1、ICS 13.310 CCS A 92 GA 中华人民共和国公共安全行业标准 GA/T 法庭科学 疑似毒品中苄基哌嗪、 1-(3-氯苯 基 )哌嗪、 1-(3-三氟甲基苯基 )哌嗪检验 液 相色谱和液相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for BZP,mCPP and TFMPP in suspected drugs LC and LC-MS - - 发布 - - 实施 中华人民共和国公安部 发 布 GA/T I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 2020标准化工作导则 第 1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起 草。 请注意本
2、文 件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别 专利的责任。 本 文件 由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1） 提出并 归口。 本 文件 起草单位： 公安部物证鉴定中心、福建省公安厅刑事技术总队、浙江省公安厅、广西省公安 厅、 公安部 禁毒情报技术中心 、贵州省毕节市公安局。 本 文件 主要起草人： 赵阳、常颖、翟晚枫、郑珲、张春水、李航麒、傅得锋、黄克建、刘培培、钱 振华、李彭、赵彦彪、杨虹贤、郑晓雨、闻武、刘克林、叶树海、孙剑聪、刘晓锋、吴开封、刘季铭、 杜松、温彪、杨俊、张有志、龙路爽、高利生 。 GA/T 1 法庭科学 疑似毒品
3、中苄基哌嗪、 1-(3-氯苯基 )哌嗪、 1-(3-三氟甲基 苯基 )哌嗪检验 液相色谱和液相色谱 -质谱法 1 范围 本 文件 规定了法庭科学领域疑似毒品 样品 中 苄基哌嗪 （ BZP）、 1-（ 3-氯苯基）哌嗪 （ mCPP）、 1-（ 3-三氟甲基苯基） 哌嗪 （ TFMPP） 的 液相色谱 -质谱（ LC-MS）定性检验方法和液相色谱（ LC）定 量检验方法。 本 文件 适用于法庭科学领域疑似毒品 样品中 BZP、 mCPP、 TFMPP的定性分析和定量分析。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应
4、的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析 实验室用水规格和试验方法 GB/T 27418 测量不确定度评定和 表示 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界 定的术语和定义适用于本文件 。 4 原理 对疑似毒品样品中的 BZP、 mCPP、 TFMPP（化合物信息参见附录 A） 进行提取。采用液相色谱 - 质谱检测，以保留时间、质谱特征离子对和离子 对 丰度比作为定性判断依据；采用液相色谱检测， 以色 谱峰面积作为定量依据， 用 外标单点法或外标 标准曲线法进行定量分析。 5 试剂和材料 5
5、.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为色谱纯，试 剂包括： a） 乙腈； b） 甲醇； c） 乙酸铵 ； d） 甲酸； e） 甲酸铵 ； GA/T 2 f） 甲酸 -乙酸铵缓冲液（ 以配制 1000mL为例 ）： 称取乙酸铵 154mg，用 200mL水溶解，量取甲酸 1.0mL，滴入上述乙酸铵溶液中，转移至 1000mL容量瓶中用水定容，用真空抽滤泵抽滤，超 声波清洗器超声，即可使用； g） 0.1%甲酸甲醇溶液 （ 以配制 1000mL为例 ） ： 量取 甲酸 1.0mL，用 200mL甲醇稀释，转移至 1000mL 容量瓶中用
6、甲醇定容，用真空抽滤泵抽滤，超声波清洗器超声，即可使用 ； h） 20mM甲酸铵 水溶液（ 以配制 1000mL为例 ）： 称取甲酸铵 1260mg，用 200mL水溶解，转移至 1000mL容量瓶中用水定容，用真空抽滤泵抽滤，超声波清洗器超声，即可使用 ； i） 定性提取溶剂（ 以配制 1000mL为例 ）： 量取 950mL甲酸 -乙酸铵缓冲液 和 50mL 0.1%甲酸甲醇 溶液 ，混匀即可使用； j） 定量提取溶剂（ 以配制 1000mL为例 ）： 量取 950mL 20mM甲酸铵 水溶液 和 50mL乙腈 ，混匀即 可使用； k） 标准溶液： 1） 标准物质 储备液 ： 1.0mg/
