1、I C S 1 1 . 0 2 0 C C S C 6 1 WS 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准 W S / T 7 9 1 2 0 2 1 钩 虫 检 测 及 虫 种 鉴 定 标 准 钩 蚴 培 养 法 D e t e c t i o n a n d i d e n t i f i c a t i o n s t a n d a r d o f h o o k w o r m H o o k w o r m l a r v a e c o p r o c u l t u r e t e c h n i q u e s 2 0 2 1 1 1 2 3 发 布 2 0 2 2
2、 0 5 0 1 实 施 中 华 人 民 共 和 国 国 家 卫 生 健 康 委 员 会 发 布W S / T 7 9 1 2 0 2 1 I 前 言 本 标 准 由 国 家 卫 生 健 康 标 准 委 员 会 寄 生 虫 病 标 准 专 业 委 员 会 负 责 技 术 审 查 和 技 术 咨 询 ， 由 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 负 责 协 调 性 和 格 式 审 查 ， 由 国 家 卫 生 健 康 委 疾 病 预 防 控 制 局 负 责 业 务 管 理 、 法 规 司 负 责 统 筹 管 理 。 本 标 准 起 草 单 位 ： 河 南 省 疾 病 预 防 控 制 中 心 、
3、中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 寄 生 虫 病 预 防 控 制 所 、 浙 江 省 疾 病 预 防 控 制 中 心 。 本 标 准 主 要 起 草 人 ： 许 汴 利 、 邓 艳 、 郑 彬 、 陈 伟 奇 、 张 雅 兰 、 陈 颖 丹 、 阮 卫 、 张 红 卫 。W S / T 7 9 1 2 0 2 1 1 钩 虫 检 测 及 虫 种 鉴 定 标 准 钩 蚴 培 养 法 1 范 围 本 标 准 规 定 了 钩 蚴 培 养 法 对 十 二 指 肠 钩 口 线 虫 和 美 洲 板 口 线 虫 进 行 检 测 的 方 法 。 本 标 准 适 用 于 各 级 疾 病 预 防 控 制 机
4、 构 和 医 疗 机 构 对 钩 虫 的 检 测 和 虫 种 鉴 定 。 2 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 标 准 必 不 可 少 的 条 款 。 其 中 ， 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 标 准 ； 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 标 准 。 W S 2 3 3 病 原 微 生 物 实 验 室 生 物 安 全 通 用 准 则 W S / T 4 3 9 钩 虫 病 的
5、 诊 断 3 术 语 和 定 义 W S / T 4 3 9 界 定 的 以 及 下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 标 准 。 3 . 1 十 二 指 肠 钩 口 线 虫 A n c y l o s t o m a d u o d e n a l e 十 二 指 肠 钩 虫 属 于 钩 口 科 、 钩 口 线 虫 属 ， 我 国 主 要 分 布 于 北 方 地 区 。 3 . 2 美 洲 板 口 线 虫 N e c a t o r a m e r i c a n u s 美 洲 钩 虫 属 于 钩 口 科 、 板 口 线 虫 属 ， 我 国 主 要 分 布 于 南 方 地 区 。 3
6、 . 3 钩 蚴 h o o k w o r m l a r v a e 钩 虫 的 幼 虫 。 注 ： 分 为 杆 状 蚴 和 丝 状 蚴 两 个 阶 段 ， 丝 状 蚴 为 感 染 阶 段 幼 虫 ， 其 形 态 特 征 有 助 于 虫 种 鉴 定 。W S / T 7 9 1 2 0 2 1 2 4 仪 器 设 备 4 . 1 生 物 显 微 镜 （ 物 镜 1 0 倍 、 4 0 倍 ， 目 镜 1 0 倍 ） 。 4 . 2 培 养 箱 （ 隔 水 式 恒 温 ） 。 4 . 3 目 镜 测 微 尺 （ 5 m m / 5 0 / 0 . 1 m m ） 和 物 镜 测 微 尺 （
7、1 m m / 1 0 0 / 0 . 0 1 m m ） 。 5 试 剂 或 材 料 5 . 1 试 管 （ 1 2 . 0 c m 1 . 5 c m ） 或 1 5 m L 离 心 管 。 5 . 2 滤 纸 条 （ 1 2 c m 2 c m ） ， 边 缘 整 齐 、 无 毛 边 ， 对 孔 径 、 流 速 无 要 求 。 5 . 3 蒸 馏 水 。 5 . 4 试 管 架 。 5 . 5 载 玻 片 （ 7 6 m m 2 6 m m ） 。 5 . 6 盖 玻 片 （ 2 0 m m 2 0 m m ) 。 5 . 7 吸 管 （ 2 m L 、 1 0 m L ） 。 5 .
