1、ICS 11.020CCS C 50 WS中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准WS/T 220 2021代 替 WS/T 220 2002凝 血 因 子 活 性 测 定 技 术 标 准 Technical standard for coagulation factor activity assay 2021 -08 - 27 发 布 2022 - 01 -01 实 施中 华 人 民 共 和 国 国 家 卫 生 健 康 委 员 会 发 布 WS/T 2202021 I 前 言本 标 准 代 替 WS/T 220-2002 凝 血 因 子 活 性 测 定 总 则 ， 与 WS/T 2
2、20-2002相 比 ， 主 要 技 术 内 容 变化 如 下 :a) 将 “ 总 则 ” 更 改 为 “ 技 术 标 准 ” ， 细 分 了 原 则 ， 并 将 2002 年 版 的 有 关 内 容 精 简 更 改 后 纳 入 （ 见 附录 ， 2002 年 版 的 11.1、 11.2、 11.3、 11.4） ;b) 调 整 技 术 标 准 内 容 框 架 结 构 ， 根 据 检 测 流 程 进 行 技 术 指 标 分 层 细 化 ；c) 增 加 了 对 检 测 项 目 室 内 质 控 和 室 间 质 评 的 技 术 指 标 参 数 设 定 （ 见 5.6.1、 5.6.2、 5.6.3
3、、 5.6.4、5.7.1、 5.7.2， 2002年 版 10.1、 10.2、 10.3、 10.4） ； d) 增 加 了 两 种 新 的 测 定 方 法 （ 见 5.1.1.2、 5.1.1.3， 2002年 版 8.1） ；e) 增 加 了 性 能 验 证 技 术 指 标 设 定 （ 见 5.4.1、 5.4.2、 5.4.3、 5.4.4） 。本 标 准 由 国 家 卫 生 健 康 标 准 委 员 会 临 床 检 验 标 准 专 业 委 员 会 负 责 技 术 审 查 和 技 术 咨 询 ， 由 国 家 卫 生健 康 委 医 管 中 心 负 责 协 调 性 和 格 式 审 查 ，
4、由 国 家 卫 生 健 康 委 医 政 医 管 局 负 责 业 务 管 理 、 法 规 司 负 责 统 筹管 理 。本 标 准 起 草 单 位 ： 上 海 交 通 大 学 医 学 院 附 属 瑞 金 医 院 、 国 家 卫 生 健 康 委 临 床 检 验 中 心 、 中 国 医 学 科学 院 北 京 协 和 医 院 、 中 国 医 学 科 学 院 血 液 病 医 院 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 王 学 锋 、 彭 明 婷 、 赵 永 强 、 杨 仁 池 、 戴 菁 、 周 文 宾 。 WS/T 2202021 1 凝 血 因 子 活 性 测 定 技 术 标 准1 范 围本 标 准 规
5、 定 了 用 一 期 法 检 测 凝 血 因 子 （ 、 、 、 、 、 、 、 ） 活 性 测 定 的 技 术 要 求 。由 于 方 法 学 不 一 致 ， 本 文 件 不 涉 及 纤 维 蛋 白 原 检 测 和 凝 血 因 子 XIII的 检 测 。本 标 准 适 用 于 开 展 凝 血 因 子 活 性 检 测 的 医 学 实 验 室 ， 用 于 规 范 相 应 的 检 测 过 程 和 质 量 控 制 。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 标 准 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 所 注 日 期 的 版 本 适 用
6、 于 本 标准 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 标 准 。 WS/T 359 血 浆 凝 固 实 验 血 液 标 本 的 采 集 及 处 理 指 南3 术 语 与 定 义下 列 术 语 和 定 义 也 适 用 于 本 文 件 。3.1 凝 血 酶 原 时 间 prothrombin time, PT血 浆 与 凝 血 活 酶 试 剂 （ 例 如 ， 组 织 因 子 ） 和 氯 化 钙 反 应 后 发 生 凝 固 所 需 要 的 时 间 。来 源 ： WS/T 359-2011， 2.13.2 活 化
