1、I C S 6 5 . 0 2 0 . 2 0 C C S B 0 5 DB23 黑 龙 江 省 地 方 标 准 D B 2 3 / T 3 0 5 1 2 0 2 1 溪 荪 组 培 繁 殖 技 术 规 程 2 0 2 1 - 1 2 - 2 4 发 布 2 0 2 2 - 0 1 - 2 3 实 施 黑 龙 江 省 市 场 监 督 管 理 局 发 布D B 2 3 / T 3 0 5 1 2 0 2 1 前 言 本 文 件 按 照 G B / T 1 . 1 2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分 ： 标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定 起
2、草 。 请 注 意 本 文 件 的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利 。 本 文 件 的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 专 利 的 责 任 。 本 文 件 由 黑 龙 江 省 林 业 和 草 原 局 提 出 。 本 文 件 起 草 单 位 ： 东 北 林 业 大 学 、 绥 棱 县 国 有 林 场 三 吉 台 林 场 、 海 伦 市 森 林 资 源 保 护 中 心 、 国 营 明 水 县 明 水 林 场 。 本 文 件 主 要 起 草 人 ： 王 玲 、 付 海 静 、 弓 悦 、 孙 振 明 、 李 诚 、 王 磊 、 叶 王 斌 、 史 恭 发 、 闫 蕾 、 吕 汝 彤 、
3、赵 蕊 阳 、 刘 桂 伶 、 杨 娟 、 裴 艳 春 。D B 2 3 / T 3 0 5 1 2 0 2 1 1 溪 荪 组 培 繁 殖 技 术 规 程 1 范 围 本 文 件 规 定 了 溪 荪 （ I r i s s a n g u i n e a D o n n . e x H o r n . ） 组 培 繁 殖 的 环 境 与 设 备 消 毒 、 培 养 基 配 制 、 培 养 条 件 、 无 菌 苗 培 育 、 外 植 体 获 取 和 处 理 、 愈 伤 组 织 诱 导 、 愈 伤 组 织 增 殖 、 不 定 芽 分 化 、 生 根 培 养 、 炼 苗 、 移 栽 和 生 产 档
4、 案 。 本 文 件 适 用 于 溪 荪 组 培 繁 殖 。 2 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款 。 其 中 ， 注 日 期 的 引 用 性 文 件 ， 仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件 ； 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。 L Y / T 1 8 8 2 2 0 1 0 林 木 组 织 培 养 育 苗 技 术 规 程 N Y / T 2 3 0 6 2 0
5、 1 3 花 卉 种 苗 组 培 快 繁 技 术 规 程 3 术 语 和 定 义 本 文 件 没 有 需 要 界 定 的 术 语 和 定 义 。 4 环 境 与 设 备 消 毒 4 . 1 接 种 室 消 毒 接 种 室 消 毒 按 N Y / T 2 3 0 6 2 0 1 3 中 8 . 6 的 规 定 执 行 。 4 . 2 培 养 室 消 毒 培 养 室 消 毒 按 N Y / T 2 3 0 6 2 0 1 3 中 8 . 7 的 规 定 执 行 。 4 . 3 超 净 工 作 台 消 毒 超 净 工 作 台 消 毒 按 N Y / T 2 3 0 6 2 0 1 3 中 8 . 5
6、 和 8 . 6 的 规 定 执 行 。 4 . 4 接 种 器 具 消 毒 接 种 器 具 按 N Y / T 2 3 0 6 2 0 1 3 中 8 . 4 的 规 定 执 行 。 5 培 养 基 配 制 5 . 1 母 液 配 制 培 养 基 母 液 配 制 按 N Y / T 2 3 0 6 2 0 1 3 中 7 . 3 的 规 定 执 行 。D B 2 3 / T 3 0 5 1 2 0 2 1 2 5 . 2 培 养 基 配 制 5 . 2 . 1 培 养 基 配 方 培 养 基 配 制 成 分 如 下 ： a ) 初 代 培 养 基 为 添 加 3 0 g / L 蔗 糖 +
7、3 g / L 琼 脂 粉 的 M S 培 养 基 ， 灭 菌 前 培 养 基 p H 值 调 为 5 . 8 ； b ) 继 代 培 养 基 为 添 加 3 0 g / L 蔗 糖 的 M S 固 体 培 养 基 ， 灭 菌 前 培 养 基 p H 值 调 为 5 . 8 6 . 0 ； c ) 愈 伤 组 织 诱 导 培 养 基 为 添 加 6 - B A 1 . 0 m g / L + 2 , 4 - D 1 . 0 m g / L + N A A 0 . 4 m g / L + 蔗 糖 3 0 g / L 的 M S 固 体 培 养 基 ， 灭 菌 前 培 养 基 p H 值 调 为
