1、 ICS 65.020.40 CCS B 61 DB42 湖北省 地方 标准 DB42/T 1753 2021 滇楸 组培苗生产技术规程 Code of practice for the production of tissue culture seedlings of Catalpa fargesii Bur. f. duclouxii (Dode) Gilmour 2021 - 08 - 30 发布 2021 - 10 - 30 实施 湖北省市场监督管理局 发 布 DB42/T 1753 2021 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 .
2、 1 4 繁殖材料要求 . 1 5 外植体采集与处理 . 1 采集 . 1 处理 . 1 6 培养前准备 . 2 超净台消毒 . 2 培养基配制与灭菌 . 2 培养基保存 . 2 7 组织培养 . 2 培养条件 . 2 初代培养 . 2 继代培养 . 2 生根培养 . 3 外植体更新 . 3 8 室内炼苗 . 3 组培苗要求 . 3 炼苗方法 . 3 9 移栽 . 3 移栽基质 . 3 组培苗清洗 . 3 废弃培养基处理 . 3 植入容器 . 3 容器苗管理 . 3 10 技术档案管理 . 4 附录 A（资料性） 滇楸组培苗培养基配方表 . 5 DB42/T 1753 2021 II 前 言
3、本文件按照 GB/T 1.1 2020标准化工作导则 第 1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖北省林业标准化技术委员会提出并归口。 本文件起草单位：湖北省林业科学研究院、湖北省林科院石首杨树研究所、华中农业大学。 本文件主要起草人：张新叶、李振芳、彭婵、樊孝萍、杜克兵、许秀环、陈慧玲、黄国伟、徐红梅、 荣新军、马林江。 本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省林业标准化技术委员会，联系电话： 027-86952116，邮箱： ；对本文件的有关修改意见，请反馈至湖北省林业科学研究院，电话： 027-8
4、6952109， 邮箱： 。 DB42/T 1753 2021 1 滇楸 组培苗生产技术规程 1 范围 本文件规定了滇楸组培苗生产技术的繁殖材料要求、外植体采集与处理、培养前准备、组织培养、 室内炼苗、移栽等要求。 本文件适用于湖北省内滇楸无性系组培苗的生产技术。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 LY/T 1000 容器育苗技术 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定
5、义。 4 繁殖材料要求 外植体应采自生长健壮、无病虫害的优良无性系和单株。 5 外植体采集与处理 采集 5.1.1 采集时间与部位 4月 9月 ，选择连续晴天 2 d以上的天气采集树冠外围中上部的枝条，以半木质化为宜。 1.1.1 采集记录 采集后要分别加注标签，标明无性系或单株、采集地点、时间、采集人等，建立信息档案。 处理 5.2.1 保鲜 即采即用，若超过 0.5 h，用干净湿润毛巾包裹；若长距离运输，置于低温盒中储藏保湿，注意枝条 不可直接接触冰块。 DB42/T 1753 2021 2 5.2.2 预处理 剪除所有叶片及叶柄，自来水冲洗外植体表面，将枝条剪成 4.0 cm 6.0 c
6、m的带芽茎段，放入 0.3% 0.5%洗衣粉水溶液中用毛刷刷洗，再用流水冲洗 1.0 h 2.0 h，然后用 400 mg/l青霉素 +200 mg/l链霉素 液浸泡 15 min，再用 100 mg/l聚乙烯吡咯烷酮（ PVP）浸泡 5 min，蒸馏水清洗 3次 4次，每次 30 s。 6 培养前准备 超净台消毒 将超净工作台打开紫外灯照射消毒 20 min 30 min，然后打开超净工作台风机吹风 10 min 20 min， 75%医用酒精擦拭台面。 培养基 配制与灭菌 根据 各类培养基配方（见附录 A） 以及需要配制的体积，计算所需各种药品母液以及水的用量，称 取所需用量的凝固剂和碳源
7、，用 70% 80%最终体积的水加热溶解，依次加入大量元素、铁盐、微量元素、 有机物、植物生长调节剂母液等，边加入边搅拌，调节 pH、定容、分装、封口、标记。配制后，当天采 用高压蒸汽灭菌，在 0.105 MPa、 121 条件下灭菌 30 min。 培养基保存 按 LY/T 1882的有关规定执行，灭菌后的培养基，常温下 7 d内使用完， 2 4 条件下 14 d内使用 完。 7 组织培养 培养条件 培养温度为 24 2 ，光照时数 12 h/d 14 h/d，光照强度 1500 lx 3000 lx。 初代培养 7.2.1 外植体消毒 将预处理后的材料，置于消毒后的超净台上，用 75%医用