7、 部 分 凝 血 活 酶 时 间 activated partial thromboplastin time, APTT血 浆 与 适 量 的 氯 化 钙 （ CaCl2） 、 部 分 凝 血 活 酶 试 剂 盒 接 触 因 子 激 活 剂 （ 如 白 陶 土 ） 反 应 后 发 生 凝固 所 需 要 的 时 间 。来 源 ： WS/T 359-2011， 2.23.3 定 标 曲 线 calibration curve校 准 曲 线参 考 曲 线定 量 反 映 凝 血 因 子 活 性 与 纤 维 蛋 白 形 成 所 需 时 间 之 间 的 相 互 关 系 的 曲 线 。3.4 定 标 血 浆
8、 calibration plasma WS/T 2202021 2 校 准 血 浆参 考 血 浆已 知 凝 血 因 子 活 性 的 枸 橼 酸 钠 抗 凝 的 正 常 混 合 血 浆 ， 用 于 制 备 定 标 曲 线 。3.5 乏 因 子 血 浆 factor-deficient plasma缺 乏 待 测 凝 血 因 子 的 血 浆 。3.6 质 控 血 浆 control plasma源 于 人 或 动 物 血 ， 或 者 人 工 制 成 的 新 鲜 、 冰 冻 或 冻 干 的 血 浆 ， 用 于 质 量 控 制 。 3.7 缓 冲 液 buffered solution具 备 缓 冲
9、 酸 碱 能 力 的 液 体 ， 如 Owrens缓 冲 液 、 咪 唑 缓 冲 液 等 。3.8 检 测 系 统 measurement system用 于 检 测 或 评 估 特 定 物 质 存 在 与 否 ， 或 对 血 液 、 体 液 中 的 物 质 进 行 定 性 、 定 量 分 析 的 一 组 装 置 。 检测 系 统 包 括 操 作 说 明 和 所 有 的 仪 器 、 设 备 、 试 剂 及 （ 或 ） 获 得 检 测 结 果 所 需 的 物 品 。4 检 验 前 过 程4.1 标 本 采 集 依 照 WS/T 359的 要 求 进 行 标 本 采 集 。 选 择 塑 料 针 筒
10、 或 者 负 压 采 血 系 统 ， 建 议 成 年 人 血 样 采 集 使 用19G或 21G针 头 ， 婴 幼 儿 血 样 采 集 使 用 22G或 23G针 头 ， 静 脉 穿 刺 采 血 时 ， 应 规 范 采 血 流 程 ， 一 次 穿 刺 成 功 ，尽 量 避 免 引 起 凝 血 因 子 激 活 的 操 作 。 若 患 者 的 血 细 胞 比 容 异 常 升 高 （ Hct 55%） ， 应 按 WS/T 359推 荐的 公 式 进 行 抗 凝 剂 比 例 的 调 整 。标 本 采 集 前 患 者 应 处 于 平 静 和 空 腹 状 态 ， 剧 烈 运 动 和 应 激 反 应 可
11、使 因 子 活 性 增 加 （ 其 作 用 可 持 续30 min） ； 脂 血 可 使 因 子 活 化 ， 同 时 干 扰 以 光 学 法 为 原 理 的 凝 血 仪 的 检 测 结 果 ， 此 时 可 改 用 手 工 或 磁珠 原 理 凝 血 仪 进 行 测 定 。4.2 标 本 运 送 、 处 理 和 保 存4.2.1 标 本 采 集 后 应 确 认 无 血 凝 块 存 在 ， 采 集 后 宜 在 1 h内 送 检 ， 采 用 规 定 的 离 心 速 度 和 离 心 时 间 （ 室温 、 1500 g、 不 少 于 15 min） 分 离 血 浆 ， 以 获 得 乏 血 小 板 血 浆
12、（ 血 小 板 计 数 10 10 9/L） ， 4 h内 完成 血 浆 标 本 检 测 。4.2.2 依 照 WS/T359的 要 求 在 常 温 下 进 行 标 本 运 送 ， 标 本 应 在 采 集 后 尽 快 送 检 （ 若 不 能 及 时 检 测 ， 应在 分 离 血 浆 后 置 于 4 冰 箱 4 h内 完 成 检 测 ） 。 冰 冻 血 浆 在 -20 条 件 下 最 多 可 保 存 2周 ， 在 -70 条 件 下最 多 可 保 存 6个 月 。4.2.3 若 使 用 冷 藏 标 本 ， 检 测 前 应 将 标 本 于 室 温 放 置 15 min 20 min使 其 恢 复
