1、 ICS 65.020.30 CCS B41 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 2506 2022 羊捻转血 矛线虫检 疫鉴定方 法 Quarantine identification method of haemonchus contortus in sheep 2022-01-25 发布 2022-02-25 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 2506 2022 I 前 言 GB/T 1.1 2020 1 SAM/TC 19 DB15/T 2506 2022 1 羊捻转血 矛线虫 检疫鉴定 方法 1 范围 2 规范性 引用 文件 3 术语和 定义 捻转
2、血 矛线 虫 haemonchus contortus A 捻转血 矛线 虫感 染 haemonchus contortus infection 捻转血 矛线 虫病 haemonchosis contortus 4 诊断依 据 流行病 学 临床表 现 4.2.1 急性型 DB15/T 2506 2022 2 4.2.2 慢性型 实验室 检查 4.3.1 4.3.2 G C 4.3.3 G D 4.3.4 DNA PCR G 4.3.5 G E 5 检疫鉴 定原 则 4.3.1 4.3.2 4.3.3 4.3.4 4.3.5 6 诊断 疑似捻 转血 矛线 虫感 染 4.1 4.2 4.3.1 4
3、.3.2 4.3.3 确诊捻 转血 矛线 虫感 染 4.3.4 4.3.5 7 鉴别诊 断 F F DB15/T 2506 2022 3 A A 附录A （资料 性） 捻转血 矛线 虫分 类地 位 Hoberg EP , 2004 A.1 Haemonchus contortus Animalia Nematoda Strongylida Trichostrongylidae Haemonchus 12 1 * * * 图A.1 血矛 线虫 属线 虫的 系统 发 育树（Hoberg EP 等, 2004 ） DB15/T 2506 2022 4 B B 附录B （资料 性） 捻转血 矛线 虫生
4、 活史 B.1 27 5 d , 15 d 18 d 图B.1 捻转 血矛 线虫 生活 史 DB15/T 2506 2022 5 C C 附录C （资料 性） 捻转血 矛线 虫虫 卵形 态 40 C.1 70.9 m45.9 m 65.5 m43.3 m 95.0 m46.6 m 1.0 m 图C.1 粪便 中检 出的 捻转 血矛 线 虫虫卵 （40 ） 400 C.2 图C.2 粪便 中检 出的 捻转 血矛 线 虫虫卵 （400 ） DB15/T 2506 2022 6 D D 附录D （资料 性） 捻转血 矛线 虫感 染性 三期 幼虫形 态 40 D.1 0.65 0.75 mm0.025
5、 0.030 mm 16 0.054 mm 0.068 mm 图D.1 捻转 血矛 线虫 感染 性三 期 幼虫形 态（40 ） DB15/T 2506 2022 7 E E 附录E （资料 性） 捻转血 矛线 虫成 虫形 态 E.1 1.8 cm 3.0 cm 1.5 cm 2.2 cm Y” A 胃黏膜上的捻转血矛线虫成 虫 B 胃黏膜上大 量的捻转血矛线虫 C 100 D 100 E 捻转血矛线虫雌虫阴门盖（100） F 捻转血矛线 虫雄虫交合刺（400） 图E.1 捻转 血矛 线虫 形态 结构 DB15/T 2506 2022 8 F F 附录F （资料 性） 鉴别诊 断 F.1 F.1
6、 表F.1 羊粪 便中 常见 胃肠 道线 虫 虫卵特 征 ( m) ( m) Hcemonchus contortus 66 95 43 46 Ostertagia circumcincta 89 95 46 59 Cooperia erschovi 67 73 22 41 Trichostrongylus colubriformis 73 76 40 43 Bunostomum trigonocephalum 82 97 47 57 Oesophagostomum columbianum 8 16 65 75 40 45 DB15/T 2506 2022 9 表F.1 羊 粪便 中常 见胃
7、肠 道线虫 虫卵 特征 ( m) ( m) Chabertia ovina 85 130 42 56 F.2 F.1 图F.1 捻转 血矛 线虫 感染 性幼 虫 与羊其 他圆 线虫 的感 染性 幼虫 DB15/T 2506 2022 10 G G 附录G （规范 性） 实验室 检查 G.1 粪便虫 卵检 测 G.1.1 原理 G.1.2 实验设 备、 耗材 及试 剂 40 G.1.3 饱和盐 水配 置方 法 400 g 1000 mL G.1.4 检查方 法 G.1.4.1 样本处 理 2 g 50 mL 20 mL 40 30 min G.1.4.2 虫卵检 测 G.2 捻转血 矛线 虫感
8、染性 幼虫 检测 G.2.1 实验设 备及 耗材 15 mL G.2.2 检查方 法 G.2.2.1 感染性 幼虫 培养 3 28 7 d 4000 r/min 5 min G.2.2.2 感染性 幼虫 检测 G.3 普通PCR 鉴定 DB15/T 2506 2022 11 G.3.1 实验设 备、 耗材 及试 剂 PCR PCR DNA 50 TAE DNA Marker 2000 PCR Mix G.3.2 鉴定方 法 G.3.2.1 粪便基 因 组DNA 提取 DNA DNA DNA G.3.2.2 捻转血 矛线 虫特 异性 引物 鉴定 DNA HAE 5 - CAAATGGCATTTG
9、TCTTTT AG-3 /NC2 5 - TTAGTTTCTTTTCCTCCGCT-3 PCR PCR 25 L 10 mmol/L 1 L 2 PCR Mix 12.5 L DNA 2 L 8.5 L PCR 94 5 min 94 30 s 55 30 s 72 30 s 35 72 7 min 4 G.3.2.3 结果判 定 265bp caaatggcat ttgtctttta gacaattccc atttcagttc aagaacatat acatgcaacg tgatgttatg aaattgtaac attcctgaat gatatgaaca tgttgccact atttga
10、gtgt actcagcgaa tattgagatt gacttagata gtgacttgta tggcgacgat gttcttttat catttgtata atgcaacctg agctcaggcg tgattacccg ctgaacttaa gcatatcatt tagcggagga aaagaaacta a G.4 成虫检 查 G.4.1 实验设 备、 耗材 及试 剂 G.4.2 检查方 法 G.4.2.1 真胃内 容物 淘洗 G.4.2.2 捻转血 矛线 虫成 虫挑 拣 DB15/T 2506 2022 12 75 % = 1 19 G.4.2.3 捻转血 矛线 虫成 虫鉴 定 =1 2 1 1 2 min 3 min
