1、I C S 6 5 . 0 2 0 . 2 0 C C S B 1 6 黑 龙 江 省 地 方 标 准 D B 2 3 / T 3 0 9 6 - 2 0 2 2 水 稻 稻 瘟 病 抗 谱 鉴 定 技 术 规 程 2 0 2 2 - 0 1 - 2 9 发 布 2 0 2 2 - 0 2 - 2 8 实 施 黑 龙 江 省 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB23D B 2 3 / T 3 0 9 6 - 2 0 2 2 I 前 言 本 文 件 按 照 G B / T 1 . 1 - 2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分 ： 标 准 化 文 件 的 结 构 和 起
2、草 规 则 的 规 定 起 草 。 请 注 意 本 文 件 的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利 。 本 文 件 的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 专 利 的 责 任 。 本 文 件 由 黑 龙 江 省 农 业 农 村 厅 提 出 。 本 文 件 起 草 单 位 ： 黑 龙 江 省 农 业 科 学 院 生 物 技 术 研 究 所 。 本 文 件 主 要 起 草 人 ： 张 国 民 、 马 军 韬 、 邓 凌 韦 、 赵 文 生 、 宋 显 东 、 彭 友 良 、 王 春 荣 、 司 兆 胜 、 胡 亚 军 、 王 永 力 、 张 齐 凤 、 高 洪 儒 、 张 君 、 王 南 博
3、、 任 洋 。D B 2 3 / T 3 0 9 6 - 2 0 2 2 1 水 稻 稻 瘟 病 抗 谱 鉴 定 技 术 规 程 1 范 围 本 文 件 规 定 了 水 稻 稻 瘟 病 抗 谱 鉴 定 技 术 的 环 境 条 件 、 鉴 定 方 法 、 评 价 标 准 和 技 术 档 案 。 本 文 件 适 用 于 水 稻 品 种 的 抗 谱 鉴 定 。 2 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款 。 其 中 ， 注 日 期 的 引 用 性 文 件 ， 仅 该 日 期 对 应 的 版
4、 本 适 用 于 本 文 件 ； 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。 本 文 件 没 有 规 范 性 引 用 文 件 。 3 术 语 与 定 义 本 文 件 没 有 规 定 的 术 语 与 定 义 。 4 环 境 条 件 鉴 定 时 的 环 境 条 件 ， 温 度 、 相 对 湿 度 和 光 照 条 件 必 须 可 控 ， 温 度 范 围 2 6 2 8 ， 相 对 湿 度 1 0 0 % ， 具 有 遮 光 和 加 光 设 备 。 5 鉴 定 方 法 5 . 1 水 稻 苗 的 种 植 与 管 理 5
5、 . 1 . 1 水 稻 品 种 的 选 择 选 择 主 栽 或 高 潜 力 水 稻 品 种 1 0 份 1 5 份 用 于 试 验 。 同 时 ， 选 择 稻 瘟 病 发 生 较 重 地 块 ， 种 植 普 感 品 种 丽 江 新 团 黑 谷 或 蒙 古 稻 ， 用 于 采 集 、 分 离 当 地 稻 瘟 病 菌 株 。 5 . 1 . 2 浸 种 催 芽 水 稻 种 子 装 入 纱 网 袋 ， 在 1 1 1 2 的 清 水 中 浸 种 6 d 8 d 。 浸 种 完 成 后 ， 3 2 进 行 破 胸 处 理 ， 然 后 在 2 5 2 8 条 件 下 ， 催 芽 2 4 h 3 6 h
