1、 ICS 65.020.30 CCS B43 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 2508 2022 绒山羊鲜 精 稀释液 配方 Formula of cashmere goats fresh semen diluent 2022-01-25 发布 2022-02-25 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 2508 2022 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分： 标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定 起草。 本文件 由内 蒙古 自治 区畜 牧业标 准化 技术 委员 会（SAM/TC 19 ） 归口
2、。 本文件 起草 单位 ： 内蒙 古 自治区 农牧 业科 学院 、 巴 彦淖尔 市农 牧科 学研 究所 、 鄂 托克 旗农 牧技 术推 广中心 、阿拉 善白 绒山羊 种羊场 、内蒙 古亿 维白绒 山羊有 限责任 公司 、鄂尔 多斯市 立新实 业有 限公司 。 本文件 主要 起草 人 ： 刘 斌 、 马 跃军 、 吴铁 成 、 特 日 格勒 、 王 涛 、 赵 若阳 、 胥 福勋 、 苏 日娜 、 乌兰 其 其格、 王娜 、高 玉林 、何 云梅、 李玉 荣。 DB15/T 2508 2022 1 绒山羊鲜 精稀释 液配方 1 范围 本文件 规定 了绒 山羊 鲜精 稀释液 配方 的术 语和 定义
3、， 器械 和药 品试 剂， 要求 ， 稀释 液， 稀释 ， 分 装 与标记 ，保 存、 运输 和检 查等技 术内 容。 本文件 适用 于绒 山羊 人工 授精的 鲜精 稀释 、保 存及 精液处 理。 2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用 于 本 文件。 NY/T 2893 绒 山羊 饲养 管 理技术 规范 DB15/T 2244.3 绒 山羊 繁 殖
4、技术 规范 第3 部分:人 工 授精 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。 原精 original semen 采自绒 山羊 公羊 未经 处理 的精液 。 鲜精 fresh semen 原精稀 释后 未经 冷冻 的精 液。 精子活 力 sperm motility 在37 环 境下 前进 运动 精 子占总 精子 数的 百分 率。 精子密 度 sperm density 每毫升 精液 中含 有的 精子 数量。 DB15/T 2508 2022 2 精子畸 形率 abnormal sperm percentage 畸形精 子占 总精 子数 的百 分率。 4 器械和 药品 试剂
5、器械 电子天 平 （ 精度 小于 等于0.01 g ） ， 普通 生物 显微 镜 ， 水浴 锅， 羊 用假 阴道， 开膣器 ， 温 度计， 采 精架， 输精 器， 恒温 箱， 烧杯， 容量 瓶（100 ml ） ，量筒 ，锥 形瓶 ，玻 璃漏 斗，玻 璃棒 ，镊 子。 药品试 剂 无水葡 萄糖， 柠檬 酸钠， 乙二胺 四乙酸 （EDTA ） ， 蔗糖， 青霉素 ，链 霉素， 新鲜鸡 蛋，生 理盐 水， 蒸馏水 ，酒 精， 凡士 林等, 稀释液 基础 液所 用试 剂均 为分析 纯。 消毒 根据材 质特 点， 做好 清洗 、 消毒 、 烘 干处 理， 金属 及玻璃 器械 需进 行高 温消 毒， 假
6、 阴道 内胎 清洁 干 净后用75 % 酒精 棉球 消毒 、待酒 精挥 发完 全后 再用 生理盐 水棉 球擦 拭备 用。 5 要求 供精种 羊 体质健 康 ， 无 遗传 病， 不允 许有已 发布 的动 物防 疫法 中所明 确的 疾病 ， 日常 饲 养管理 按照NY/T 2893 的规定 。 采精季 节 最优的 采精 时间 是8 月下 旬 至11月 下旬 ，也 可在4月 至5月。 精液品 质 按照DB15/T 2244.3 的相 关 要求进 行采 精， 精液 品质 要求见 附录A。 6 稀释液 配方 配方参 见附 录B 。 配制 按稀释 液配 方， 配制100 ml 基础 液， 过滤 消毒 后，
