1、 ICS 07.080 CCS B 61 33 浙江省地方标准 DB33/T 2433 2022 小黄鱼种 质要求 Requirements for germplasm of little yellow croaker 2022 - 01 - 29 发布 2022 - 03 - 01 实施 浙江省市 场监督 管 理局 发 布 DB33/T 2433 2022 I 前 言 本 标准 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分： 标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定 起草。 请注意 本标 准的 某些 内容 可能涉 及专 利。 本标 准的 发布机 构不 承担 识别 专利
2、的责任 。 本标准 由浙 江省 农业 农村 厅提出 并组 织实 施 。 本标准 由浙 江省 水产 标准 化技术 委员 归口 。 本标准 起草 单位 ：浙 江省 海洋水 产研 究所 、浙 江省 农业科 学院 。 本标准 主要 起草 人： 楼宝 、谢庆 平、 刘峰 、詹 炜、 徐冬冬 、陈 睿毅 、王 立改 、柴学 军。 DB33/T 2433 2022 1 小 黄鱼种 质要求 1 范围 本标准 规定 了小 黄鱼 （Little yellow croaker ） 的 学 名与分 类、 主要 形态 构造 特征、 生长 与繁 殖、 细胞遗 传学 特性 、分 子遗 传学特 性、 检测 方法 和判 定规则
3、 。 本标准 主要 适用 于小 黄鱼 的种质 检测 与鉴 定。 2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用 于 本 文件。 GB/T 18654.1 养殖 鱼类 种质检 验 第1 部分 ：检 验 规则 GB/T 18654.2 养殖 鱼类 种质检 验 第2 部分 ：抽 样 方法 GB/T 18654.3 养殖 鱼类 种质检 验 第3 部分 ：性 状 测定
4、 GB/T 18654.4 养殖 鱼类 种质检 验 第4 部分 ：年 龄 与生长 测定 GB/T 18654.6 养殖 鱼类 种质检 验 第6 部分 ：繁 殖 性能测 定 GB/T 18654.12 养 殖鱼 类 种质检 验 第12 部分 ：染 色体组 型分 析 GB/T 22213 水 产养 殖术 语 3 术语和 定义 GB/T 22213 界 定的 术语 和 定义适 用于 本标 准 。 4 学名与 分类 地位 学名 4.1 小黄鱼 （Larimichthys polyactis Bleeker, 1877 ） ，俗名 小鲜 、厚 鳞仔 、黄 花鱼、 小黄 花、 仔 梅 鱼。 分类地 位 4
5、.2 属 硬 骨 鱼 纲 （Osteichthyes ） ， 鲈 形 目 （Perciformes ） ， 石 首 鱼 科 （Sciaenidae ） ， 黄 鱼 属 （Larimichthys ）。 5 形态特 征 外部形 态 5.1 DB33/T 2433 2022 2 小黄鱼 体背 灰褐 色， 腹部 银白色 或金 黄色 ， 各 鳍灰 黄色。 体延 长， 侧 扁， 背 腹缘均 广弧 形， 体形 似 大黄鱼 。头大 ，吻 短而 尖 钝，具 发达黏 液腔 ，吻 上 孔3个4个， 不显 著，吻 缘孔5个 ，中 吻缘孔 圆形 ， 位于吻 缘上 方， 侧吻 缘孔 裂缝状 。 眼 中大， 上侧 位 ，
6、 位于 头的 前半 部； 眼 间 隔宽而 圆凸 ， 大 于眼 径。 口 前位， 口裂大 而斜 ，上下 颌约等 长，颌 骨向 后伸达 眼之后 缘下方 。 头 部、胸 鳍下部 及腹鳍 前部 被圆 鳞 ， 躯干其 余部 分至 尾柄 被栉 鳞 ， 尾鳍 基部 也被 小圆 鳞。 侧线发 达， 前 部稍 弯曲， 后 部平直， 伸达 尾鳍 后端 。 侧线上 鳞5 行7 行。 尾柄 短而宽 。 小 黄鱼 的外 形见 图1。 图1 小黄鱼 外形 图 可数性 状 5.2 小黄鱼 可数 形状 如下 ： 背鳍 ：D. ,-29 36 ； 臀鳍 ：A.II-910； 胸鳍 ：P.11 17 ； 腹鳍 ：I-5 ； 侧