13、至 室 温 。4.2.4 若 使 用 冰 冻 血 浆 标 本 ， 应 将 其 置 于 37 水 浴 快 速 复 融 至 少 4 min 5 min， 检 测 前 标 本 应 充 分 混匀 。4.3 标 本 拒 收 标 准 WS/T 2202021 3 实 验 室 应 制 订 不 合 格 标 本 的 拒 收 标 准 ， 包 括 （ 但 不 限 于 以 下 内 容 ） ：a) 申 请 单 和 试 管 标 签 上 的 信 息 不 一 致 、 试 管 条 码 信 息 错 误 、 试 管 标 签 或 试 管 条 码 脱 落 ；b) 从 标 本 采 集 到 实 验 室 接 收 标 本 的 时 间 不 符
14、合 实 验 室 的 规 定 ；c) 当 标 本 存 在 凝 块 、 溶 血 、 抗 凝 剂 使 用 错 误 或 采 血 量 不 当 （ 与 标 示 量 相 差 超 过 10%） 时 。4.4 标 本 误 差 来 源标 本 误 差 来 源 包 括 （ 但 不 限 于 以 下 内 容 ） ：a) 采 血 量 不 当 （ 与 标 示 量 相 差 超 过 10%） ；b) 使 用 非 规 定 的 抗 凝 剂 （ 如 EDTA盐 或 草 酸 盐 ） 、 抗 凝 剂 的 浓 度 、 用 量 不 准 确 ；c) 标 本 有 凝 块 、 溶 血 、 黄 疸 、 脂 血 或 混 浊 ；d) 标 本 混 匀 不
15、当 ， 混 匀 不 充 分 或 剧 烈 混 匀 ， 产 生 气 泡 等 ；e) 采 血 器 或 贮 血 管 不 洁 ， 或 受 到 污 染 ； 使 用 非 规 定 、 不 适 当 的 标 本 采 集 管 ；f) 血 细 胞 比 容 高 于 或 等 于 55%；g) 急 性 炎 症 反 应 、 纤 维 蛋 白 原 升 高 或 纤 维 蛋 白 原 异 常 可 使 采 用 PT途 径 测 定 的 凝 血 因 子 活 性 不 准 确 ； h) 延 迟 检 测 或 使 用 不 标 准 的 方 法 处 理 、 运 送 及 贮 存 测 试 标 本 。5 检 验 过 程5.1 检 测 系 统5.1.1 检 测
16、 方 法 原 理5.1.1.1 一 期 法 检 测5.1.1.1.1 检 测 原 理 ： 基 于 检 测 待 测 标 本 对 乏 因 子 血 浆 所 致 的 凝 固 时 间 （ PT 或 APTT） 延 长 的 纠 正 能 力 。将 稀 释 后 的 待 测 血 浆 与 乏 因 子 血 浆 混 合 后 进 行 PT 或 APTT 检 测 ， 检 测 结 果 与 待 测 血 浆 中 的 凝 血 因 子 活 性呈 负 相 关 。 通 过 使 用 已 知 凝 血 因 子 活 性 的 血 浆 进 行 系 列 稀 释 并 与 乏 因 子 血 浆 混 合 后 进 行 PT 或 APTT 检 测 建 立 的
17、定 标 曲 线 ， 可 以 得 出 待 测 血 浆 中 相 应 凝 血 因 子 的 活 性 。 一 期 法 检 测 是 目 前 最 常 用 的 凝 血 因 子 活 性测 定 方 法 。5.1.1.1.2 基 于 PT 检 测 的 凝 血 因 子 ： 因 子 、 、 、 。5.1.1.1.3 基 于 APTT 检 测 的 凝 血 因 子 ： 因 子 、 、 与 。5.1.1.2 二 期 法 检 测该 方 法 适 用 于 因 子 / 活 性 检 测 ， 以 因 子 活 性 检 测 为 例 ， 其 原 理 为 ： 基 于 检 测 因 子 作 为 辅 因子 与 因 子 a形 成 复 合 物 活 化 因
18、 子 的 能 力 ， 通 过 检 测 生 成 的 因 子 a的 量 可 计 算 因 子 的 活 性 。 该 实 验分 为 两 步 进 行 ， 第 一 步 ： 待 测 标 本 与 含 有 磷 脂 、 钙 离 子 、 因 子 a以 及 因 子 的 试 剂 溶 液 进 行 孵 育 后 生成 因 子 a； 第 二 步 再 加 入 过 量 的 凝 血 酶 原 和 纤 维 蛋 白 原 ， 检 测 纤 维 蛋 白 凝 块 形 成 的 时 间 。 测 得 的 凝 固时 间 可 以 通 过 查 对 已 知 凝 血 因 子 活 性 的 定 标 曲 线 或 代 入 回 归 方 程 ， 得 到 凝 血 因 子 活 性