7、 加 入 新鲜 卵黄 、 青 霉素 、 链 霉素并 混匀 。 所 有 稀 释液需 现用 现配 。 标记 DB15/T 2508 2022 3 配制的 稀释 液在 使用 前要 标记稀 释液 配方 代号 、配 制时间 和配 制人 员。 保存 稀释液 冰箱4 保存 ，超 过有效 贮存 期的 变质 稀释 液应废 弃。 稀释 6.5.1 原精采 集后 应尽 快稀 释。 6.5.2 稀释倍 数的确 定： 根据精 子密度 、活力 ，配 种母羊 数 而定 稀释比 例， 稀释后 的精液 ，精子 密 度 大于等 于6 10 8 个 ，精 子 活力大 于等 于 65 %。 采用 配方一 ，最 大稀 释比 例 为2
8、倍； 采用 配方 二和 配方 三，可 以稀 释 到515 倍。 6.5.3 稀释液 与原 精要 求等 温稀 释,以 原精 温度 为标 准, 来 调节稀 释液 的温 度， 不能 反过来 操作 。 6.5.4 稀释时,将 稀 释液 沿 盛精 液的 杯( 瓶)壁 缓 慢加 入 到原精 中, 然后 轻 轻摇 动 或用 消毒 玻 璃 棒搅 拌, 使之混 合均 匀。 6.5.5 如作高 倍稀 释 （10 倍以 上 ） 时, 分 两步 进行 ， 先 加入 稀释液 总量 的1/3, 混合 均 匀,静置 2 min 5 min 后再 将余 下的 稀释 液沿壁 缓慢 加入,以 防造 成 “稀释 打击 ”。 6.5
9、.6 稀释后 静 置2 min 5 min 再作精 子活 力检 查, 检查 合 格后, 即可 进行 分装 与保 存 。 6.5.7 不同配 方稀 释液 不应 随意 混合使 用。 7 分装与 标记 分装 原精 稀 释后 采用 试管 等容 器分装 ， 容器 材质 应对 精 子无害 并经 清洗 、 干燥 和 灭菌处 理 ， 容 器分 装精 液时应 与精 液等 温。 标记 原精 稀 释、 分装 后， 标明 生产单 位、 品种 、公 羊号 、生产 日期 、稀 释液 配方 代号和 操作 人。 8 保存、 运输 及检 查 保存 鲜精用812 层 纱布 包裹 再 置于0 5 恒温 箱中 存放， 每隔8 h ，
10、将 精液 重 新轻轻 混匀 。 运输 运输过 程中 ，将 鲜精 放置 在0 5 的 恒温 箱中 ，避免 剧烈 震动 。 检查 输精前 按照 附录A对 鲜精 进 行检查 ，检 查合 格后 方可 用于输 精。 DB15/T 2508 2022 4 A A 附录A （规范 性） 绒山羊 精液 品质 评估 方法 A.1 原精量 用带有 刻度 的集 精杯 直接 读取原 精量 。 A.2 色泽 绒山羊 的精 液正 常呈 乳白 色或浅 乳黄 色， 如果 颜色 异常， 应该 弃掉 。 A.3 精子密 度 用血细 胞计 数法 测定 每毫 升中精 子数 量 ， 将20 L 原精液 用3 % NaCl 溶 液稀 释
11、100 倍。 在200倍镜下 计数计 数室5个 大方 格 （ 四 个角和 中间 处 ） 内 精子 总 数N ， 将该 数乘 以500 万 ， 最终精 子数 等于510 6 N个 /ml 。 精子 密度 大于 等于6 10 8 个ml 为 合格 。 A.4 精子活力 用稀释 液将 原精 液加 以稀 释， 取 一滴 于载 玻片 上， 盖 上盖玻 片， 置于37 显 微 镜恒温 台上 ， 在200 400 倍 下观 察每 个精 液样 本3 个视 野下 的运 动状 态， 主 观评估 范围 为0 % 100 % 。 精子 活力 大于 等于65 % 为合格 。 A.5 精子畸 形率 将精液 样本 用稀 释
12、液 稀释100 倍， 取一滴 制成 抹片。 自然干 燥后， 用95 % 的 酒 精固定3 min ， 然 后用 伊红染 色5 min ， 再 经水 洗 ， 自 然风 干后 用相 差显 微 镜观察 ， 计数200 个 精子 计 算出精 子畸 形率 ， 精子 畸 形率小 于等 于20 %为 合格 。 DB15/T 2508 2022 5 B B 附录B （资料 性） 稀释液 配方 稀释液 配方 见表B.1 。 表B.1 稀释 液配 方 成分 配方一 配方二 配方三 基础液 生理盐水（ml） 100 无水葡萄糖（g ） 3.0 3.0 柠檬酸钠（g ） 1.4 1.4 EDTA （g ） 0.12 蔗糖（g ） 1.8 蒸馏水（ml） 100 100 稀释液 基础液（容量% ） 100 100 100 新鲜卵黄（容量% ） 10 10 青霉素（IU/ml ） 1000 1000 链霉素（IU/ml ） 1000 1000 稀释后精液保存时间（h ） 1 24 60