7、线鳞 数：56枚70 枚，侧 线上 鳞数5枚7枚 ；侧线 下鳞 数 （5-A ）枚 （7-A ）枚。 鳃 耙数 ：左 侧第 一鳃 弓外侧 鳃耙 数7 枚11 枚+16 枚20 枚。 可量性 状 5.3 可量性 状的 比例 值见 表1 。 表1 小黄鱼 可量 性状 比例 值 体长/ 体高 体长/ 头长 头长/ 吻长 头长/ 眼径 尾柄长/ 尾柄高 头长/ 眼间距 体长/ 尾柄长 体长/ 尾柄高 3.5 4.1 3.04.2 3.65.3 3.76.3 2.5 2.9 2.6 3.0 4.4 5.0 11.8 13.4 内部构 造 5.4 鳔大，1 室， 几乎与 体腔 等 长，前 端长圆 形， 后
8、端尖 细， 银 白色， 鳔侧 具26对34对 缨须状 侧支 。 鳔支管 腹分 支下 小支 的前 小支和 后小 支两 分支 不等 长 （见 图2） 。 耳石 近椭 圆 形， 前 端宽 圆， 后 端狭 尖 ，DB33/T 2433 2022 3 里 缘 及外 缘 弧形 ； 背面 隆起 ， 有横 行 嵴棱 ； 腹面 有一 蝌 蚪形 印 记。 腹 膜， 灰黑 色 。脊 椎骨 数27 枚30 枚。 图2 小黄鱼 鳔支 管特 征 6 生长与 繁殖 生长 6.1 养殖小 黄鱼 初次 性成 熟1 年 龄和2 年龄 性成 熟期 平均 全 长，体 长和 体重 指标 见表2 。 表2 养殖小 黄鱼 生长 指标 年龄
9、 全长（cm） 体长（cm） 体重（g ） 1 2 0 . 5 3 . 3 1 7 . 6 3 . 1 7 3 . 5 9 2 7 . 0 2 2 2 4 . 5 3 . 8 2 1 . 6 3 . 7 1 2 0 . 5 9 5 7 . 0 2 小 黄鱼 体重 与体长 关 系式 分别见 式（1） 和式 （2） ： 养殖小 黄鱼 ： W=0.025L 2.809 ，R 2 = 0.908 ，样本 量（123 ） （1 ） 野生小 黄鱼 ： W=0.019 L 2.967 ，R 2 = 0.962 ，样本 量（89） （2 ） 式中： W 体重 ，单 位为 克（g ）； L 体长 ，单 位为 厘
10、米 （cm）； R 相关 系数 。 繁殖 6.2 6.2.1 性成熟 年龄 一般 雌 雄同 步 ，1年 龄性 成 熟 。 6.2.2 产卵类型 小黄鱼 鳔支管 分2 支 2 分支 不等 长 DB33/T 2433 2022 4 每年性 成熟 产卵 一次 ，在 繁殖期 可分 批产 卵 。 6.2.3 怀卵量 1龄性成 熟雌 鱼绝对 怀卵 量 （40 100 12 400 ）粒，2 龄性成 熟雌鱼 绝对 怀卵量 为 （99 00021 800 ） 粒 。 6.2.4 受精卵 受精卵 呈圆 球状 ，无 色透 明，卵 浮性 ，单 油球 ，卵 径 （1 413 73 ） m， 油球 径 （465 23
11、） m 。 7 细胞遗 传学 特征 小黄鱼 染色 体 共48条， 核 型为2n=6sm+42t ，NF=54 。 小黄鱼 染色 体核 型见 图3 。 图3 小黄鱼 染色 体核 型图 8 分子遗 传学 特征 小黄鱼 线粒 体COI 片 段的 碱 基序列 如下 ： CATAAAGATA TTGGCACCCT CTATCTAATT TTTGGTGCAT GAGCCGGAAT AGTGGGCACC 50 GGCCTAAGTC TCATTATTCG AGCAGAGCTA AGCCAGCCCG GCTCGCTTCT CGGAGACGAC 100 CAGATTTTTA ACGTAGTTGT TACGGCAC
