1、 ICS 65.020.20 CCS B05 23 黑龙江省地方标准 DB 23/T 3111 2022 大豆抗灰 斑病盆栽 鉴定技术 规程 Technical specification for the resistance identification of soybean cultivars against Cercospora sojina in pots 2022 - 03 - 03 发布 2022 - 04 - 02 实施 黑龙江省 市场监 督 管理局 发 布 DB 23/T 3111 2022 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分：
2、标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定 起草。 请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本文件 由黑 龙江 省农 业农 村厅提 出。 本文件 起草 单位 ： 黑龙 江 省农业 科学 院大 豆研 究所 、 黑 龙江 省农 业科 学院 植 物保护 研究 所 、 黑 龙江 省植检 植保 站 本文件 主要 起草 人 ： 张 瑞 萍、 王家 军、 高明 杰、 张必 弦、 于镇 华、 张武 、 栾 晓燕 、 李 宝英 、 王 广金 、 韩新春 、何 雯瑾 、唐 晓飞 、王雪 扬、 刘鑫 磊、 任洪 雷、张 丰屹 、李 鹏、 吴黎 D
3、B 23/T 3111 2022 1 大 豆抗灰 斑病盆栽 鉴定技 术规程 1 范围 本文件 规定 了大 豆灰 斑病 盆栽抗 性鉴 定技 术的 术语 和定义 、 大豆 灰斑 菌的 繁 殖、 盆栽 抗性 鉴定 、 病 情调查 及记 载、 抗性 评价 和试验 档案 等。 本 文件 适用 于 栽 培大 豆种 质资源 和野 生大 豆种 质资 源对灰 斑病 盆栽 抗性 评价 。 2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件
4、 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用 于 本 文件。 NY/T 3114.2 大豆 抗病 虫 性鉴定 技术 规范 第2 部分 3 术语和 定义 NY/T3114.2 界 定的 术语 和 定义适 用于 本文 件。 3.1 菌种纯 化 挑取大 豆灰 斑病 菌的 单个 分生孢 子， 将其 放置 于新 鲜的PDA 平 板上 ，以 获得 新 生菌落 的方 法。 3.2 活化培 养 将中、 长期 低温 保存 的 大 豆灰斑 病菌 菌种 ，重 新在 新鲜PDA 平 板上 培养 的过 程 。 3.3 菌种扩 繁 将活化 的 大 豆灰 斑病 菌 菌 种接种 在新 鲜的 高粱 粒培 养基上
5、培养 ，获 得大 量分 生孢子 的过 程。 3.4 鉴定圃 按完全 随机 区组 排列 的供 试大豆 种质 的盆 栽试 验小 区。 4 大豆灰 斑病 菌的 繁殖 4.1 菌 种活 化 DB 23/T 3111 2022 2 取4 下保 存的 供 试 大豆 灰 斑病菌 生 理 小种 菌株 ， 用 接种针 挑取 小块 菌体 至新 鲜PDA 平板 上，25 培 养7d 10d ，备 用。 4.2 菌种 扩繁 取活化 培养 的大 豆灰 斑病 菌菌块 （一 级培 养） ， 移 接 于灭菌 的高 梁粒 培养 基上 ， 2528 暗培 养 ， 每间隔2d充 分晃 动高 粱粒 接种瓶 ，保 证每 个高 粱粒 均
