5 8 2 1 ， 邮 箱 ： h b s n a b 1 2 6 . c o m 。 对 本 文 件 的 有 关 修 改 意 见 建 议 请 反 馈 至 湖 北 省 农 业 科 学 院 粮 食 作 物 研 究 所 ， 联 系 电 话 ： 0 2 7 - 8 7 3 8 9 6 1 1 ， 邮 箱 ： L i u c y 0 6 0 2 1 6 3 . c o m 。D B 4 2 / T 1 7 8 0 2 0
30、2 1 V 引 言 绿 豆 （ V i g n a r a d i a t a ( L i n n . ) W i l c z e k ） 具 有 极 强 的 生 产 适 应 性 、 独 特 的 营 养 价 值 、 良 好 的 保 健 功 效 、 有 效 的 固 氮 养 地 功 能 ， 已 成 为 湖 北 省 的 特 色 产 业 ， 在 保 障 农 民 增 收 致 富 、 改 善 广 大 居 民 膳 食 结 构 、 促 进 农 业 可 持 续 发 展 、 保 护 农 业 多 样 性 等 方 面 起 到 了 非 常 重 要 的 作 用 。 由 变 灰 尾 孢 （ c e r c o s p o
31、r a c a n e s c e n s ） 引 起 的 绿 豆 尾 孢 菌 叶 斑 病 是 绿 豆 生 产 上 的 重 要 病 害 ， 轻 者 减 产 2 0 5 0 % ， 严 重 的 高 达 9 0 % 以 上 。 培 育 抗 病 品 种 是 控 制 该 病 最 有 效 的 方 法 之 一 ， 而 建 立 快 速 简 便 的 抗 性 鉴 定 体 系 是 进 行 绿 豆 尾 孢 菌 叶 斑 病 抗 病 育 种 的 关 键 。 为 此 ， 我 们 通 过 多 年 的 试 验 研 究 ， 制 定 出 本 文 件 ， 可 有 效 克 服 绿 豆 尾 孢 菌 叶 斑 病 抗 病 性 鉴 定 难
32、题 ， 为 绿 豆 抗 病 资 源 筛 选 和 抗 病 品 种 的 选 育 提 供 技 术 支 持 。D B 4 2 / T 1 7 8 0 2 0 2 1 1 绿 豆 尾 孢 菌 叶 斑 病 抗 性 鉴 定 技 术 规 程 1 范 围 本 文 件 规 定 了 绿 豆 尾 孢 菌 叶 斑 病 接 种 体 准 备 、 鉴 定 材 料 准 备 、 接 种 、 病 情 调 查 和 抗 病 性 评 价 。 本 文 件 适 用 于 绿 豆 尾 孢 菌 叶 斑 病 室 内 离 体 叶 片 人 工 接 种 鉴 定 及 评 价 。 2 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中
33、 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款 。 其 中 ， 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件 ； 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。 G B 4 4 0 4 . 2 粮 食 作 物 种 子 第 2 部 分 ： 豆 类 3 术 语 和 定 义 下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件 。 3 . 1 绿 豆 尾 孢 菌 叶 斑 病 c e r c o s p o r a l e a f s p o t
34、 由 变 灰 尾 孢 （ C e r c os por a c ane s c e ns ） 所 产 生 的 叶 部 症 状 的 病 害 。 4 接 种 体 准 备 4 . 1 病 原 菌 的 分 离 及 鉴 定 将 从 田 间 采 集 的 发 病 叶 片 用 无 菌 水 冲 洗 干 净 ， 从 病 健 交 界 处 切 取 3 m m 3 m m 小 块 组 织 ； 用 7 5 % 乙 醇 溶 液 浸 泡 2 s 3 s , 再 用 1 % 次 氯 酸 钠 消 毒 3 m i n , 后 用 灭 菌 水 冲 洗 3 次 , 用 无 菌 吸 水 纸 吸 干 , 然 后 接 种 到 V 8 培 养
35、 基 上 , 在 2 8 条 件 下 培 养 ； 待 菌 丝 长 出 后 转 入 V 8 培 养 基 进 一 步 纯 化 ， 并 于 4 低 温 下 保 存 备 用 。 4 . 2 致 病 性 测 定 将 分 离 物 回 接 绿 豆 叶 片 进 行 致 病 性 测 定 ， 致 病 性 测 定 采 用 离 体 叶 片 菌 丝 块 接 种 法 。 4 . 3 病 原 菌 的 繁 殖 和 保 存 接 种 所 用 分 离 物 应 采 用 强 致 病 力 菌 株 。 在 接 种 前 需 要 进 行 病 原 物 接 种 体 的 繁 殖 ， 常 用 培 养 基 为 V 8 培 养 基 ， 在 2 8 恒 温
36、 培 养 箱 ， 待 菌 丝 布 满 整 个 平 板 ， 菌 株 斜 面 保 存 于 4 冰 箱 中 。 4 . 4 接 种 体 的 制 备 将 保 种 的 分 离 物 在 V 8 培 养 基 （ 见 附 录 A ） 上 于 2 8 恒 温 培 养 箱 中 活 化 培 养 ， 待 菌 丝 长 满 平 板 后 ， 再 用 无 菌 的 、 直 径 6 m m 的 打 孔 器 在 活 化 好 的 菌 株 菌 落 生 长 边 缘 打 孔 ， 将 菌 丝 面 朝 下 接 种 在 V 8 培 养 基 中D B 4 2 / T 1 7 8 0 2 0 2 1 2 进 行 扩 大 繁 殖 ， 以 备 接 种