8、8 镊 子 。 5 . 9 刮 棒 （ 加 藤 板 配 套 刮 棒 适 用 ） 。 5 . 1 0 温 度 计 。 6 检 测 步 骤 6 . 1 样 本 采 集 取 5 g 1 0 g 新 鲜 粪 便 置 于 粪 便 采 样 盒 或 采 样 袋 内 ， 标 记 待 检 样 本 编 号 、 采 集 日 期 ， 样 本 应 及 时 送 检 。 如 未 能 及 时 检 测 ， 在 4 8 条 件 下 冷 藏 保 存 ， 时 间 应 不 超 过 2 4 h 。 6 . 2 样 本 检 测 6 . 2 . 1 在 试 管 上 标 注 待 检 样 本 编 号 和 日 期 。 6 . 2 . 2 试 管
9、内 加 入 室 温 蒸 馏 水 约 2 m L 。 6 . 2 . 3 将 滤 纸 条 沿 长 轴 对 折 ， 以 保 持 挺 直 。 6 . 2 . 4 用 刮 棒 取 0 . 3 g 0 . 5 g 粪 便 ， 均 匀 涂 抹 于 滤 纸 中 段 偏 上 部 ， 左 右 各 留 约 0 . 5 c m ， 上 端 留 约 1 c m ， 下 端 留 约 2 . 5 c m 空 白 （ 见 附 录 A ） 。 6 . 2 . 5 将 涂 有 粪 便 的 滤 纸 插 入 试 管 ， 滤 纸 插 入 水 中 的 深 度 以 粪 膜 下 缘 距 水 面 上 1 c m 为 宜 （ 见 附 录 A
10、） 。W S / T 7 9 1 2 0 2 1 3 6 . 2 . 6 将 试 管 置 于 培 养 箱 内 ， 3 1 培 养 4 d ， 或 室 温 2 6 3 0 培 养 6 d 8 d 。 培 养 期 间 每 日 观 察 管 底 水 量 ， 必 要 时 沿 管 壁 加 蒸 馏 水 以 保 持 原 始 液 面 高 度 ， 防 止 干 燥 。 6 . 2 . 7 分 离 幼 虫 ： 取 出 试 管 ， 沿 管 壁 加 入 4 5 蒸 馏 水 ， 淹 没 滤 纸 上 的 粪 膜 ， 1 h 后 用 镊 子 取 出 滤 纸 条 ， 弃 去 。 将 培 养 管 置 于 试 管 架 上 静 置 1
11、 h ， 吸 去 上 清 液 ， 留 取 约 0 . 5 m L 沉 淀 液 。 6 . 3 镜 下 观 察 将 试 管 底 部 浸 于 5 0 6 0 的 热 水 内 制 动 2 m i n 3 m i n 。 吸 取 管 内 沉 淀 物 1 滴 3 滴 于 载 玻 片 上 ， 加 盖 玻 片 ， 将 载 玻 片 置 于 低 倍 镜 下 （ 1 0 1 0 ） 弱 光 检 查 ， 发 现 疑 似 虫 体 后 置 于 高 倍 镜 下 （ 4 0 1 0 ） 观 察 形 态 结 构 ， 用 测 微 尺 测 量 幼 虫 大 小 。 6 . 4 结 果 判 定 若 一 份 样 本 所 有 沉 淀 物
12、 中 均 未 检 出 钩 蚴 ， 判 为 阴 性 ； 若 检 出 钩 蚴 ， 判 为 阳 性 。 根 据 丝 状 蚴 形 态 特 征 进 行 十 二 指 肠 钩 虫 和 美 洲 钩 虫 的 鉴 定 （ 见 附 录 B ） ， 并 与 其 他 土 源 性 线 虫 丝 状 蚴 进 行 鉴 别 （ 见 附 录 C ） 。 6 . 5 废 弃 物 处 置 实 验 中 所 有 材 料 应 按 照 W S 2 3 3 进 行 处 理 。W S / T 7 9 1 2 0 2 1 4 A A 附 录 A （ 资 料 性 ） 钩 蚴 培 养 法 操 作 示 意 图 钩 蚴 培 养 法 操 作 可 参 照 图
13、A . 1 和 图 A . 2 。 图 A . 1 粪 样 涂 抹 示 意 图 图 A . 2 滤 纸 条 及 离 心 管 位 置 示 意 图W S / T 7 9 1 2 0 2 1 5 附 录 B （ 资 料 性 ） 十 二 指 肠 钩 虫 与 美 洲 钩 虫 丝 状 蚴 的 鉴 别 钩 蚴 分 为 杆 状 蚴 和 丝 状 蚴 两 个 阶 段 ， 自 卵 内 刚 孵 出 的 幼 虫 为 杆 状 蚴 ， 杆 状 蚴 经 过 两 期 发 育 成 为 丝 状 蚴 ， 长 约 0 . 5 m m 0 . 7 m m ， 体 表 覆 有 鞘 膜 ， 口 腔 封 闭 ， 在 与 食 管 连 接 处 有
14、 2 个 角 质 状 的 矛 状 结 构 ， 称 口 矛 。 此 期 幼 虫 形 态 特 征 明 显 ， 两 种 钩 虫 丝 状 蚴 的 鉴 别 要 点 见 表 B . 1 、 图 B . 1 。 表 B . 1 十 二 指 肠 钩 虫 与 美 洲 钩 虫 丝 状 蚴 的 鉴 别 要 点 鉴别要点 十二指肠钩虫丝状蚴 美洲钩虫丝状蚴 外形 细长，自头至肛门宽度相近 粗短，自食管基部起渐次缩小 口矛 难见到或细、短 较易见到，呈暗色杆状 头端形态 扁平，中间微有凹陷 圆形，无凹陷 鞘膜横纹 不显著 显著 食管与肠连接处 呈微细颗粒状横带 透明状横带 肠管 管腔较窄，肠细胞颗粒丰富 管腔较宽，肠细