7、mL BZP、 mCPP、 TFMPP标准物质 储备液 ,0 4 冷藏保存，有 效期 12个月 ； 2） 标准工作溶液按实验需求分为以下 四 类： 定性用标准工作溶液： 移取 BZP、 mCPP、 TFMPP标准物质 储备液 各适量 ，用 定性提 取溶剂 稀释，分别配制成 100ng/mL的 BZP、 mCPP、 TFMPP标准工作溶液。 0 4 冷 藏保存 ，有效期 1个月 ； 定性质控标准工作溶液： 移取 BZP、 mCPP、 TFMPP标准物质 储备液 各适量 ，用 定性 提取溶剂 稀释，分别配制成 1ng/mL的 BZP、 mCPP、 TFMPP标准工作溶液。 0 4 冷 藏保存 ，有
8、效期 1个月 ； 外标单点法定量用标准工作溶液：移取 BZP、 mCPP、 TFMPP标准物质 储备液 各适量 ， 用 定量提取溶剂 稀释 ，配 制 成 0.1mg/mL的 BZP、 mCPP、 TFMPP标准工作溶液。 0 4 冷藏保存 ，有效期 1个月 ； 外标标准曲线法定量用标准工作溶液： 移取 BZP、 mCPP、 TFMPP标准物质 储备液 各 适量 ， 使用 定量提取溶剂 稀释，配制成浓度为 0.01mg/mL0.5mg/mL范围 的 BZP、 mCPP、 TFMPP标准工作溶液 ， 至少配制 5个浓度 。 5.2 材料 材料包括： a） 具盖离心管 ； b） 容量瓶； c） 有机
9、 系 微孔滤膜： 0.22m； d） 水系微孔滤膜： 0.22m 。 6 仪器和设备 仪器 和设备包括： a） 液相色谱仪 （ LC） ：配有二极管阵列 （ DAD） 或紫外检测器 （ UV） ； b） 液相色谱 -质谱仪 （ LC-MS） ： 配电喷雾离子源 ，具备 MRM检测模式 ； c） 电子天平： 分度值 d0.01mg； d） 离心 机； GA/T 3 e） 振荡器； f） 真空抽滤泵； g） 超声 波 清洗 器 ； h） 移液器或移液管 。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 制备 样品充分均质 化， 根据实际需求，称取 10mg100mg 于具盖离心管中 ，加 入
10、10mL 甲醇，密封并振 荡 5min， 以不低于 4000r/min 离心 5min，取上清液， 用定性提取溶剂稀释 ，稀释液经 0.22m 的水系微 孔滤膜过滤，滤液作为样品溶液，供 LC-MS 分析 。 7.1.2 仪 器检测 7.1.2.1 液相色谱 -质谱仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a） 色谱柱： Zorbax Eclipse Plus RRHD C18 （ 1.8m， 2.1 100mm） 或其他等效柱； 注： Zorbax Eclipse Plus RRHD C18 柱为 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标
11、准的使用者， 并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相 同的效果，则可使用这些等效产品。 b） 柱温： 40C； c） 流动相 ： A： 甲酸 -乙酸铵缓冲液 ， B： 0.1%甲酸甲醇溶液 ； d） 洗脱： 梯度 洗脱程序 见表 1； 表 1 梯度洗脱程序 时间 min 流动相 A 流动相 B 0 95% 5% 0.5 95% 5% 5 75% 25% 12 40% 60% 13 20% 80% 14 10% 90% 14.5 0% 100% 16 0% 100% 16.1 95% 5% 20 95% 5% e） 流速： 0.4mL/min； f） 进样量： 1L； g） 离子源：电
12、喷雾离子源； h） 检测模式 ：正离子模式； GA/T 4 i） 毛细管 电压： 4000V； j） 干燥气： 10L/min； k） 干燥气温度： 350C ； l） 雾化气： 25psi； m） BZP、 mCPP、 TFMPP 的 离子对和 Fragmentor 电压、碰撞能量 （ CE） ：见表 2。 表 2 质谱参考条件 名称 母离子 m/z 子离子 m/z Fragmentor 电压 V 碰撞能量 eV BZP 177.1 91.0 100 15 85.0 30 mCPP 197.0 154.0 120 20 119.0 30 TFMPP 231.1 188.0 120 25 44
