1、 ICS 65.020.30 CCS B 41 DB 42 湖北省地方标准 DB42/T 1786.2 2021 生猪疫病 防控技术 第 2 部分 ：传染性 胸 膜肺炎监 测评估技 术规程 Prevention and control technology of Swine diseases Part 2 ：Code of practice for monitoring and evaluation of contagious pleuropneumonia 2021 - 12 - 23 发布 2022 - 02 - 23 实施 湖 北 省 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB42/T 1
2、786.2 2021 I 目 次 . III . V 1 . 1 2 . 1 3 . 1 4 . 1 5 . 3 A . 4 B . 6 C Apx -ELISA . 8 . 10 DB42/T 1786.2 2021 III 前 言 GB/T 1.1 2020 1 DB42/T 1786 2 DB42/T 1786 1 2 027-87665821 027-87156122 DB42/T 1786.2 2021 V 引 言 DB42/T 1786 1 2 DB42/T 1786.2 2021 1 生 猪疫病 防控技术 第 2 部分：传 染性胸 膜肺炎监 测评估 技术规程 1 范围 2 规范性
3、 引用 文件 NY/T 1167 3 术语和 定义 猪传染 性胸 膜肺 炎 porcine contagious pleuropneumonia 聚合酶 链式 反应 polymerase chain reaction ，PCR DNA DNA 酶联免 疫吸 附测 定 enzyme linked immunosorbent assay, ELISA 4 诊断 流行病学 6 6 4 5 9 11 DB42/T 1786.2 2021 2 临床症 状 41.5 40.5 41 病理变 化 实验室 诊断 4.4.1 病原学 检测 4.4.1.1 细 菌培 养法 A 4.4.1.2 猪 胸膜 肺炎 放线
4、 杆菌复 合 PCR 检测 B 4.4.2 血清学 检测 C 结果判 定 4.5.1 疑似猪 传染 性胸 膜肺 炎 4.5.2 确诊 4.5.1 4.4.2 4.4.1 4.5.1 4.4.1 DB42/T 1786.2 2021 3 5 预防和 治疗 管理措 施 5.1.1 5.1.2 5.1.3 5.1.4 5.1.5 14 d 5.1.6 14 d NY/T 1167 0.3 m 2 / 1.3 m 2 / 4.0 m 2 / 10 m 2 / 29 33 22 25 19 22 20 22 17 21 60% 70% 1.0 mg/m 2 3.0 mg/m 2 1.5 mg/m 2 猪
5、群检 测与 监测 1 免疫接 种 35 40 4 40 d 20 d 30 d 治疗 2 DB42/T 1786.2 2021 4 A A 附录A （资料 性） 病原菌 分离 鉴定 A.1 样品的 采集 SN/T 1447 4.2.1 4.2.2 4.2.3 A.2 分离培 养 A.2.1 TSA NAD 10% 37 24 h 48 h A.2.2 A.2.1 TSA NAD 10% 37 24 h 48 h A.3 涂片染 色镜 检 A.3.1 1 2 A.3.2 A.3.3 6 A.3.4 1 2 1 min A.3.5 1 2 1 min A.3.6 95% 30 s 95% 10 s
6、 A.3.7 1 min 1000 10 1000 A.3.8 A.4 “卫 星生 长现 象 ” NAD 37 24 h 48 h A.5 增殖培 养 TSA 10 NAD 10% 5 mL TSB 10 NAD 10% 37 24 h 48 h A.6 生化鉴 定 A.6.1 糖发酵 试验 DB42/T 1786.2 2021 5 10 NAD A.5 D- 37 24 h 48 h A.6.2 过氧化 氢酶 试验 A.2.2 3% 0.5 mL 30 min A.6.3 尿素酶 试验 A.5 50 50 2 min A.6.4 全自动 微生 物鉴 定仪 鉴定 A.5 A.6.5 结果判 断
7、 D- DB42/T 1786.2 2021 6 B B 附录B （资料 性） 猪胸膜 肺炎 放线 杆菌 聚合 酶链式 反应 B.1 概述 B.2 仪器设 备 PCR B.3 试剂 25 mmol/L MgCl2 2.5 mmol/L dNTPs Taq DNA 20% ddH2O 1.0% Tris- TAE DNA marker B.4 引物 表B.1 引物 bp P1 5 458 P2 5 P3 5 222 P4 ttctattttatgatcttggtgtga 5 B.5 操作步 骤 B.5.1 样品及 样品 处理 DNA B.5.2 对照设 立 DNA DNA ddH2O B.5.3
8、 复合PCR体系 25 2.5 P1 P2 1.5 P3 P4 2.0 1.5 DNA 12.5 ddH2O 25 B.5.4 复合PCR 反 应条 件 PCR 94 4 min 94 45 s 55 30 s, 72 45 s 30 72 10 min DB42/T 1786.2 2021 7 B.5.5 电泳 3 1.0% 100 V 30 min B.5.6 结果判 定 458 bp 222 bp DNA 458 bp 222 bp DNA 458 bp 222 bp PCR 458 bp 222 bp PCR Blast DB42/T 1786.2 2021 8 C C 附录C （资料
9、 性） 猪胸膜 肺炎 放线 杆 菌 Apx -ELISA 抗体 检测 C.1 概述 ApxIVA ELISA APP ApxIV ApxIV C.2 仪器设 备 2 8 C.3 试剂 ELISA HRP 0.05 mol/L pH 9.6 2% BSA( 10% ) PBST PBS 0.01 mol/L pH 7.4 A pH 5.0 B TMB 0.2 mol/L H2SO4 C.4 操作步 骤 C.4.1 100 C.4.2 37 30 min 200 37 1 h C.4.3 300 3 2 min C.4.4 1:40 100 2 1:40 100 37 30 min C.4.5 3 200 / C.4.3 C.4.6 1:5000 100 37 30 min C.4.7 A 50 B 50 10 min C.4.8 50 15 min OD630nm C.5 结果判 定 DB42/T 1786.2 2021 9 OD 630nm 0.6 OD 630nm 0.3 S OD 630nm P OD 630nm 0.32 S P 0.25 S P 0.25 DB42/T 1786.2 2021 10 参考文 献 1 SN/T1447 S. 2 2017 25 . 3 .