19、 。5.1.1.3 发 色 底 物 法 检 测 该 方 法 是 二 期 法 检 测 的 改 进 方 法 ， 在 因 子 活 性 检 测 时 使 用 。 第 一 步 ： 待 测 标 本 与 含 有 磷 脂 、 钙 离子 、 因 子 a以 及 因 子 的 试 剂 孵 育 后 生 成 因 子 a； 第 二 步 加 入 因 子 a的 发 色 底 物 进 行 检 测 ， 因 子 a可 作 用 在 发 色 底 物 S2765， 使 其 释 放 对 硝 基 苯 胺 （ paranitroaniline， pNA） ， 后 者 可 在 405 nm波 长 条 件下 通 过 读 取 吸 光 度 值 计 算 该
20、物 质 的 生 成 量 ， 通 过 计 算 转 换 为 凝 血 因 子 活 性 。 WS/T 2202021 4 5.1.2 检 测 系 统 选 择5.1.2.1 实 验 室 宜 选 用 仪 器 与 试 剂 配 套 的 检 测 系 统 。 使 用 非 配 套 检 测 系 统 时 ， 应 确 认 该 系 统 是 否 能 满足 性 能 验 证 要 求 。5.1.2.2 实 验 室 在 选 择 检 测 系 统 时 ， 应 考 虑 的 因 素 （ 但 不 限 于 以 下 内 容 ） 包 括 ：a) 临 床 标 本 性 状 ： 黄 疸 、 脂 浊 等 影 响 光 散 射 强 度 的 标 本 ， 适 宜
21、选 择 物 理 学 检 测 原 理 的 检 测 系 统 （ 如磁 珠 法 ） 进 行 测 定 ；b) 标 本 数 量 与 检 测 速 度 ： 检 测 系 统 能 够 在 规 定 时 间 内 完 成 常 规 标 本 和 急 诊 标 本 的 测 定 。5.2 试 剂 和 耗 材5.2.1 APTT 试 剂不 同 APTT试 剂 由 于 激 活 剂 的 不 同 而 对 凝 血 因 子 活 性 检 测 的 敏 感 性 存 在 差 异 。 检 测 凝 血 因 子 缺 乏 时 ， 宜 选 用 对 凝 血 因 子 缺 乏 有 高 敏 感 性 的 APTT试 剂 （ 可 检 出 凝 血 因 子 活 性 30%
22、的 标 本 ， 包 括 凝 血 因 子 、 、 等 ） 。 针 对 怀 疑 存 在 狼 疮 抗 凝 物 的 标 本 ， 宜 使 用 对 磷 脂 不 敏 感 的 APTT试 剂 盒 。 实 验 室 在 更 换 APTT试 剂 批 号 时 ， 应 进 行 新 旧 试 剂 的 比 对 ： 根 据 验 证 标 本 的 目 标 水 平 （ 验 证 标 本 应 尽 量 覆 盖 检 测 项 目 的 可 报告 范 围 ， 并 至 少 包 含 正 常 水 平 和 异 常 水 平 ） 、 各 水 平 的 确 定 临 界 值 、 不 精 密 度 值 等 参 数 来 确 定 所 需 标 本数 ， 分 别 采 用 新
23、旧 试 剂 进 行 检 测 ， 计 算 偏 差 和 平 均 偏 差 绝 对 值 ， 并 与 拒 绝 限 进 行 比 较 ， 判 断 批 号 间 验 证是 否 通 过 。5.2.2 PT 试 剂不 同 PT试 剂 中 凝 血 活 酶 因 其 来 源 不 同 （ 可 来 自 人 、 兔 、 牛 、 猴 等 脑 或 其 他 组 织 ） 而 具 有 不 同 的 敏 感度 。 应 选 择 敏 感 度 高 （ ISI接 近 1） 的 凝 血 活 酶 试 剂 ， 实 验 室 在 更 换 凝 血 活 酶 试 剂 时 ， 应 对 其 ISI值 进 行评 估 。5.2.3 乏 因 子 血 浆 乏 因 子 血 浆
24、应 符 合 以 下 要 求 ： 待 测 的 目 标 凝 血 因 子 活 性 低 于 0.01 IU/mL（ 1%） ， 其 他 凝 血 因 子 活 性高 于 0.5 IU/mL（ 50%） ， 纤 维 蛋 白 原 含 量 高 于 1.0 g/L。 实 验 室 应 对 每 个 批 次 的 乏 因 子 血 浆 进 行 检 测 ，以 确 保 所 用 的 乏 因 子 血 浆 质 量 符 合 上 述 要 求 。 乏 因 子 血 浆 应 在 冷 藏 （ 冻 干 形 式 ） 或 冰 冻 （ 贮 存 -70 冰箱 ） 条 件 下 妥 善 保 存 。5.2.4 定 标 血 浆通 常 使 用 商 品 化 的 标
25、准 血 浆 或 校 准 血 浆 ， 其 标 示 值 需 溯 源 至 国 际 标 准 物 质 （ 如 世 界 卫 生 组 织 发 布 的国 际 标 准 品 ） 。 若 实 验 室 自 行 制 备 定 标 血 浆 ， 应 至 少 使 用 20例 以 上 健 康 志 愿 者 （ 男 女 各 半 ， 年 龄 18岁 55岁 ， 六 个 月 内 未 服 用 任 何 药 物 ， 女 性 未 处 于 妊 娠 期 或 月 经 期 ） 的 混 合 血 浆 。 血 浆 制 备 时 需 进 行 两 次 离心 ， 将 第 一 次 离 心 获 得 的 乏 血 小 板 血 浆 的 上 层 2/3体 积 转 移 入 加 塞
