1、ICS65.020.01 CCSB16 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T53812021 膨果苋检疫鉴定方法 Detection and identification of amaranthus deflexusL. 2021-06-18发布2022-01-01实施 中华人民共和国海关总署发布 中华人民共和国出入境检验检疫 行 业 标 准 膨果苋检疫鉴定方法 SN / T 5381 2021 * 中国海关出版社有限公司出版发行 北京市朝阳区东四环南路甲1号( 100023 ) 编辑部:( 010 ) 65194242-7531 网址 / book 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷
2、* 开本8801230 1 / 16 印张1.25 字数37千字 2021年7月第一版 2021年7月第一次印刷 印数 1 500 * 书号: 155175 675 定价20.00元 前 言 本文件按照GB / T 1.1 2020 标准化工作导则 第1 部分:标准化文件的结构和起草规则的规 则起草。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:中国检验检疫科学研究院、福州海关技术中心、二连海关技术中心、青岛海关技术 中心、无锡海关综合技术中心、中华人民共和国银川海关、广州海关技术中心、南通海关综合技术中心。 本文件主要起草人:徐晗、潘绪斌、虞赟、袁淑珍、邵秀玲、孙旻旻、胡诗瑶
3、、吴海荣、孙民琴。 SN/T53812021 膨果苋检疫鉴定方法 1 范围 本文件规定了膨果苋(Amaranthus delflexus L. )检疫鉴定方法。 本文件适用于膨果苋检疫鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 SN / T 1193 基因检验实验室技术要求 SN / T 3710 异株苋亚属检疫鉴定方法 SN / T 4715 杂草采集、保存和制作规范 3 术语、定义和缩略语 3.1 术语和定义 SN
4、/ T 3710界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 胞果 Utricle 干果的一种,又称囊果,由合生心皮形成的一类果实,具一枚种子。成熟时,果皮薄且干燥,疏松地 包围种子,极易与种子分离。 3.1.2 苞片 Bract 在花或花序基部的退化的单片或数片叶或叶状结构,是介于正常叶和花之间的一种变态叶,有保护 花芽或果实的作用。 3.1.3 高光谱 Hyperspectral 光谱分辨率优于 / 100 。其光谱分辨率在可见光到短波红外波段可达纳米( nm )数量级,通常具有 波段多的特点,光谱通道数多达数十甚至数百个以上,而且各光谱通道间往往是连续的。 3.2 缩略语 下列缩略
5、语适用于本文件。 PCR : p ol y merase chain reaction ,聚合酶链式反应。 DNA : deox y ribonuleic acid ,脱氧核糖核酸。 ITS : internal transcribed s p acers 1 and 2 and the intervenin g 5.8S ribosomal g ene ,核糖体DNA内 转录间隔区1和内转录间隔区2 ,以及5.8S核糖体基因。 TAE : Tris acetate-EDTA buffer , Tris-乙酸电泳缓冲液。 1 SN/T53812021 4 膨果苋基本信息 学名:Amaranth
6、us deflexus L. 英文名: lar g efruit amaranth , Ar g entina amaranth , deflexed amaranth , low amaranth 分类地位:双子叶植物纲Ma g nolio p sida ,石竹目Car y o p h y llales ,苋科AmaranthaceaeJussieu ,苋属 AmaranthusL. ,白苋亚属Amaranthussubgen. Albersia ( Kunth ) Gren. 每花有1苞片及2小苞片,干膜质;花被片0-5 ,大小相等或不等, 绿色或着色,薄膜质,直立或向外反折,在果期直立,
7、间或在花期后变硬或基部加厚;雄蕊5 ,少数1-4 ,花 丝钻状或丝状,基部离生,花药2室;无退化雄蕊;子房具1直生胚珠,花柱极短或缺,柱头2-3 ,钻状或条 形,宿存,内面有细齿或微硬毛。胞果球形或卵形,侧扁,膜质,不裂、周裂或不规则开裂。种子双凸镜 状,侧扁,黑色、深褐色、红褐色或褐色,平滑,边缘锐或钝,具光泽。 该属含苋亚属、白苋亚属和异株苋亚属,约74种,除南北两极外,均有分布。我国有20余种。 8.1.2 白苋亚属 一年生或短时多年生草本,雌雄同株,平卧或匍匐,少直立。茎光滑或近光滑,有时被短柔毛。叶互 生,具柄,形状多变,线形至椭圆形,基部渐狭或楔形,先端具小短尖。花序多为腋生团簇状