6、 。 5 . 1 . 3 播 种 选 取 发 芽 一 致 的 种 子 穴 播 于 1 2 8 孔 塑 料 育 秧 盘 内 （ 5 4 c m 2 8 c m 4 c m ） ， 每 孔 播 种 4 粒 或 5 粒 ， 3 次 重 复 ， 播 种 后 将 育 秧 盘 置 于 温 室 苗 床 上 ， 其 上 覆 盖 约 1 c m 厚 的 干 细 土 。 5 . 1 . 4 水 稻 苗 管 理D B 2 3 / T 3 0 9 6 - 2 0 2 2 2 水 稻 苗 全 程 不 施 用 任 何 杀 菌 剂 ， 其 他 按 常 规 管 理 。 5 . 2 接 种 体 制 备 将 稻 瘟 病 菌 点
7、接 于 番 茄 燕 麦 平 板 培 养 基 上 ， 2 6 2 8 培 养 至 菌 落 直 径 接 近 培 养 基 边 缘 ， 加 入 无 菌 水 洗 脱 菌 丝 和 分 生 孢 子 ， 将 其 涂 布 于 另 一 平 板 培 养 基 上 ， 超 净 工 作 台 内 吹 干 后 ， 2 6 2 8 光 照 培 养 至 表 面 产 生 一 层 气 生 菌 丝 。 用 无 菌 水 将 气 生 菌 丝 和 分 生 孢 子 冲 洗 干 净 ， 晾 干 后 罩 上 2 层 纱 布 ， 2 6 2 8 光 照 培 养 至 大 量 分 生 孢 子 产 生 。 用 含 0 . 0 2 5 % T w e e
8、n 2 0 的 无 菌 水 洗 脱 分 生 孢 子 ， 过 滤 后 将 其 浓 度 调 至 3 1 0 5 个 孢 子 / m L ， 现 用 现 配 ， 从 配 制 到 完 成 接 种 不 得 超 过 2 h 。 5 . 3 人 工 接 种 流 程 5 . 3 . 1 离 体 叶 片 准 备 在 水 稻 苗 中 选 取 5 叶 期 充 分 展 开 的 心 叶 ， 剪 成 长 约 5 c m 、 上 下 宽 度 基 本 一 致 的 叶 段 ， 每 个 品 种 从 不 同 植 株 选 取 3 个 叶 段 作 为 三 次 重 复 。 用 灭 菌 昆 虫 针 在 叶 片 正 面 、 垂 直 于 叶
9、脉 方 向 轻 轻 划 出 微 创 点 ， 每 个 叶 段 3 点 ， 每 点 长 2 m m 5 m m 。 将 两 层 灭 菌 滤 纸 片 平 铺 于 直 径 9 c m 的 培 养 皿 内 ， 加 无 菌 水 浸 湿 ， 表 面 无 明 水 。 将 灭 菌 牙 签 放 入 灭 菌 水 浸 泡 1 0 m i n 2 0 m i n ， 取 两 根 灭 菌 牙 签 放 在 浸 湿 的 滤 纸 片 表 面 ， 将 已 划 出 微 创 点 的 叶 段 摆 放 其 上 。 用 0 . 0 2 5 % T w e e n 2 0 水 溶 液 对 叶 段 均 匀 喷 雾 ， 培 养 皿 盖 内 侧
10、同 时 喷 雾 。 5 . 3 . 2 人 工 接 种 用 微 量 移 液 器 吸 取 分 生 孢 子 悬 浮 液 点 接 于 叶 段 的 微 创 点 ， 每 个 微 创 点 接 分 生 孢 子 悬 浮 液 5 L 1 0 L ， 盖 上 培 养 皿 盖 。 将 接 种 后 的 叶 段 在 2 6 2 8 、 相 对 湿 度 1 0 0 % 和 完 全 黑 暗 条 件 下 培 养 2 4 h 3 0 h ， 然 后 在 相 同 条 件 下 转 至 光 照 培 养 ， 直 至 发 病 。 5 . 4 病 情 调 查 5 . 4 . 1 调 查 时 间 在 接 种 后 3 d 开 始 调 查 ，
11、连 续 调 查 5 d ， 每 天 上 午 、 下 午 各 调 查 一 次 。 5 . 4 . 2 抗 感 反 应 型 调 查 标 准 接 种 点 部 位 无 病 斑 或 仅 有 很 小 的 黑 褐 色 坏 死 斑 ， 不 产 生 分 生 孢 子 ， 记 为 抗 病 反 应 型 ； 接 种 点 部 位 病 斑 较 大 ， 呈 梭 形 ， 中 心 有 灰 色 的 崩 溃 部 ， 可 以 产 生 菌 丝 和 分 生 孢 子 ， 崩 溃 部 边 缘 可 能 有 褐 色 坏 死 ， 最 外 层 为 黄 色 的 中 毒 部 ， 形 状 不 规 则 ， 记 为 感 病 反 应 型 。 5 . 4 . 3