26、 塑 料 试 管 进 行 第 二 次 离 心 （ 室 温 、 1500g、 不 少 于 15 min） ， 注 意 不 要 使 用 第 二 次 离 心 后 的 底 部 血 浆 ， 以 确 保 充 分 去 除 血 小 板 ， 以 国 际 标 准 物质 作 为 溯 源 标 准 确 定 其 凝 血 因 子 活 性 水 平 ， 并 保 证 凝 血 因 子 的 活 性 在 （ 1 0.2） IU/mL。 5.2.5 试 剂 误 差 来 源试 剂 误 差 来 源 包 括 （ 但 不 限 于 以 下 内 容 ） ：a) 试 剂 已 被 污 染 ； WS/T 2202021 5 b) 配 制 的 试 剂 未
27、采 用 I 级 试 剂 级 水 或 厂 家 指 定 用 水 、 复 溶 时 使 用 非 规 定 的 稀 释 液 、 复 溶 时 稀 释 液加 量 不 准 ；c) 在 运 输 或 贮 存 过 程 中 ， 因 处 置 不 当 (如 温 度 等 因 素 )而 导 致 试 剂 变 质 ；d) 所 用 试 剂 超 过 了 有 效 期 或 复 溶 后 的 稳 定 期 。5.3 定 标 曲 线 制 作5.3.1 正 常 值 定 标 曲 线5.3.1.1 采 用 全 自 动 血 液 凝 固 分 析 仪 进 行 凝 血 因 子 活 性 检 测 时 ， 可 按 照 仪 器 生 产 厂 商 的 要 求 预 先 设
28、定参 考 血 浆 的 稀 释 比 例 并 使 用 配 套 参 考 血 浆 制 作 定 标 曲 线 。 参 考 血 浆 的 稀 释 比 例 应 至 少 包 括 1/10、 1/20、1/40和 1/80 四 个 水 平 。 采 用 手 工 法 或 半 自 动 血 液 凝 固 分 析 仪 进 行 检 测 时 ， 需 根 据 不 同 比 例 稀 释 标 本 的PT 或 APTT 检 测 结 果 与 对 应 的 稀 释 比 例 在 半 对 数 或 双 对 数 坐 标 纸 上 手 工 绘 制 定 标 曲 线 。 （ 示 例 见 附 录 A）5.3.1.2 定 标 曲 线 的 线 性 回 归 方 程 的
29、r 值 应 在 0.998 1.000， 斜 率 应 在 0.9 1.1。 5.3.1.3 频 率 ： 对 于 采 用 手 工 法 或 半 自 动 方 法 进 行 凝 血 因 子 活 性 检 测 时 ， 每 批 次 均 需 建 立 本 次 的 定 标曲 线 ； 全 自 动 检 测 方 法 在 试 剂 批 号 更 换 、 仪 器 设 备 调 整 、 室 内 质 控 失 控 等 情 况 下 需 重 新 建 立 定 标 曲 线 。5.3.2 低 值 定 标 曲 线针 对 低 值 标 本 （ 凝 血 因 子 活 性 水 平 5%） 应 建 立 低 值 定 标 曲 线 ， 定 标 血 浆 可 按 照 1
30、/20、 1/40、1/80 的 比 例 进 行 稀 释 ， 其 余 要 求 同 正 常 定 标 曲 线 的 制 备 。5.4 性 能 验 证5.4.1 性 能 验 证 一 般 要 求5.4.1.1 新 的 检 测 系 统 用 于 临 床 检 测 前 ， 依 据 厂 家 说 明 书 的 要 求 进 行 校 准 和 性 能 验 证 ， 至 少 应 包 括 批内 精 密 度 、 批 间 精 密 度 、 正 确 度 和 可 报 告 范 围 等 。5.4.1.2 验 证 周 期 ： 在 更 换 设 备 、 组 件 以 及 试 剂 时 需 要 进 行 性 能 验 证 。 5.4.2 重 复 性重 复 性
31、 又 称 批 内 精 密 度 ， 是 以 连 续 检 测 结 果 的 变 异 系 数 （ CV） 为 评 价 指 标 。 重 复 精 密 度 的 验 证 方 法 ：至 少 使 用 两 个 浓 度 水 平 （ 包 含 正 常 和 异 常 水 平 ） 的 新 鲜 临 床 标 本 或 质 控 物 进 行 检 测 ， 每 个 标 本 按 常 规 方法 重 复 检 测 11 次 ， 剔 除 第 1次 检 测 结 果 ， 计 算 后 10 次 检 测 结 果 的 变 异 系 数 。 内 源 性 凝 血 因 子 (APTT 途径 ) 和 外 源 性 凝 血 因 子 (PT 途 径 )的 正 常 标 本 和