8、5 . 8 6 . 0 ； d ) 愈 伤 组 织 增 殖 培 养 基 为 添 加 6 - B A 0 . 5 m g / L + 2 , 4 - D 0 . 5 m g / L + 蔗 糖 3 0 g / L 的 M S 固 体 培 养 基 ， 灭 菌 前 培 养 基 p H 值 调 为 5 . 8 6 . 0 ； e ) 分 化 培 养 基 为 添 加 6 - B A 2 . 0 m g / L + N A A 0 . 1 m g / L + 蔗 糖 3 0 g / L 的 M S 固 体 培 养 基 ， 灭 菌 前 培 养 基 p H 值 调 为 5 . 8 6 . 0 ； f ) 生
9、根 培 养 基 为 添 加 N A A 0 . 5 m g / L + 活 性 炭 1 . 0 g / L + 蔗 糖 3 0 g / L 的 M S 固 体 培 养 基 ， 灭 菌 前 培 养 基 p H 值 调 为 5 . 8 6 . 0 。 5 . 2 . 2 培 养 基 配 制 方 法 培 养 基 配 制 方 法 按 N Y / T 2 3 0 6 2 0 1 3 中 7 . 4 的 规 定 执 行 。 5 . 3 培 养 基 灭 菌 及 保 存 培 养 基 灭 菌 及 保 存 方 法 按 L Y / T 1 8 8 2 2 0 1 0 中 4 . 2 的 规 定 进 行 。 6 培
10、养 条 件 光 照 周 期 1 4 h / d 、 光 照 强 度 3 0 0 0 L u x 5 0 0 0 L u x ， 培 养 温 度 2 4 2 6 ， 空 气 相 对 湿 度 6 0 % 8 0 % 。 7 无 菌 苗 培 育 7 . 1 种 子 消 毒 挑 选 颗 粒 饱 满 的 种 子 ， 用 稀 释 5 0 倍 的 洗 洁 剂 水 溶 液 搅 拌 清 洗 后 ， 流 水 冲 洗 干 净 ， 在 室 温 下 用 初 始 温 度 为 8 0 的 水 浸 泡 种 子 2 4 h ， 倒 掉 水 后 吸 干 。 在 超 净 工 作 台 内 ， 将 种 子 用 7 5 % 乙 醇 浸
11、泡 3 0 s ， 无 菌 水 冲 洗 3 遍 5 遍 ， 再 用 4 次 氯 酸 钠 水 溶 液 浸 泡 并 摇 动 2 0 m i n ， 用 无 菌 水 冲 洗 5 次 并 浸 泡 1 0 m i n ， 水 倒 掉 后 将 种 子 放 到 滤 纸 上 吸 干 备 用 。 7 . 2 无 菌 接 种 消 毒 后 的 种 子 接 入 初 代 培 养 基 上 培 养 。 8 外 植 体 获 取 和 处 理 种 子 萌 发 幼 苗 具 3 片 4 片 叶 时 ， 在 无 菌 条 件 下 将 根 部 剪 掉 ， 叶 片 保 留 2 . 0 c m 3 . 0 c m 长 ， 接 种 到 继 代
12、培 养 基 中 萌 发 根 系 ， 剪 取 带 有 二 级 须 根 的 一 级 须 根 ， 切 除 二 级 须 根 后 备 用 。 9 愈 伤 组 织 诱 导D B 2 3 / T 3 0 5 1 2 0 2 1 3 将 须 根 切 至 长 度 为 1 . 0 c m 1 . 5 c m ， 接 入 愈 伤 组 织 诱 导 培 养 基 中 培 养 。 1 0 愈 伤 组 织 增 殖 从 根 段 上 切 取 黄 色 、 颗 粒 明 显 的 愈 伤 组 织 接 入 愈 伤 组 织 增 殖 培 养 基 中 。 对 产 生 内 生 菌 的 愈 伤 组 织 ， 可 转 到 添 加 了 1 0 0 m g
13、 / L 青 霉 素 G 钠 的 增 殖 培 养 基 上 培 养 。 待 内 生 菌 消 失 后 ， 再 移 回 增 殖 培 养 基 中 。 1 1 不 定 芽 分 化 将 增 殖 后 的 愈 伤 组 织 分 割 成 直 径 5 m m 的 小 块 ， 接 入 分 化 培 养 基 中 培 养 。 1 2 生 根 培 养 当 不 定 芽 高 度 3 c m 时 ， 将 不 定 芽 单 独 切 离 下 来 ， 转 入 生 根 培 养 基 中 培 养 。 1 3 炼 苗 当 组 培 苗 根 系 长 度 3 c m 时 ， 打 开 组 培 瓶 炼 苗 3 d ， 炼 苗 期 间 应 对 叶 表 面 喷
14、 洒 自 来 水 保 湿 。 炼 苗 后 可 在 温 室 内 移 栽 。 1 4 移 栽 1 4 . 1 移 栽 准 备 将 高 温 消 毒 的 草 炭 土 与 蛭 石 按 照 1 : 1 的 比 例 混 合 后 装 入 5 0 孔 穴 盘 中 ， 并 将 穴 盘 底 部 浸 入 水 中 至 盆 中 土 壤 湿 润 。 1 4 . 2 移 栽 取 出 组 培 苗 ， 用 清 水 洗 净 基 部 培 养 基 ， 修 剪 根 ， 保 留 2 c m ， 移 栽 至 穴 盘 中 ， 浇 透 水 。 1 4 . 3 移 栽 后 管 理 移 栽 初 期 ， 保 持 空 气 湿 度 8 0 % ， 适 时 浇 水 ， 保 持 基 质 湿 润 ， 温 度 控 制 在 1 8 2 5 ， 逐 步 增 加 光 照 。 在 5 月 中 旬 8 月 中 旬 可 进 行 室 外 移 栽 ， 移 栽 后 2 周 内 保 持 土 壤 湿 润 。 1 5 生 产 档 案 应 建 立 生 产 档 案 ， 内 容 包 括 ： 环 境 与 设 备 消 毒 、 培 养 基 配 制 、 培 养 条 件 、 无 菌 苗 培 育 、 外 植 体 获 取 和 处 理 、 愈 伤 组 织 诱 导 、 愈 伤 组 织 增 殖 、 不 定 芽 分 化 、 生 根 培 养 、 炼 苗 和 移 栽 等 。 _