12、调 查 方 法 每 个 水 稻 品 种 接 种 后 的 9 个 接 种 点 全 部 调 查 ， 将 抗 感 反 应 结 果 记 入 表 A . 1 。 6 评 价 标 准 6 . 1 接 种 有 效 性 评 价 标 准 每 次 接 种 均 以 普 感 品 种 丽 江 新 团 黑 谷 为 对 照 ， 对 照 表 现 为 典 型 的 感 病 反 应 型 时 ， 视 为 接 种 有 效 。 6 . 2 重 复 性 接 种 判 定 标 准D B 2 3 / T 3 0 9 6 - 2 0 2 2 3 在 第 一 次 接 种 后 ， 供 试 菌 株 表 现 为 抗 病 反 应 型 或 者 不 能 准 确
13、 判 定 其 反 应 型 ， 需 要 进 行 第 二 次 和 第 三 次 接 种 ， 只 要 其 中 一 次 表 现 为 感 病 反 应 型 ， 则 记 为 感 病 反 应 型 ， 否 则 记 为 抗 病 反 应 型 。 6 . 3 供 试 菌 株 数 量 标 准 室 内 鉴 定 水 稻 品 种 的 抗 瘟 性 ， 供 试 菌 株 必 须 为 单 孢 菌 株 ， 且 必 须 从 适 宜 种 植 区 内 种 植 的 普 感 品 种 丽 江 新 团 黑 谷 或 蒙 古 稻 上 分 离 获 得 。 建 议 每 个 县 （ 市 ） 菌 株 数 量 不 少 于 3 0 0 株 ， 或 者 连 续 3 年
14、 、 每 年 不 少 于 1 0 0 株 。 6 . 4 抗 瘟 性 评 价 标 准 依 据 各 县 或 县 级 市 水 稻 品 种 室 内 抗 谱 的 高 低 评 价 其 在 当 地 田 间 抗 瘟 性 的 优 劣 ， 评 价 标 准 见 表 A . 2 。 7 技 术 档 案 建 立 水 稻 稻 瘟 病 抗 谱 鉴 定 技 术 档 案 ， 内 容 包 括 环 境 条 件 、 鉴 定 方 法 、 评 价 标 准 及 试 验 数 据 等 。D B 2 3 / T 3 0 9 6 - 2 0 2 2 4 附 录 A 资 料 性 附 录 水 稻 稻 瘟 病 抗 谱 调 查 A . 1 水 稻 稻
15、瘟 病 抗 谱 调 查 见 表 A . 1 和 A . 2 。 表 A . 1 供 试 菌 株 抗 感 反 应 型 调 查 记 录 表 调 查 时 间 ： 水 稻 品 种 名 称 ： 生 育 期 ： 供试菌株编号 供试菌株名称 反应型 1 2 3 4 5 6 表 A . 2 水 稻 品 种 田 间 抗 瘟 性 评 价 标 准 田间抗瘟性评价 抗谱评价标准 抗病 R e s i s t a n t （R ） 抗谱7 0 % 中抗 M o d e r a t e l y r e s i s t a n t （M R ） 5 0 % 抗谱7 0 % 中感 M o d e r a t e l y S
16、u s c e p t i b l e （M S ） 3 0 % 抗谱5 0 % 感病 S u s c e p t i b l e （S ） 抗谱3 0 %D B 2 3 / T 3 0 9 6 - 2 0 2 2 5 参 考 文 献 1 N Y / T 3 2 5 7 水 稻 稻 瘟 病 抗 性 室 内 离 体 叶 片 鉴 定 技 术 规 程 2 D B 2 3 / T 2 7 3 5 水 稻 穗 颈 瘟 人 工 接 种 鉴 定 技 术 规 程 3 D B 2 3 0 8 / T 0 7 5 优 质 高 产 水 稻 品 种 “ 垦 稻 4 1 ” 生 产 技 术 操 作 规 程 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