32、异 常 标 本 的 CV 应 均 10%。5.4.3 期 间 精 密 度期 间 精 密 度 又 称 为 批 间 精 密 度 ， 以 室 内 质 控 检 测 结 果 的 变 异 系 数 为 评 价 指 标 。 批 间 精 密 度 的 验 证 方法 ： 至 少 使 用 两 个 浓 度 水 平 （ 包 含 正 常 和 异 常 水 平 ） 的 质 控 物 或 临 床 标 本 ， 在 标 本 检 测 当 天 至 少 进 行 1次 室 内 质 控 ， 剔 除 失 控 数 据 后 按 批 号 或 按 月 份 ， 计 算 累 计 在 控 数 据 20 次 结 果 的 变 异 系 数 。 内 源 性 凝 血因
33、子 (APTT 途 径 ) 和 外 源 性 凝 血 因 子 (PT 途 径 )的 正 常 标 本 和 异 常 标 本 的 CV 应 均 15%。5.4.4 正 确 度 正 确 度 以 国 际 标 准 物 质 或 商 业 校 准 物 实 际 检 测 结 果 与 理 论 值 的 偏 倚 （ Bias） 为 评 价 指 标 。 实 验 室 应尽 可 能 使 用 有 证 标 准 物 质 （ 如 国 际 标 准 物 质 或 国 家 标 准 物 质 ） 进 行 正 确 度 验 证 ， 在 无 法 得 到 上 述 标 准 物 WS/T 2202021 6 质 的 情 况 下 ， 可 使 用 商 业 标 准
34、物 质 。 正 确 度 的 验 证 方 法 ： 将 标 准 物 质 稀 释 至 预 期 浓 度 水 平 （ 如 医 学 决 定水 平 ） 并 至 少 重 复 检 测 10次 ， 计 算 检 测 结 果 的 均 值 与 理 论 值 的 百 分 偏 差 ， 要 求 百 分 偏 倚 （ Bias） 应 15%。5.5 检 测 程 序5.5.1 标 准 操 作 程 序 的 建 立 与 实 施实 验 室 应 依 照 医 疗 机 构 临 床 实 验 室 管 理 办 法 、 本 文 件 和 仪 器 试 剂 生 产 厂 商 的 操 作 说 明 制 定 各 检测 项 目 的 标 准 操 作 程 序 （ Stan
35、dard Operation Procedure， SOP） 文 件 ， 并 严 格 按 照 SOP 文 件 的 要 求 进行 操 作 。5.5.2 检 测 方 法 的 选 择因 子 、 、 、 、 、 、 、 的 活 性 均 可 使 用 一 期 法 进 行 检 测 ， 因 子 / 活 性 检 测 还 可使 用 二 期 法 和 发 色 底 物 法 。 由 于 方 法 特 性 的 不 同 ， 由 某 些 特 定 基 因 突 变 位 点 导 致 的 血 友 病 A 患 者 其 因 子 :C 一 期 法 检 测 结 果 与 临 床 出 血 表 现 不 相 符 ， 可 采 用 二 期 法 和 发 色
36、底 物 法 进 行 测 定 。5.5.3 待 测 血 浆 标 本 的 稀 释 要 求应 根 据 检 测 的 凝 血 因 子 制 定 相 应 的 血 浆 稀 释 倍 数 ， 目 的 是 为 了 得 到 一 个 具 有 可 接 受 斜 率 的 曲 线 。 因子 和 活 性 检 测 血 浆 标 本 至 少 应 进 行 2 个 稀 释 度 的 检 测 ， 有 条 件 的 实 验 室 可 进 行 3 个 稀 释 度 的 检 测 ，对 于 低 值 标 本 可 降 低 稀 释 倍 数 。5.5.4 检 测 系 统 误 差 的 来 源检 测 系 统 误 差 来 源 包 括 （ 但 不 限 于 以 下 内 容
37、） ：a) 定 标 时 错 误 输 入 参 考 血 浆 数 值 ；b) 使 用 曲 线 的 平 台 区 解 释 结 果 ；c) 不 正 确 的 孵 育 或 活 化 时 间 ；d) 仪 器 操 作 方 法 不 正 确 ； e) 仪 器 故 障 :如 光 源 不 稳 定 、 温 度 波 动 、 试 剂 溅 出 、 试 剂 加 入 不 准 (量 少 )及 电 子 干 扰 等 ；f) 稀 释 不 正 确 ；g) 冰 冻 血 浆 在 -70 条 件 下 贮 存 超 过 6 个 月 或 者 不 适 当 的 贮 存 环 境 ；h) 乏 因 子 基 质 血 浆 含 有 0.01 IU/mL(1%)的 凝 血