12、AT GCCTTCGTTA TAATCTTCTT TATAGTAATA 150 CCCGTAATAA TCGGAGGGTT CGGAAACTGA CTCGTGCCTT TAATAATTGG CGCCCCCGAC 200 ATAGCATTTC CCCGAATAAA TAACATAAGC TTCTGACTTA TCCCCCCTGC TTTCATTATG 250 CTCGCAGCCT CATCAGCGGT TGAAGCAGGG GCCGGAACAG GGTGAACAGT CTACCCCCCA 300 CTTGCTGGAA ATCTCGCACA CGCAGGAGCT TCAGTCGACT TAGCCA
13、TTTT CGCTCTGCAC 350 CTTGCGGGTG TCTCTTCAAT CCTGGGGGCC ATCAACTTCA TCACAACAAT TCTTAACATA 400 AAACCCCCTG GCATAACCCA ATACCAAACA CCCCTGTTTG TGTGATCCGT TCTGATTACA 450 GCAGTCCTCC TCCTACTATC ACTGCCCGTC CTAGCTGCCG GCATCACAAT GCTTTTAACA 500 GACCGCAACC TCAACACAAC CTTTTTTGAC CCCTCAGGTG GAGGCGATCC CATCCTTTAT 550
14、CAACACCTAT TCTGATTTTT TGGTCACC 688 线粒体COI 序列 分析 方法 见 附录A 。 DB33/T 2433 2022 5 9 检测方 法 检验规 则 9.1 按GB/T 18654.1 的规 定执 行。 抽样方 法 9.2 按GB/T 18654.2 的规 定执 行。 性状测 定 9.3 按GB/T 18654.3 的规 定执 行。 年龄鉴 定 9.4 按GB/T 18654.4 的规 定执 行。年 龄鉴 定材 料为 耳石 。 怀卵量 的测 定 9.5 按GB/T 18654.6 的规 定执 行。 染色体 和核 型检 测 9.6 按GB/T 18654.12
15、的 规定 执 行。 分子遗 传学 检测 9.7 按第8 章执 行。 10 判定规 则 检测结 果不 符合 第5 章 和 第6章， 则判 定为 不合 格项 ， 有不合 格项 的样 品为 不合 格样品 。 DB33/T 2433 2022 6 附录A （资料 性） 线粒 体COI 序列 分析 方法 取小黄 鱼肌肉 组织 剪碎并 用10 % 蛋白酶K消化 后， 按 照标准 的酚 氯仿 抽提法 或者使 用试剂 盒进 行 总DNA 的提 取。 扩增引 物序 列为COI-F （5 -CATAAAGATATTGGCACC-3 ） 和COI-R （5 - GGTGACCAAAAAATCAGAA -3 ） 。
16、反应体 系为50 L， 每个 反 应体系 包括1.25 U 的Taq DNA 聚合 酶； 各种 反应 组份 的终浓 度为200 nmol/L 的 正反向 引物 ；200 mol/L 的每种dNTP ，10PCR 缓冲 液200 mmol/L Tris-HCl ，pH 8.4 ；200 mmol/L KCl ； 100 mmol/L (NH4)2SO4 ；15 mmol/L MgCl25 L，加Milli-Q H2O 至50 L 。 基因组DNA 约为20 ng 。 每组PCR 均 设阴 性对 照用 来 检测是 否存 在污 染。 PCR 参 数包括94 预 变性4 分钟 ， 94 变性40 秒， 58 退火30 秒，72 延 伸1分 钟，循 环35 次， 然后72 后延伸10分 钟。 所有PCR均在PCR 仪上 完成 。 扩 增产 物经 纯化 后经 测 序仪直 接测 序 ， 为 了保 证 序列的 准确 性 ， 对 所有 样品均 进行 双向 测序 。
