1、 ICS 67.050 CCS X 04 34 安徽省地方标准 DB34/T 40402021 谷物类农产品中丙硫菌唑及其代谢物脱硫 丙硫菌唑残留量的测定 液相色谱-串联质 谱法 Determination of prothioconazole and its metabolite prothioconazole-desthio in grains Liquid chromatography- tandem mass spectrometry mathod 2021-09-30 发布 2021-10-30 实施 安徽省市场监督管理局 发布DB34/T 40402021 I 前言 本文件按照 G
2、B/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所提出。 本文件由安徽省农业农村厅归口。 本文件起草单位：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所、农业农村部农产品质量安 全风险评估实验室（合肥）、安徽省食品药品检验研究院、阜阳市农产品质量安全监测中心、宣城市农 产品质量安全中心、潜山市梅城镇农业技术推广站。 本文件主要起草人：孙明娜、刘琴芳、范希芹、张俊巍、黄为民、董旭、褚玥、童舟、王梅、段劲 生、高同春。 DB34/
3、T 40402021 1 谷物类农产品中丙硫菌唑及其代谢物脱硫丙硫菌唑残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本文件规定了小麦、大米、玉米等谷物类农产品中丙硫菌唑及其代谢物脱硫丙硫菌唑残留量的液相 色谱串联质谱法的原理、试剂与材料、仪器和设备、试样制备和储存、分析步骤、结果计算、精密度和 定量限。 本文件适用于小麦、 大米、 玉米等谷物类农产品中丙硫菌唑及其代谢物脱硫丙硫菌唑残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用
4、于本 文件。 GB 2763-2021 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中丙硫菌唑和代谢物脱硫丙硫菌唑用乙腈溶液提取后，经吸附剂分散固相萃取净化，液相色谱 -串联质谱法测定，外标法定量。 5 试剂与材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合 GB/T 6682 规定的一级水 。 5.1 试剂 5.1.1 乙腈（CH3CN，CAS 号：75-05-8）。 5.1.2 乙腈（CH3CN，CAS 号：75-05-8）：色谱纯。 5.1.3 甲醇（CH3OH， C
5、AS 号：67-56-1）：色谱纯。 5.1.4 甲酸（HCOOH，CAS 号：64-18-6）：色谱纯。 5.1.5 乙酸铵(CH3COONH4，CAS 号：631-61-8)：色谱纯。 5.1.6 无水硫酸镁（MgSO4，CAS 号：7487-88-9）。 5.2 溶液 DB34/T 40402021 2 5.2.1 甲酸水溶液（0.02）：吸取 200 L 甲酸（5.1.4），加水混匀定容至 1 L。 5.2.2 乙酸铵-甲酸水溶液 （5 mmol/L） ： 称取0.388 g乙酸铵 （5.1.5） ， 用 0.02甲酸水溶液 （5.2.1） 溶解并稀释至 1 L，摇匀。 5.3 标准品
6、 5.3.1 丙硫菌唑（C14H15Cl2N3OS，CAS 号：178928-70-6）标准品：纯度99.0。 5.3.2 脱硫丙硫菌唑（C14H15Cl2N3O，CAS 号：120983-64-4）标准品：纯度99.0。 5.4 标准溶液 5.4.1 丙硫菌唑标准储备液（1000 mg/L）：准确称取丙硫菌唑标准品 10 mg（精确至 0.1 mg），用甲 醇溶解，定容至 10 mL， 18及以下条件避光保存，有效期 6 个月。 5.4.2 脱硫丙硫菌唑标准储备液 （1000 mg/L） ： 准确称取脱硫丙硫菌唑标准品 10 mg （精确至0.1 mg） ， 用甲醇溶解，定容至 10 mL，