38、活 性 ， 或 含 有 凝 血 因 子 抑 制 物 ， 或 一 个 /多 个 凝血 因 子 活 性 50%。5.6 室 内 质 量 控 制5.6.1 质 控 血 浆 的 选 择 ： 实 验 室 可 使 用 商 业 质 控 血 浆 或 自 制 质 控 血 浆 （ 冰 冻 血 浆 ） 进 行 室 内 质 量 控 制 ，质 控 血 浆 应 至 少 具 有 2 个 浓 度 水 平 （ 包 含 正 常 水 平 和 异 常 水 平 ） ， 使 用 自 制 质 控 血 浆 时 应 与 商 业 质 控 血浆 进 行 同 步 检 测 以 评 价 其 适 用 性 。 实 验 室 应 根 据 实 际 工 作 需 要
39、 确 定 质 控 血 浆 的 数 量 ， 避 免 质 控 血 浆 批 号更 换 过 于 频 繁 。5.6.2 频 率 ： 实 验 室 应 根 据 检 测 标 本 量 或 检 测 批 次 确 定 室 内 质 控 的 频 率 ， 并 保 证 每 次 开 机 检 测 标 本 前 至 少 进 行 一 次 正 常 水 平 和 异 常 水 平 的 室 内 质 控 ； 使 用 新 开 瓶 /新 复 溶 试 剂 进 行 标 本 检 测 前 ， 宜 首 先 进 行质 控 品 检 测 。5.6.3 质 控 均 值 和 允 许 范 围 的 确 定 ： 每 个 批 号 质 控 血 浆 在 使 用 前 ， 应 由 实
40、验 室 通 过 检 测 确 定 均 值 和 允许 范 围 ， 质 控 品 制 造 商 规 定 的 “ 标 准 值 ” 和 “ 允 许 范 围 ” 只 能 作 为 参 考 。 具 体 方 法 为 ： 将 质 控 血 浆 至 少 WS/T 2202021 7 检 测 10 d， 每 天 至 少 检 测 2次 ， 剔 除 超 出 3SD外 数 据 ， 输 入 20 次 结 果 完 成 初 始 化 ， 以 20 次 数 据 形 成的 均 值 作 为 当 月 质 控 图 的 中 心 线 。 SD、 CV 在 月 末 完 成 数 据 录 入 并 确 认 后 生 成 标 值 自 动 传 递 给 下 一 月
41、进行 积 累 ， 这 样 每 个 月 进 行 标 值 累 积 ， 直 至 累 积 达 到 指 定 月 数 （ 3 5个 月 ） ， 计 算 累 积 均 值 和 累 积 标 准差 ， 以 此 作 为 室 内 质 控 均 值 和 标 准 差 ； 室 内 质 控 建 议 选 用 Westergard 质 控 规 则 ， 至 少 包 括 13s和 22s规则 ， 其 余 可 根 据 实 验 室 实 际 情 况 酌 情 选 用 。5.6.4 实 验 室 应 记 录 结 果 并 统 计 均 值 与 标 准 差 ， 绘 制 质 控 图 。 若 发 现 结 果 失 控 应 按 步 骤 分 析 查 找 原 因（
42、 检 查 试 剂 、 质 控 血 浆 及 仪 器 等 ） ， 待 各 因 素 排 查 后 再 进 行 质 控 血 浆 的 检 测 ， 质 控 结 果 在 控 后 方 可 进 行待 测 标 本 的 检 测 。 做 好 失 控 原 因 分 析 和 采 取 的 纠 正 措 施 记 录 。5.6.5 实 验 室 应 定 期 （ 每 月 ） 统 计 室 内 质 控 结 果 ， 结 果 应 符 合 5.6.3 的 要 求 。5.7 室 间 质 量 评 价5.7.1 实 验 室 应 参 加 室 间 质 量 评 价 机 构 组 织 开 展 的 室 间 质 量 评 价 活 动 ， 以 保 证 采 用 相 同 实
43、 验 室 检 测 系 统 之 间 结 果 的 可 比 性 。5.7.2 对 于 没 有 开 展 室 间 质 评 的 项 目 应 进 行 实 验 室 间 结 果 比 对 ， 以 保 证 不 同 实 验 室 之 间 结 果 的 可 比 性 。5.8 检 验 结 果 的 比 对若 实 验 室 内 使 用 多 个 检 测 系 统 测 定 同 一 种 分 析 物 时 ， 应 定 期 进 行 结 果 比 对 （ 宜 半 年 一 次 ） ， 至 少 使用 20份 临 床 标 本 （ 覆 盖 正 常 和 低 值 标 本 ） 按 照 常 规 操 作 流 程 进 行 检 测 ， 正 常 浓 度 标 本 的 比 对
44、 偏 倚 应 15%，低 值 浓 度 标 本 的 比 对 偏 倚 应 30%（ 或 按 照 生 产 厂 家 和 试 剂 说 明 书 要 求 ） 。6 检 验 后 过 程6.1 参 考 区 间对 于 每 个 凝 血 因 子 ， 实 验 室 可 参 照 文 献 报 道 的 参 考 区 间 进 行 验 证 后 使 用 。 若 不 适 用 ， 应 根 据 所 用 仪 器 、 试 剂 、 采 血 方 法 、 主 要 就 医 人 群 （ 成 人 或 儿 童 ） 及 所 用 抗 凝 剂 建 立 适 用 于 本 室 的 参 考 区 间 。 参 考 区间 以 相 同 的 单 位 显 示 在 每 一 份 报 告