8、或短穗状,少 见顶生短穗状。雄花花被片( 1- ) 3-5 ,雄蕊( 1- ) 3-5 。雌花花被片( 1- ) 3-5 ,柱头2-3 。胞果不裂、不规则开 裂或周裂。 约52种,分布广泛。我国约12种。 8.1.3 膨果苋 8.1.4.1 植株和茎 植株远端被毛或成熟期变光滑。茎倾斜上升或匍匐,基部多分枝,从根茎部向外呈辐射状,通常 10 cm50 cm 高。 8.1.4.2 叶 叶柄约为叶片长度的1 / 2 ;叶片菱状卵形、或卵形至披针形,长1 cm 2 cm ,宽0.5 cm 1 cm ,基 部渐狭或楔形,边全缘、平滑或略皱缩,先端近急尖、钝状或微凹至浅凹缺,具小短尖。 3 SN/T53
9、812021 8.1.4.3 花序 顶生圆锥花序三角锥状,直立,密生厚实,远端无叶,腋生花序团簇状。 8.1.4.4 苞片 苞片线形,长0.5 mm1 mm ,约为花被片长度的1 / 2 。 8.1.4.5 花被片 雌花花被片2-3 ,狭椭圆形或矩圆状披针形,不具爪,等长或近等长,长1.2 mm2 mm ,先端急尖; 花柱分支直立,柱头3 。雄花簇生于花序先端,花被片2-3 ;雄蕊2-3 。 8.1.4.6 胞果 表面具2-3条纵肋,略微膨大,椭圆体型,长2 mm3 mm ,明显长于花被片,表面光滑,不开裂。 8.1.4.7 种子 双凸透镜状,椭圆形,长1 mm1.2 mm ,具明显环边,深褐
10、色至黑色,种脐歪斜,下凹。 8.2 分子生物学鉴定 8.2.1 DNA提取及浓度测定 使用常见商品化试剂盒提取膨果苋基因组DNA 。用以提取核酸的植物组织用量参照所采用商品 化试剂盒使用说明。用紫外分光光度计或核酸浓度测定仪检测所提取核酸浓度,浓度以达到8.2.2步 骤中使用的商品化PCR试剂盒中要求的DNA模板用量为准。 8.2.2 PCR及测序 膨果苋的PCR步骤及测序,参见附录C ,防污染措施应符合SN / T 1193的规定。 9 结果判定 9.1 植株鉴定 植物体各部分组织完整,符合 8.1 及附录D 、附录 E 、附录 F 和附录G 所述苋属植株、花序、花、胞 果等形态特征,可判定
11、为膨果苋。 9.2 种子及部分组织鉴定 符合8.1及附录D 、附录E 、附录F和附录G所述膨果苋种子或叶片等部分组织形态特征,并与附 录H 所列膨果苋ITS参考序列一致性在99%以上时,可判定为膨果苋。 10 标本和样本的保存和处理 杂草标本的保存方法按照SN / T 4715的规定。 4 SN/T53812021 附 录 A (资料性) 膨果苋相关信息 A.1 地理分布 原产南美洲阿根廷、玻利维亚、巴西和秘鲁等地,现入侵于欧洲西班牙、德国、法国等24个国家及地 区。北美洲美国东西部沿海地区,中美洲墨西哥,非洲摩洛哥和南非,亚洲日本、印度、以色列和土耳其, 以及大洋洲均有分布。中国无分布。 A
12、.2 经济危害 为害农田、牧草(苜蓿)、果园(柑橘、甘蔗)等经济作物。适生性强,与作物竞争生长。株产籽量高, 一旦定殖难以防除。易富集亚硝酸盐,毒害牲畜。被国际应用生物科学中心( CAB International ) 入侵 种数据库收录。 A.3 生物学特性及传播途径 一年生或短时多年生苋属杂草。喜光照、耐寒,喜水分充足的砂质土。常见于各种人工干扰生境, 如农田、果园、垃圾堆、铁路沿线、园林绿化带等。通过风媒、水媒等近距离传播,借助农作物、土壤调运 以及运输工具如集装箱等远距离传播。 5 SN/T53812021 附 录 B (资料性) 膨果苋种子高光谱波谱曲线 膨果苋种子高光谱波谱曲线见图
13、B.1 。 图B.1 膨果苋种子高光谱波谱曲线 6 SN/T53812021 附 录 C (资料性) ITS 序列扩增基本信息 C.1 引物序列 ITS4 : 5 -TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC-3 ; ITS5 : 5 -GGA AGT AAA AGT CGT AAC AAG G-3 。 注: 均为通用引物。 C.2 PCR体系及扩增程序 25 L或50 L体系,采用商品化的PCR试剂盒进行扩增。反应体系中引物浓度为10 mol / L ,模 板DNA含量约20 n g或以所采用的商品化PCR试剂盒说明书为准。 扩增程序中, ITS序列退火温度推荐为52 55 。其余