6、被感 染。15 d 20 d 后 洗 去高粱 粒表 面的 菌丝 ， 阴 干后装 入布 袋通 风干 燥处 保存备 用 。 5 盆栽抗 性鉴 定 5.1 鉴 定场 地的 设施 条件 温室、 盆栽 场地 或人 工气 候室应 具有 可控 灌溉 、光 照和通 风的 条件 。 5.2 鉴定 圃的 试验 设计 供试 大 豆种质 设接 种处理 和未接 种处理 ，每 处理3 次 重复， 完全随 机区 组 排列 ，并使 用当地 有代 表 性的抗 、感 大豆 品种 作对 照。 5.3 播种 播种时 间根 据试 验需 要而 定， 采 用人 工点 播， 株距3 5cm ， 盆 栽盆 宜选 用口 径30cm、 桶深30c
7、m 的盆 钵，每 盆播 种3 5株 ，或 根据实 际盆 钵大 小， 每处 理保苗 至少10株。 5.4 接种 5.4.1 孢子 悬浮 液制 备 取阴干 保存 的二 级菌 种， 用无菌 水浸 泡2 h 3 h 后 ， 洗净高 粱粒 表面 的菌 丝体 ， 将其 置于 铺有 灭 菌 滤纸的 托盘 中摊 平， 覆6 层 无菌纱 布， 喷洒 无菌 水保 湿，25 下 培养48h 。 待 高 粱粒表 面长 出灰 黑色 分生 孢子后 ， 用无 菌水 冲洗 ， 再用4 层纱 布过 滤得 孢子 悬 浮液 ， 配 制成 浓度 为1.0 10 5 个/mL的 分生 孢子 悬浮 液，添 加3% 蔗糖 粉（ 增强 孢子
8、悬 浮液 的附 着性 ）充 分混匀 ，用 于喷 雾接 种。 5.4.2 接种 时期 与方 法 在大豆 花前 期至 花初 期 ， 选择阴 天或 无风 天的 傍晚 ， 用 配制 好的 孢子 悬浮 液 喷洒叶 面1 2次 ， 时间 间隔为7d10d ，喷 雾量 以 在叶片 上形 成均 匀分 布雾 滴为宜 。 5.5 接种 前后 管理 接种前6h对 盆栽 苗洒 水浇 透，冲 去叶 片表 面灰 尘， 接种后 立即 遮阴48h 72h 。 6 病情调 查及 记载 6.1 调 查时 间 感病对 照的 叶片 充分 显症 后（接 种14d 左 右） ，调 查 并记载 叶部 发病 情况 。 DB 23/T 311
9、1 2022 3 6.2 调 查方 法 根据大 豆灰斑 病病 情分级 标准， 调查每 份大 豆种质 全部植 株的全 部叶 片发病 情况， 记载病 情级 别 ， 计算病 情指 数(DI) 。 病情指 数(DI)= 各级 病株 数 相应的 发病 级别 / 调 查总 株数 最大级 别 大豆灰 斑病病 情分 级标准 ：0级： 免疫 ，叶部 无病 斑 ；1级： 病斑 面积1% 以下 ；3级：病 斑面 积1% 5%；5 级： 病斑 面积6% 20% ； 7 级： 病斑 面积21% 50% ；9 级： 病斑 面积51% 以 上。 6.3 发 病率 记载 每一份 大豆 种质 随机 调查50 片叶 ，计 数发
10、病叶 片数 ， 并计算 发病 率 ， 公式 如下 ： 发病率 （ ） （发病 叶片 数 调 查总 叶片 数） 7 抗性评 价 7.1 鉴定 有效 性判 别 当鉴定 圃中 的感 病/ 高感 对 照品种 发病 率达 到60% 以 上 ，该批 次抗 灰斑 病鉴 定视 为有效 。 7.2 重复 鉴定 初次鉴 定中 表现 为高 抗、 中 抗的 大豆 种质 ，应 用相 同 的病 原菌 进行 重复 鉴定 。 7.3 抗性 评价 标准 根据调 查结 果， 计算 病情 指数， 并根 据病 情指 数进 行大豆 种质 的抗 病性 评价 （表1 ）。 表 1 大豆 对灰 斑病 抗性 评 价标准 病情指 数(DI) 抗性评 价 免疫 Immune （I ） 20% 高抗 Highly Resistant （HR ） 21% 40% 抗病 Resistant （R ） 41% 60% 中抗 Moderately resistant （MR ） 61% 80% 感病 Susceptible （S ） 80% 高感 Highly Susceptible （HS ） 8 试验档 案 建立供 试 大 豆种 质 的 鉴定 流程档 案， 内容 包括 菌种 活 化、 菌 种扩 繁、 接种 体制 备 、 鉴定 圃试 验设 计、 接种流 程、 发病 情况 调查 、鉴定 结果 分析 等。