45、单 上 。6.2 报 告 结 果报 告 前 ， 应 确 定 待 测 标 本 检 测 结 果 已 乘 以 相 应 的 稀 释 倍 数 ， 采 用 不 同 稀 释 比 例 测 定 值 的 平 均 值 作 为报 告 结 果 。 报 告 单 位 为 活 性 %或 IU/mL 均 可 ， 但 需 在 检 验 报 告 中 统 一 规 范 凝 血 因 子 活 性 报 告 单 位 及 格 式 。超 出 定 标 曲 线 值 以 外 的 结 果 亦 可 报 告 以 大 于 或 小 于 相 应 的 可 读 值 报 告 ， 但 应 与 临 床 联 系 ， 共 同 确 定 其 原因 。 举 例 说 明 请 见 附 录
46、B。当 怀 疑 凝 血 因 子 存 在 结 构 异 常 时 ， 可 考 虑 检 测 抗 原 ， 但 抗 原 检 测 不 是 常 规 检 测 项 目 ， 多 用 于 科 研 。6.3 结 果 判 读 误 差 的 来 源可 能 的 结 果 判 读 误 差 来 源 包 括 （ 但 不 限 于 以 下 内 容 ） ：a) 未 辨 认 出 两 条 曲 线 缺 乏 平 行 ； b) 未 辨 认 出 两 条 曲 线 缺 乏 线 性 ；c) 采 用 推 断 的 方 法 得 到 定 标 曲 线 范 围 之 外 的 数 据 。 WS/T 2202021 8 附 录 A（ 资 料 性 ）定 标 曲 线 手 工 绘
47、制采 用 手 工 法 或 部 分 半 自 动 血 液 凝 固 分 析 仪 进 行 检 测 时 ， 需 根 据 不 同 比 例 稀 释 标 本 的 PT或 APTT检 测 与对 应 的 稀 释 比 例 在 半 对 数 或 双 对 数 坐 标 纸 上 手 工 绘 制 定 标 曲 线 ， 图 应 形 成 “ S” 型 曲 线 ， 两 端 扁 平 ， 中间 呈 线 性 (图 A.1， 图 A.2)。 线 性 区 计 算 所 得 r值 应 在 0.998 1.000、 斜 率 应 在 0.9 1.1范 围 内 。 图 A.1 凝 血 因 子 分 析 定 标 曲 线 （ 半 对 数 关 系 ） 图 A.2
48、 凝 血 因 子 分 析 定 标 曲 线 （ 双 对 数 关 系 ） WS/T 2202021 9 附 录 B（ 资 料 性 ）结 果 解 读待 测 血 浆 标 本 经 三 点 稀 释 后 形 成 的 标 本 结 果 曲 线 应 形 成 一 条 与 工 作 定 标 曲 线 平 行 的 直 线 。若 以 上 的 情 况 不 存 在 ， 应 该 考 虑 以 下 可 能 性 ：a)若 两 个 或 更 多 邻 近 点 形 成 一 条 平 行 于 定 标 曲 线 的 直 线 ， 但 没 有 实 验 结 果 落 在 可 读 范 围 之 内 ， 进 一步 稀 释 参 考 血 浆 或 受 检 血 浆 则 可
49、能 产 生 可 读 结 果 (见 图 B.1)；b) 若 仅 一 个 试 验 结 果 落 在 可 读 范 围 ， 同 时 与 邻 近 点 形 成 的 直 线 不 平 行 于 定 标 曲 线 ， 则 应 稀 释 受 检血 浆 ， 以 便 获 得 可 读 结 果 ；c) 若 受 检 血 浆 与 参 考 血 浆 曲 线 不 呈 平 行 ， 而 一 个 以 上 的 结 果 落 在 已 知 的 线 性 范 围 内 ， 则 应 当 怀 疑标 本 中 有 抑 制 物 存 在 (见 图 B.2)。 在 报 告 结 果 时 ， 以 最 高 稀 释 度 报 告 ， 同 时 应 说 明 标 本 中 可 能 有 抑 制 物 ，应 做 有 关 检 查 确 定 ； d) 若 所 有 的 实 验 结 果 均 落 在 线 性 范 围 之 外 ， 同 时 出 现 类 似 的 试 验 结 果 (不 考 虑 稀 释 所 造 成 影 响 )，这 个 现 象 提 示 所 有 的 试 验 结 果 均 位 于 “ S” 曲 线 的 平 台 区 。 这 是 典 型 的 严 重 凝 血 因 子 缺 乏 状 态 (见 图 B.2)。这 种 情 况 ， 应 采 用 低 值 定 标 曲 线 进 行