15、胞颗粒少 生殖原基 肠管中部稍后 肠管中部稍前W S / T 7 9 1 2 0 2 1 6 图 B . 1 十 二 指 肠 钩 虫 及 美 洲 钩 虫 丝 状 蚴 形 态 示 意 图 （ 仿 W H O ）W S / T 7 9 1 2 0 2 1 7 附 录 C （ 资 料 性 ） 钩 虫 与 其 他 土 源 性 线 虫 丝 状 蚴 的 鉴 别 钩 虫 与 类 圆 线 虫 属 （ S t r o n g y l o i d e s ） 、 毛 圆 线 虫 属 （ T r i c h o s t r o n g y l u s ） 、 结 节 线 虫 属 （ O e s o p h a g
16、o s t o m u m ） 等 丝 状 蚴 可 通 过 鞘 的 有 无 、 食 管 占 体 长 比 例 、 肠 管 腔 直 或 弯 曲 、 虫 体 尾 端 形 态 等 特 征 进 行 虫 种 鉴 别 ， 主 要 鉴 别 要 点 见 表 C . 1 ， 图 C . 1 。 表 C . 1 钩 虫 、 粪 类 圆 线 虫 和 东 方 毛 圆 线 虫 丝 状 蚴 的 形 态 鉴 别 鉴别点 钩虫 粪类圆线虫 东方毛圆线虫 体长（m m ） 0 . 5 0 . 7 0 . 5 0 . 7 5 咽管 为体长的 1 / 5 为体长的 1 / 2 ，咽管球不明显 为体长的 1 / 4 生殖原基 在虫体的
17、中部 在虫体后部 - 尾端 尖细 分叉 有小球状物W S / T 7 9 1 2 0 2 1 8 图 C . 1 土 源 性 线 虫 丝 状 蚴 检 索 图 （ 仿 余 森 海 , 1 9 9 2 . ）W S / T 7 9 1 2 0 2 1 9 参 考 文 献 1 吴 观 陵 . 人 体 寄 生 虫 学 . 4 版 . 北 京 : 人 民 卫 生 出 版 社 ， 2 0 1 3 . 2 许 隆 祺 . 图 说 寄 生 虫 学 与 寄 生 虫 病 . 北 京 : 北 京 科 学 技 术 出 版 社 ， 2 0 1 6 . 3 薛 纯 良 , 许 隆 祺 . 寄 生 虫 病 诊 断 与 治
18、疗 . 长 沙 : 湖 南 科 技 出 版 社 ， 2 0 0 2 . 4 余 森 海 , 许 隆 祺 . 人 体 寄 生 虫 学 彩 色 图 谱 . 北 京 : 中 国 科 学 技 术 出 版 社 ， 1 9 9 2 . 5 诸 欣 平 , 苏 川 人 体 寄 生 虫 学 . 9 版 . 北 京 : 人 民 卫 生 出 版 社 ， 2 0 1 8 . 6 H a r a d a Y , M o r i O . A n e w m e t h o d f o r c u l t u r i n g h o o k w o r m . Y o n a g o A c t a M e d . 1
19、9 5 5 , 1 : 1 7 7 1 7 9 . 7 K i t v a t a n a c h a i S , T a y l o r A , R h o n g b u t s r i P , e t a l . M o d i f i e d H a r a d a - M o r i a n d s i m p l e w e t m o u n t t o d e t e r m i n e h o o k w o r m i n f e c t i o n s i n Y o I s l a n d u r b a n a r e a , S o n g k h l a , S
20、o u t h e r n T h a i l a n d . T r o p M e d H e a l t h . 2 0 1 9 , 4 7 ( 2 7 ) : 1 - 5 . 8 M a r t n - R a b a d n P , M u o z P , P a l o m o J , e t a l . S t r o n g y l o i d i a s i s : t h e H a r a d a - - - M o r i t e s t r e v i s i t e d . C l i n M i c r o b i o l I n f e c t . 1 9 9
21、9 , 5 ( 6 ) : 3 7 4 - 3 7 6 . 9 R e p o r t o f a W H O S c i e n t i f i c G r o u p . W o r l d H e a l t h O r g a n i z a t i o n T e c h n i c a l R e p o r t S e r i e s 6 6 6 : I n f e s t i n a l p r o f o z o a n a n d h e l m i n t h i c i n f e c t i o n s . W o r l d O r g a n i s a t i o n f o r A n i m a l H e a l t h a n d W o r l d H e a l t h O r g a n i z a t i o n . 1 9 8 1 .