14、参数参照所采用商品化PCR试剂盒说 明书。 C.3 电泳及测序 ITS序列扩增产物电泳条件: 5 L PCR产物, 1 % 琼脂糖, 1 TAE缓冲液。 以DNA分子量标记作为对照, ITS序列扩增产物约700 b p 。 ITS序列测序引物为ITS 4及ITS 5 。 7 SN/T53812021 附 录 D (规范性) 膨果苋植株、花部、胞果、种子图片 D.1 膨果苋种子 见图D.1 。 (左图为截获自智利的样本,右图为采自西班牙的样本) 图D.1 膨果苋种子 D.2 膨果苋花被片和胞果 见图D.2 。 (左图为截获自智利的样本,右图为采自西班牙的样本) 图D.2 膨果苋雌花花被片和胞果
15、8 SN/T53812021 D.3 膨果苋花序 见图D.3 。 图D.3 膨果苋花序(徐晗拍摄于西班牙苜蓿草场2012年) 9 SN/T53812021 D.4 膨果苋植株及入侵生境 见图D.4 。 图D.4 膨果苋植株(徐晗拍摄于西班牙苜蓿草场 2012 年) 01 SN/T53812021 附 录 E (规范性) 白苋亚属常见种分种检索表 1. 植物体雌雄异株 *异株苋亚属Amaranthussubgen.Acnida 1. 植物体雌雄同株 2 2. 雌花花被片 5 *苋亚属Amaranthussubgen.Amaranthus 2. 雌花花被片( 0 ) 34 ( 5 ) 3 3. 雌
16、花花被片 0 ,败育薄叶苋Amaranthustenuifolius 3. 雌花花被片发育, 34 ( 5 ) 4 4. 雌花花被片 3 5 4. 雌花花被片 45 12 5. 圆锥花序顶生,顶生花序长于侧生花序,有时也具腋生团簇状花序 6 5. 花序腋生,无顶生花序 9 6. 植株直立生长,稀斜升 7 6. 植株匍匐、平卧后倾斜上升,自基部多分枝 8 7. 胞果卵球形至球形,长约 2.00 mm ,不开裂,果皮皱缩皱果苋A.viridis 7. 胞果卵状椭圆形,长 2.00 mm2.50 mm ,周裂,果皮光滑苋A. tricolor 8. 叶片先端微凹或凹缺,胞果圆球形至椭圆形,种子填充于
17、果皮中凹头苋 A.blitum 8. 叶片先端略尖至钝状,胞果略膨大,椭圆形,种子仅占据胞果内部分空间膨果苋 A.deflexus 9. 雌花苞片长约为花被片的 2倍,钻形,具芒尖白苋A.albus 9. 雌花苞片短于花被片,三角形或狭三角形 10 10. 雌花花被片略长于胞果,最外侧花被片宽匙形呈叶状;苞片狭三角形或披针形 南非苋A.capensis 10. 雌花花被片短于胞果,披针形;苞片三角形 11 11. 叶片宽卵形,菱状卵形或椭圆状卵形;雌花花被片具长不超过 0.25 mm直伸的小短尖 地中海苋A.graecizanssubsp. sylvestris 11. 叶片线状披针形至菱状匙
18、形;雌花花被片先端具 0.30 mm0.70 mm略反折的长芒尖 腋花苋A.graecizanssubsp. thellungianus 12.雌花花被片4 ,胞果球形,长2.00 mm ,光滑,周裂,种子长1.00 mm1.25 mm 北美苋A.blitoides 12. 雌花花被片 5 ,胞果卵状椭圆形,长 2.00 mm3.00 mm ,表面有纵纹,不开裂,种子长 0.85 mm 1.02 mm 13 13. 雌花花被片匙形,基部具爪;胞果具皱纹菱叶苋 A. standleyanus 13. 雌花花被片基部 1 / 3处合生成筒状,裂片有爪,具3脉;胞果狭椭球状,海绵质 合被苋A.pol
19、ygonoides ( *备注:异株苋亚属和苋亚属形态特征参见 SN / T 3710 ) 11 SN/T53812021 附 录 F (资料性) 膨果苋及近似种种子形态特征比对表 膨果苋及近似种种子形态特征比对表见表F.1 。 表F.1 膨果苋及近似种种子形态特征比对表 形态特征膨果苋长芒苋菱叶苋合被苋糙果苋白苋皱果苋 形状阔卵形、矩圆形阔卵形阔卵形阔卵形阔卵形、近圆形近圆形近圆形 颜色红褐色、褐色红褐色、褐色、深褐色褐色、深褐色褐色红褐色、褐色褐色、深褐色黑色 长( mm ) 1.001.20 0.901.12 0.951.02 0.800.95 0.750.85 0.901.00 0.7
20、50.83 宽( mm ) 0.700.80 0.811.03 0.700.80 0.660.81 0.670.77 1.001.02 0.900.98 环状边明显明显明显明显不明显明显明显或不明显 形态特征凹头苋反枝苋绿穗苋刺苋苋北美苋 形状近圆形阔卵形阔卵形、近圆形阔卵形、近圆形阔卵形、近圆形近圆形 颜色红褐色、褐色、深褐色、黑色褐色、深褐色、黑色褐色、深褐色、黑色红褐色、褐色、深褐色褐色、深褐色、黑色黑色 长( mm ) 1.101.15 1.101.15 0.850.99 0.951.02 1.101.15 1.051.25 宽( mm ) 1.071.13 0.981.03 0.97