7、18及以下条件避光保存，有效期 6 个月。 5.4.3 混合标准储备溶液 （10 g/mL） ： 分别吸取适量的丙硫菌唑和脱硫丙硫菌唑的标准储备液 （5.4.1， 5.4.2），用甲醇溶解，配置成浓度为 10 g/mL的混合标准储备溶液，18及以下条件避光保存，有 效期 1 个月。 5.5 材料 5.5.1 十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：粒径 40 m60 m。 5.5.2 有机滤膜：0.22 m。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源。 6.2 分析天平：感量 0.01 g和 0.1 mg。 6.3 振荡器。 6.4 离心机：转速不低于 5000 r/m
8、in。 6.5 氮吹仪。 6.6 涡旋混合仪。 7 试样制备与储存 7.1 样品测定部位按照 GB 2763-2021 中附录 A 的规定执行。 7.2 将不少于 1000 g 样品混匀，四分或分样器分样，放入食品加工机粉碎，过 425 m 的标准网筛， 制成试样，放入聚乙烯瓶或袋中密封，做上标记，按照试样和备样分别置于18及以下条件保存。 8 分析步骤 8.1 提取和净化 准确称取待测试样 5 g（精确至 0.01 g ），置 于 5 0 mL 离心管中，加入 20 mL 乙腈，振荡 30 min， 5000 r/min 离心 5 min，取上清液 10 mL，用氮气吹至近干，2 mL 甲醇
9、定容，加入 100 mg 无水硫酸DB34/T 40402021 3 镁和 50 mg C18吸附剂（5.5.1）净化，涡旋 2 min，5000 r/min 离心 5 min，取上清液过 0.22 m 有 机滤膜（5.5.2）过滤，待测。 8.2 测定 8.2.1 液相色谱参考条件 如下： a) 色谱柱：C18柱，50 mm 2.0 mm（内径）或相当，粒径 1.6 m 或相当； b) 流动相：A 相为乙酸铵-甲酸水溶液（5.2.2），B 相为乙腈溶液（5.1.2）。流动相梯度条件 见表1； c) 流速：0.3 mL/min； d) 柱温：40； e) 进样体积：5 L。 表1 流动相及其梯
10、度条件 时间 /min 流动相比例 /（） 流动相A 流动相B 03.0 85 15 3.15.0 10 90 5.16.0 85 15 8.2.2 质谱参考条件 如下： a) 离子源：电喷雾离子源（ESI）； b) 离子源接口电压：正离子 4500 V；负离子4500 V； c) 扫描方式：正离子和负离子同时扫描； d) 离子源温度：450； e) 脱溶剂管温度：250； f) 雾化气3 L/min、干燥气18 L/min，均为高纯氮（纯度99.999），碰撞气氩气230 kPa； g) 检测方式：多反应监测 MRM，多反应监测条件见表 2. 表2 丙硫菌唑和脱硫丙硫菌唑的多反应监测（MRM
11、）质谱参数 化合物 保留时间 min ESI模式 定量离子对 m/z 定性离子对 m/z 碰撞能量 eV 丙硫菌唑 3.50 负离子 342.10/100.20 342.10/100.20 20 342.10/125.30 25 脱硫丙硫菌唑 3.37 正离子 312.20/70.10 312.20/70.10 -25 312.20/125.20 -30 8.2.3 标准工作曲线 DB34/T 40402021 4 8.2.3.1 将丙硫菌唑和脱硫丙硫菌唑的混合标准储备溶液（5.4.3），用空白基质提取液（8.2）逐级 稀释得到质量浓度分别为 0.005 mg/L、0.01 mg/L、0.05
12、 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L和 1 mg/L 的系列 基质标准溶液，按质量浓度由低至高依次进样测定，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准 曲线，计算得到标准曲线回归方程。 8.2.3.2 基质标准溶液需现配现用。 8.3 定性和定量 8.3.1 保留时间 被测试样中丙硫菌唑和脱硫丙硫菌唑色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较， 相对 误差应在 2.5之内。 8.3.2 定量离子、定性离子及子离子丰度比 在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品一致，且在扣除背景 后的样品质谱图中，目标化合物选择的子离子均出现，而且同一检测批次，对同