37、。 5 鉴 定 材 料 准 备 5 . 1 种 子 选 择 取 颗 粒 饱 满 ， 大 小 相 近 的 绿 豆 种 子 进 行 表 面 消 毒 ， 用 7 5 % 乙 醇 消 毒 2 0 s ， 1 % 次 氯 酸 钠 消 毒 3 m i n ， 最 后 用 无 菌 水 洗 3 次 ； 表 面 消 毒 后 的 种 子 放 在 2 3 层 喷 有 水 的 吸 水 纸 上 备 用 ， 取 已 知 的 感 病 品 种 作 为 对 照 。 豆 类 种 子 质 量 应 满 足 G B 4 4 0 4 . 2 的 要 求 。 5 . 2 种 子 处 理 将 培 养 土 高 温 高 压 灭 菌 后 ， 分
38、装 到 培 养 盘 内 , 整 平 , 压 实 苗 床 , 控 制 土 壤 相 对 含 水 量 约 7 0 % 8 0 % , 表 面 消 毒 后 的 种 子 点 播 到 培 养 盘 内 ， 用 细 土 层 覆 盖 种 子 ； 2 5 1 2 h 光 照 / 1 2 h 黑 暗 交 替 培 养 ， 定 期 观 察 绿 豆 苗 生 长 情 况 ， 适 时 浇 水 。 6 接 种 6 . 1 接 种 时 期 接 种 时 期 为 第 一 对 单 叶 平 展 ， 采 集 复 叶 叶 片 ， 清 水 洗 净 后 放 在 塑 料 盒 内 湿 润 的 吸 水 纸 上 , 叶 片 的 正 面 向 上 。 6
39、. 2 接 种 方 法 在 接 种 叶 片 中 部 稍 偏 叶 脉 部 位 用 灭 菌 牙 签 扎 一 小 伤 口 , 取 菌 饼 将 菌 丝 面 朝 下 接 种 到 绿 豆 叶 片 伤 口 之 上 ， 接 种 后 ， 塑 料 盒 用 保 鲜 膜 封 紧 保 湿 ， 放 入 温 室 2 5 条 件 下 培 养 并 与 吸 水 纸 放 入 盒 中 保 持 湿 润 ， 1 2 h 光 照 / 1 2 h 黑 暗 交 替 培 养 ， 一 个 品 种 4 个 重 复 ， 每 个 重 复 1 0 片 叶 子 。 7 病 情 调 查 7 . 1 调 查 时 间 接 种 后 第 7 d 进 行 调 查 。
40、7 . 2 病 情 分 级 测 量 叶 片 病 斑 大 小 ， 根 据 病 斑 大 小 平 均 值 ， 进 行 分 级 ， 按 照 附 录 B 的 表 格 进 行 记 载 ， 划 分 标 准 见 表 1 。 表 1 绿 豆 抗 尾 孢 菌 叶 斑 病 鉴 定 病 情 级 别 划 分 病情级别 病斑描述 0 无可见侵染病斑 1 叶片上仅有小点状病斑，直径2 m m 以下 2 病斑直径3 m m 以下，边缘褐色 3 直径3 m m 6 m m 以上的中型斑，边缘褐色，中央有灰白色坏死组织 4 直径6 m m 以上的不规则型病斑D B 4 2 / T 1 7 8 0 2 0 2 1 3 8 抗 病
41、性 评 价 8 . 1 鉴 定 有 效 性 判 别 当 设 置 的 感 病 或 高 感 对 照 材 料 达 到 病 情 级 别 3 或 者 4 级 ， 该 批 次 抗 叶 斑 病 鉴 定 视 为 有 效 。 参 鉴 材 料 中 初 次 鉴 定 表 现 为 抗 病 的 品 种 需 进 行 重 复 鉴 定 ， 以 进 一 步 确 定 其 抗 性 及 稳 定 性 。 8 . 2 抗 病 性 评 价 标 准 依 据 鉴 定 材 料 发 病 程 度 （ 病 情 级 别 ） 确 定 其 抗 性 水 平 ， 划 分 标 准 见 表 2 。 表 2 绿 豆 对 尾 孢 菌 叶 斑 病 抗 性 的 评 价 标
42、准 病情级别 抗性 0 高抗 H i g h r e s i s t a n c e ( H R ) 1 抗 R e s i s t a n c e ( R ) 2 中抗 M o d e r a t e r e s i s t a n c e （M R ） 3 感 S u s c e p t i b i l i t y ( S ) 4 高感 H i g h S u s c e p t i b i l i t y ( H S )D B 4 2 / T 1 7 8 0 2 0 2 1 4 A A 附 录 A （ 资 料 性 ） 培 养 基 制 备 方 法 表 A . 1 给 出 了 V 8 培 养
43、 基 。 表 A . 1 V 8 培 养 基 制 备 方 法 培养基名称 配方 灭菌条件 V 8 培养基 V 8 果汁2 0 0 m l ，C a C O 3 3 . 0 g ，琼脂糖 1 5 g ，蒸馏水定容至1 L , p H 为 7 . 2 . 1 2 1 灭菌1 5 m i nD B 4 2 / T 1 7 8 0 2 0 2 1 5 B B 附 录 B （ 规 范 性 ） 鉴 定 记 载 表 格 表 B . 1 规 定 了 鉴 定 记 载 表 格 。 表 B . 1 鉴 定 记 载 表 格 编号 重复数 病斑直径（ m m ） 平均值（ m m ） 病情级别 抗性水平 品种名1 重复1 重复2 重复3 品种名 2 重复 1 重复 2 重复3 品种名3 重复1 重复2 重复3 品种名 4 重复 1 重复 2 重复3 记 录 人 ： 日 期 ： _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