13、.0 25 7.1.2.2 进样 分别吸取 样品 空白（ 定性提取溶剂 ） 、样品溶 液、标准溶液空白（ 定性提取溶剂 ）和 定性用标准工 作溶液，按 7.1.2.1条件进样分析。 或 根据实际需求，再 分别吸取标准溶液空白 （ 定性提取溶剂 ） 和定性 质控标准工作溶液，按 7.1.2.1条件 进行分析。 7.2 定量分析 7.2.1 外标单点法 7.2.1.1 含量 预分析 根据实际需求，称取 10mg100mg 样品置于具盖离心管中，加入 10mL 定量提取溶剂 ，密封并振荡 10min，以不低于 4000r/min 离心 5min，取上清液作为样品溶液， 供 LC 分析 。 或根据实际
14、需要，将上 清液用 定量 提取溶剂稀释，稀释液作为样品溶 液，供 LC 分析。 采用外标单点法定量用标准工作溶液作 为定量参照。 按照公式 （ 1） 计算样品中目标物的 预分析 百分含量。 ( )3 02 += 100%C A V V VA V m 0 1 2 （ 1） 式中： 样品中目标物的百分含量， 用百分比 （ %） 表示 ； C0 外标单点法定量用 标准工作溶液中目标物的浓度，单位为毫克每毫升 （ mg/mL） ； A 样品溶液中目标物的色谱峰面积值； A0 外标单点法定量用 标准工作溶液中目标物的色谱峰面积值； V1 样品初次定容体积，单位为毫升 （ mL） ； V2 从 V1中移取
15、的体积，单位为毫 升 （ mL） ； V3 将 V2稀释时加入 定量提取溶剂 的体积，单位为毫升 （ mL） ； m 样品的 称量重量 ，单位为毫克 （ mg） 。 GA/T 5 7.2.1.2 准确定量 7.2.1.2.1 称量重量 的计算 根据 预分析中 目标物 含量测定结果，选择合适的定容体积、稀释倍数 （ 样品提取操作参数参见附录 B 中表 B.1） ，并按照公式 （ 2） 计算出样品 称量重量 （ m） ，使 样品溶液中目标物的浓度在所用标准工作 溶液浓度的 （ 100 30） %范围内 。 0C V Dm = （ 2） 式中 ： m 称量重量 ，单位为毫克 （ mg） ； C0 外
16、标单点法定量用 标准工作溶液中目标物的浓度， 单位为毫克每毫升 （ mg/mL） ； V 初次定容体 积， 单位为毫升 （ mL） ； D 稀释倍数； 样品中目标物的预分析百分含 量 ， 用百分比 （ %） 表示 。 7.2.1.2.2 样品 制备 根据 7.2.1.2.1 计算结果，平行称取样品 2 份 于具盖离心管中 （需要对定量结果进行不确定度评定时 ， 至少平行 称取 6 份） ，根据预分析含量结果，加入相应初次定容体积的甲醇，密封并振荡 10min， 以不 低于 4000r/min 离心 5min， 取上清液 作为样品溶液，供 LC 分析 ；当样品溶液需要稀释时，按照稀释倍 数进行稀
17、释定容，稀释液作为样品溶液， 供 LC 分析 。 7.2.1.2.3 仪器检测 7.2.1.2.3.1 液相色谱仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a） 检测器：二极管阵列或可变波长紫外检测器； b） 色谱柱： Inertsil ODS-SP（ 5m， 150mm 4.6mm） 或其他等效柱； 注： Inertsil ODS-SP 柱为 岛津 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该 产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效 果，则可使用这些等效产品 。 c） 柱温： 30C； d） 流动相： A： 20mM 甲酸铵 水溶液
18、， B：乙腈； e） 洗脱：梯度洗脱程序见表 3； 表 3 梯度洗脱程序 时间 min 流动相 A 流动相 B 0 85% 15% 10 10% 90% 13 10% 90% 13.1 60% 40% 20 85% 15% f） 流速： 1.0mL/min； g） 进样量： 5L； GA/T 6 h） 检测波 长： 249nm， 带宽： 4nm。 7.2.1.2.3.2 进样 分别吸取样品空白 （ 定量提取溶剂 ） 、样品溶液、标准 溶液 空白 （ 定量提取溶剂 ） 和外标单点法定 量用标准工 作溶液， 按 7.2.1.2.3.1条件进样分析。 当称取 2份样品时，每份样品进样 23针。 7.