21、1.01 0.810.88 1.051.10 1.051.28 环状边明显或不明显明显明显明显明显明显 21 SN/T53812021 附 录 G (资料性) 膨果苋及近似种种子形态特征图 膨果苋及近似种种子形态特征图见图G.1G.14 。 图G.1 膨果苋(西班牙)图G.2 膨果苋(智利) 图G.3 长芒苋图G.4 菱叶苋 图G.5 合被苋 图G.6 糙果苋 31 SN/T53812021 图G.7 白苋图G.8 皱果苋 图G.9 凹头苋图G.10 反枝苋 图G.11 绿穗苋图G.12 刺苋 图G.13 苋图G.14 北美苋 41 SN/T53812021 附 录 H (资料性) 膨果苋DN
22、A 条形码参考序列 H.1 膨果苋ITS基因参考序列 Amaranthus deflexus ( GenBank 登录号: MK 905427 ) 1 GGTGAACCTG CGGAAGGATC ATTGTCGAAA CCTGCCTAGC AGATTGACCA GCGAACATGT 61 TTTATCGTAA GCGGAGCGGG GTGCCCTAGC GAAGCCTTGC GGACGAGCTA TTGCCCCCTC 121 CTCCCGACGT TGGGTGGTGC TCCTCTCTGA GGGGTGCTGC TCGATGCAAC AACGAACCCC 181 GGCGCGGCCT GCGC
23、CAAGGA ACATGAACTT GAGCGTGCTC GTCTTGTGCC CGGGTCACCG 241 GCGCATGGGA GTGGATGCAC CCAGTACTGA GTATTAAACG ACTCTCGGCAACGGATATCT 301 TGGCTCTCGC ATCGATGAAG AACGTAGCGA AATGCGATAC TTGGTGTGAATTGCAGAATC 361CCGTGAACCATCGAGTTTTTGAACGCAAGTTGCGCCCGAAGCCTCTGGCCAGGGCACGTC 421 TGCCTGGGCG TCACGCATTG CGTCTCCCCC AACCCGCCTA
24、 GCTGTGGGAGGGGCGAGGAG 481 GATGGTCTCC CATGCCTCAC CGGGCGTGGA TGGCCTAAAA CAGGAGCCCACGGTTGCGAG 541 CTGCTGCGGC GATTGGTGGT GTGCAAGGCC TAGCCTATAA TGCAATCGCG TCGCACAGTG 601 CGTGGACCTT GTGGCCTTGA GGACCCTAGA GTGTTGCCCG AGGGCGACCA ACCACTGCGA 661 CC H.2 膨果苋ITS基因其他参考序列 MG 685230 、 MG 685231和MG 685232 。 SN/T53812
25、021 SN/T 53712021 参 考 文 献 1 Aellen P. AmaranthusL. In : He g i G ( ed ) Illustrierte Flora von Mitteleuro p a , 2nd edn. , vol 3 , Part 2 M . Munchen : Carl Hanser Verla g , 1959 : 465-516. 2 Ba y n N D. Revisintaxonmica de lases p eciesmonoicas de AmaranthusL. ( Amaranthace- ae ):Amaranthussub g .A
26、lbersiay Amaranthussub g .Amaranthus J . Ann. Mo. Bot. Gard. 2015 , 101 : 261-383. 3 Xu , H. et al. S p ecies identification , p h y lo g enetic anal y sis and detection of herbicide-resist- ant biot yp es of Amaranthusbased on ALS and ITS J . Scientific Re p orts , 2020. 10 , 11735. htt p s :/ doi.or g / 10.1038 / s41598-020-68541-x. 4 徐晗. 中国苋属植物的研究 D . 北京:中国科学院植物研究所, 2010. 5 徐晗等. 基于ITS序列的中国外来苋属植物系统关系分析 J . 广西植物, 2017 , 37 ( 2 ): 139-144. 6 虞赟等. 中国口岸首次截获外来有害杂草胀果苋 J . 植物检疫, 2015 , 1 : 93-95. 1 2 0 2 1 7 3 5 T/ N S 版权专有 侵权必究 * 书号: 155175 675 定价: 20.00元