8、酒精浸泡外植体 15 s 30 s，无菌水冲洗 3 次 4次，再用 2%次氯酸钠溶液消毒 10 min 20 min，无菌水清洗 3次 4次，每次 30 s，用无菌滤纸吸干 表面水分。也可选用其它外植体表面灭菌化学药品，按 LY/T 1882的有关规定执行。 7.2.2 外植体接种 在超净工作台上，将外植体切成 1.5 cm 2.0 cm长的带芽茎段， 垂直或斜插至诱导培养基中，注明 编号。 7.2.3 萌芽诱导 在诱导培养基中培养 20 d 30 d，诱导出芽后， 幼芽高 1.0 cm 2.0 cm时 转接至增殖培养基中。 继代培养 7.3.1 继代增殖接种 DB42/T 1753 2021
9、 3 将诱导芽切割下来，转接至增殖培养基中，获得无菌芽苗。 生长 20 d 30 d 后，将继代培养基中获得的 无菌芽苗，转接至增殖培养基中，获得无菌丛生芽苗。然后定期将继代培养基中的丛生芽苗分割，转接 至增殖培养基中，扩大丛生芽数量。 7.3.2 培养要求 每隔 20 d 30 d，应继代接种 1次 ，每瓶接种 3个 4个芽 （丛） 。 生根培养 将高度 2 cm 3 cm、带 4片 6片叶的无菌单芽苗，沿其茎基部切下，转接至生根培养基中，每瓶接 种 3个 4个，培养 20 d 30 d，获得生根组培苗。 外植体更新 增殖培养超过 30代 40代以后，应重新采集外植体进行诱导培养。 8 室内
10、炼苗 组培苗要求 苗高 3 cm 4 cm、新根 3条以上 、 长 1.0 cm 2.5 cm的完整小植株。 炼苗方法 将生根组培苗移至光照 5000 lx 8000 lx，温度 25 28 的健化室或大棚内炼苗 7 d 10 d，移植 前 1 d 2 d松开瓶盖或封口膜。 9 移栽 移栽基质 按泥炭珍珠岩 7 3体积比混合均匀后，移栽前 1 d 2 d用 500倍 800倍的 75%代森锰锌或甲基托 布津溶液浇透。 组培苗清洗 取出组培苗，用清水洗去根上附着的培养基， 直立放在 带有少量净水的托盘里待移栽。 废弃培养基处理 废弃的培养基不宜直接排入水体， 可作为肥料再利用 。 植入容器 用竹
11、签将栽植容器中央基质打孔后，栽入组培苗，轻压根部，浇透定根水，喷施 800倍 1000倍的 75%代森锰锌或甲基托布津溶液。 容器苗管理 9.5.1 温湿度控制 移栽后立即盖上健化罩或薄膜保温保湿，温度 25 2 ，湿度不低于 85%。 DB42/T 1753 2021 4 9.5.2 水肥管理 盖膜后（见 9.5.1） 7 d 14 d后可去除健化罩或薄膜， 浇水 以见干见湿为原则，保证基质不缺水即 可 。移栽苗长出新叶起 ，每隔 7 d 10 d喷施 1次 800倍 1000倍的叶面营养液或 0.1% 0.2%的磷酸二氢钾 水溶液，连续喷 3次 4次。 9.5.3 病虫害防治 以防为主，每
12、隔 7 d 10 d喷施 1次 800倍 1000倍的 75%代森锰锌或甲基托布津溶液。 9.5.4 大田移栽 将苗高 20 cm以上的容器苗放于室外，浇透水，在上方 1.5 m以上覆遮光率 75%的遮阳网， 7 d 14 d后 去掉遮阳网，自然光下过渡 5 d 7 d后可往大田移栽。炼苗期间，见干见湿，根据叶片状态适时补水。 10 技术档案管理 将外植体采集、组织培养生产记录、苗木管理、苗木质量、病虫害防治记录等信息技术资料建立档 案，专人记载，按 LY/T 1000的有关规定执行。 DB42/T 1753 2021 5 A A 附录 A （资料性） 滇楸组培苗培养基配方表 表 A.1给出了
13、各类 滇楸组培苗 培养基配方。 表 A.1 滇楸组培苗培养基配方表 成分类别 药品名称 诱导培养基 mg/L 增殖培养基 mg/L 生根培养基 mg/L 大量元素 硝酸铵（ NH4NO3） 1 416 1 416 1 416 硫酸钾（ K2SO4） 1 559 1 559 1 559 硫酸镁（ MgSO47H2O） 740 740 740 磷酸二氢钾（ KH2PO4） 265 265 265 硝酸钙（ Ca(NO3)2） 1 968 1 968 1 968 无水氯化钙（ CaCl2） 112.5 112.5 112.5 铁盐 乙二胺四乙酸二钠（ Na2- EDTA ） 45.4 45.4 45
14、.4 七水硫酸亚铁 （ FeSO47H2O） 33.8 33.8 33.8 微量元素 硫酸锰 （ MnSO4H2O） 33.5 33.5 33.5 六水硝酸锌（ Zn(NO3） 2 6H2O） 17 17 17 硼酸（ H3BO3） 4.8 4.8 4.8 钼酸钠 （ Na2MoO4） 0.39 0.39 0.39 五水硫酸铜（ CuSO45H2O） 0.25 0.25 0.25 六水硫酸镍（ NiSO46(H2O)） 0.005 0.005 0.005 有机质 盐酸硫胺素 2 2 2 烟酸 1 1 1 盐酸吡哆醇 0.5 0.5 0.5 甘氨酸 2.0 2.0 2.0 肌醇 100 100 100 防褐变剂 活性炭 1 000 2 500 1 000 2 500 - 碳源 蔗糖 24 000 26 000 24 000 26 000 24 000 26 000 植物生长调 节剂 6-苄基腺嘌呤（ 6-BA） 1.0 1.5 1.0 1.5 - 吲哚丁酸（ IBA） 0.1 0.2 0.1 0.3 0.1 0.3 凝固剂 琼脂 7 000 7 000 7 000 pH 5.5 5.5 5.5 注： FeSO47H2O 应先与 Na2-EDTA 配制成络合物，然后才与其他溶液混合。