19、2.1.2.4 计算含量 按照公式 （ 1） 计算样品中 目标物 百分含量。 7.2.2 外标 标准曲线 法 7.2.2.1 标准工作曲线绘制 采用 5.1中 配制的外标标准曲线法定量用标准工作溶液及标准溶液空白 （ 定量提取溶剂 ） 分别 绘制 成线性范围为 0.01mg/mL 0.5mg/mL的 BZP、 mCPP、 TFMPP标准工作曲线。 7.2.2.2 样品 制备 根据实际需求， 平行称取样品 2 份各 20mg200mg 于具盖离心管中，加入 20mL 定量提取溶剂 ， 密 封 并 振荡 10min， 以不 低于 4000r/min 离心 5min， 取上清液 用 有机系 微孔滤膜
20、过滤 ， 滤液作为样品溶液， 供 LC 分析。 7.2.2.3 仪器检测 7.2.2.3.1 液相色谱仪条件 同 7.2.1.2.3.1。 7.2.2.3.2 进样 分别吸取 样品空白 （ 定量提取溶剂 ） 、样品溶液 ，按 7.2.2.3.1条件进样分析 ， 每份样品平行进样 23 针。 7.2.2.4 计算 含量 以 外标标准曲线法定量用标准工作溶液 中 目标物的峰面积值为纵坐标、 外标标准曲线法定量用标准 工作溶液 中 目标物的 浓度 为横 坐标进行线性回归，得到线性方程。根据 样品溶液 中目标物的峰面积值， 按公式 （ 3） 计算出样品中目标物的 百分 含量 。 100%Y - b V
21、= am （ ） （ 3） 式中： 样品中目标物 的百分 含量 ，用百分比（ %）表示； Y 样品溶液 中 目标物 峰面积 值 的平均值 ； b 线性方程的截距 ； V 样品 溶液 的定容体积 ，单位为毫升（ mL）； a 线性方程的斜率 ; m 样品的称量重量，单位为毫克（ mg）。 8 结果 评价与表述 GA/T 7 8.1 定性结果评价 阳性结果评价：在相同条件下进行测定时，样品 溶液 中目标物 与浓度接近的定性用标准工作溶液中 的目标物相比， 色谱峰保留时间一致 （ 相对误差在 2.5%之内 ） 、 定性离子对 （ 至少两对 ） 一致， 且离 子 对 丰度比相对偏差不超过表 4规定的范
22、围 ，样品空白无干扰， 则可判断样品中检出目标物。 BZP、 mCPP 和 TFMPP的 MRM色谱图参见附录 C。 表 4 离子 对 丰度比的最大允许 相对 偏差范围 离子 对 丰度比 50% 20% 50% 10% 20% 10% 最大允许相对偏差 20% 25% 30% 50% 阴性结果评价： 样品溶 液中未检出目标物特征离子对，定性质控标准工作溶液中检出目标物特征离 子对，标准溶液空白无干扰，则可判断样品中未检出目标物。 8.2 定量结果评价 8.2.1 相对相差检验 平行称取 2份样品时， 测定数据按照公式 （ 4） 计算相对相差 （ RD） 。 12 100%-RD = （ 4）
23、式中： RD 相对相差， 用百分比（ %）表示 ； 1、 2 两 份 样品平行定量测定的含量数值； 两 份 样品 平行定量测定的含量平均值 ； 当 RD10%时 ，数据有效； 当 RD 10%时 ，需要重新检验。 8.2.2 异常值检验 平行称取 6份样品时，测定数据按照公式 （ 5） 进行 Grubbs可疑值判别。 i0i -G= s（ 5） 式中 ： i 可疑值； 0 6 个 （ 5 个 ） 数据的平均值 ； s 6 个（ 5 个） 数据的单次测定标准差； Gi Grubbs 统计值。 当测定次数 n=6时 ， G6（ 95） =1.822；当测定次数 n=5时， G5（ 95） =1.6