13、一化合物，样品中目标 化合物离子的相对丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比，其允许偏差（）不超过表3 规定的范 围，则可判断样品中存在丙硫菌唑或者脱硫丙硫菌唑。 表3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 50 2050 1020 10 允许相对偏差 20 25 30 50 本方法的标准物质 LC-MS/MS 多反应监测质量色谱图参见附录A。 8.3.3 定量测定 将丙硫菌唑、脱硫丙硫菌唑的混合基质标准溶液和试样溶液依次注入液相色谱-串联质谱仪中，以 保留时间和定性离子定性， 样品中丙硫菌唑和脱硫丙硫菌唑质量浓度应在基质标准工作曲线质量浓度范 围内，超过线性范围时应根据测定浓度
14、进行适当倍数稀释后再进行分析，采用外标法定量。 8.4 空白实验 除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。 9 结果计算 试样中的丙硫菌唑和脱硫丙硫菌唑残留量以质量分数 计，单位为毫克每千克（mg/kg）,按公式(1) 或公式（2）计算。 1000 1000 1 m A V A S (1) DB34/T 40402021 5 1000 1000 2 m V (2) 式中： 试样中丙硫菌唑或脱硫丙硫菌唑残留量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg）； 1 基质匹配标准工作溶液中丙硫菌唑或脱硫丙硫菌唑的质量浓度的数值，单位为毫克每升 （mg/L）； 2 从基质匹配标准工作溶液中得到的试样溶
15、液中丙硫菌唑或脱硫丙硫菌唑的质量浓度的数值， 单位为毫克每升（mg/L）； A 试样溶液中丙硫菌唑或脱硫丙硫菌唑的质量色谱图峰面积； S A 基质匹配标准工作溶液中丙硫菌唑或脱硫丙硫菌唑的质量色谱图峰面积； V 提取液体积的数值，单位为毫升（mL）； m 试样质量的数值，单位为克（g）； 注： 计算结果以重复性条件下获得的 2 次独立测定结果的算术平均值表示，保留 2 位有效数值，当结果大于 1 mg/kg 时保留 3 位有效数字。 10 精密度 10.1 在重复性条件下，获得的 2 次独立测试结果的绝对差值不得超过重复性限（r）,参见附录 B。 10.2 在再现性条件下，获得的 2 次独立测
16、试结果的绝对差值不得超过再现性限（R）,参见附录 B。 11 定量限 本文件方法大米、小麦和玉米基质中丙硫菌唑的定量限为 0.02 mg/kg，脱硫丙硫菌唑的定量限为 0.02 mg/kg。 DB34/T 40402021 6 附录A （资料性） 参考谱图 参考谱图如下： 图A.1 丙硫菌唑质谱图 图A.2 脱硫丙硫菌唑质谱图 图A.3 样品中丙硫菌唑色谱图（小麦添加浓度为 0.02mg/kg） MS Chromatogram min Intensity 20,000 (x10,000) 1.00 2.00 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 342.10100.20(-)
17、2DB34/T 40402021 7 图A.4 样品中脱硫丙硫菌唑色谱图（小麦添加浓度为 0.02mg/kg） MS Chromatogram min Intensity 20,000 (x10,000) 1.00 2.00 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 312.2070.10(+)1DB34/T 40402021 8 附录B （资料性） 精密度 表B.1 精密度 中文名称 英文名称 精密度 含量 0.02 mg/kg 0.05 mg/kg 0.1 mg/kg 0.5 mg/kg 丙硫菌唑 Prothioconazole 重复性限（r） 0.0007 0.0051 0.0084 0.0348 再现性限（R） 0.0021 0.0073 0.0168 0.0672 脱硫丙硫菌唑 Prothioconazole-desthio 重复性限（r） 0.0019 00049 0.0096 0.0388 再现性限（R） 0.0024 0.0081 0.0199 0.0717