24、72。 GiGn（ 95） 时，数据有效， GiGn（ 95） 时，应剔除该数据，但只能剔除 1个数据，否则本次测定无效， 需要重新检验。 8.2.3 定量 结果计算 平行称取 2 份样品时，以 2 份样品含量测定的平均值作为 定量 结果 。 平行称取 6 份样品时，以 6 份 （ 5 份 ） 样品含量测定的平均值作为 定量 结果。 8.3 结果表述 阳性结果应表述为：从样品中检出 BZP/mCPP/TFMPP 成分。含量用百分比表示。 GA/T 8 阴性结果应表述为：从样品中未检出 BZP/mCPP/TFMPP 成分。 8.4 测量不确定度的评定与表述 如需提供测量不确定度， 定量 结果的不
25、确定度评定与表述按 GB/T 27418 执行。 GA/T 9 附录 A （ 资料性 ） 化合物信息 BZP、 mCPP、 TFMPP 相关信息见表 A.1。 表 A.1 BZP、 mCPP、 TFMPP 信息 中文名称 英文名称 化学式 结构式 CAS 号 苄基哌嗪 1-Benzylpiperazine C11H16N2 2759-28-6 1-(3-氯苯基 )哌嗪 1-(3-chlorophenyl)piper azine C10H13ClN2 6640-24-0 1-(3-三氟甲基苯基 ) 哌嗪 1-(3-Trifloromethyphen yl)piperazin C11H13F3N2
26、 15532-75-9 GA/T 10 附录 B （ 资料性 ） 外标单点法样品提取操作参数 外标单点法样品提取操作参考参数见表 B.1。 表 B.1 外标单点法样品提取操作参考参数 预分析含量 初次定容体积 mL 稀释倍数 外标单点法定量用 标准 工作 溶液浓度 mg/mL 50% 100% 20 21 0.1 30% 50% 20 11 0.1 10% 30% 10 11 0.1 5% 10% 30 - 0.1 2% 5% 20 - 0.1 1% 2% 10 - 0.1 GA/T 11 附录 C （ 资料性 ） BZP、 mCPP、 TFMPP 相关谱图 C.1 BZP 的 液相色谱图和
27、MRM 色谱 图 见图 C.1 和图 C.2。 0 . 0 1 . 0 2 . 0 3 . 0 4 . 0 5 . 0 6 . 0 7 . 0 8 . 0 9 . 0 1 0 . 0 1 1 . 0 m i n -1 0 1 2 3 m A U 2 4 9 n m , 4 n m (1 . 0 0 ) /5 .8 2 7 图 C.1 BZP 液相色谱图 图 C.2 BZP MRM 色谱图 C.2 mCPP 的 液相色谱图和 MRM 色谱 图 见图 C.3 和图 C.4。 0 . 0 1 . 0 2 . 0 3 . 0 4 . 0 5 . 0 6 . 0 7 . 0 8 . 0 9 . 0 1
28、0 . 0 1 1 . 0 m i n 0 25 50 75 m A U 2 4 9 n m , 4 n m (1 . 0 0 ) /7 .3 6 0 图 C.3 mCPP 液 相色谱图 GA/T 12 图 C.4 mCPP MRM 色谱图 C.3 TFMPP 的 液相色谱图和 MRM 色谱 图 见图 C.5 和图 C.6。 0 . 0 1 . 0 2 . 0 3 . 0 4 . 0 5 . 0 6 . 0 7 . 0 8 . 0 9 . 0 1 0 . 0 1 1 . 0 m i n 0 25 50 75 m A U 2 4 9 n m , 4 n m (1 . 0 0 ) /8 .0 3 0 图 C.5 TFMPP 液相色谱图 图 C.6 TFMPP MRM 色谱图
