1、 ICS 65.020.20 CCS B 42 DB32 江苏省 地 方 标 准 DB 32/ T 4058 2021 载脂蛋白 B 羊多抗血清制备技术规程 Technical regulation of apolipoprotein B sheep multiple antiserum 2021 - 06 - 03 发布 2021 - 07 - 03 实施 江苏省 市场 监督 管理 局 发布 DB32/T 4058-2021 前 言 本 文件按照 GB/T 1.1 2020标准化工作 导 则 第 1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起 草 。 本文件由江苏丘陵地区镇江农业科学研究所提出。
2、 本文件由江苏省畜牧业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：江苏丘陵地区镇江农业科学研究所、江苏大学、江苏省句容市茅山管委会、江苏 省农科院畜牧研究所、镇江万山红遍农业园。 本文件主要起草人：徐志伟、徐一然、周金桂、王慧娟、花卫华、徐小波、于建宁、朱明空、朱建 飞、鲁群。 DB32/T 4058-2021 载脂蛋白 B 羊多抗血清制备技术规程 1 范围 本文 件 规定了载脂蛋白 B羊多抗血清制备技术规程的 羊品种选择和饲养要求 、免疫佐剂选用、抗原 乳化、免疫剂量和部位、抗体检测、采血、血清分离、羊血清保存、记录。 本 文 件 适用于羊多抗血清的制备。 2 规范性引用文件 本文件 没有 规范
3、性引用文件 。 3 术语 和 定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 载脂蛋白 B Apolipoprotein B 载脂蛋白是血浆脂蛋白中的蛋白质部分，它的基本功能是运输血液当中的脂类。载脂蛋白 B，由于 氨基酸组成的不同，分为载脂蛋白 B48和载脂蛋白 B100。载脂蛋白 B48是乳糜微粒的载脂蛋白，载脂蛋 白 B100是极低密度脂蛋白和低密度脂蛋白的载脂蛋白 。 3.2 乳化 emulsification 乳化是一种液体以极微小液滴均匀地分散在 互不相溶的另一种液体中的作用。乳化是液 -液界面现 象，两种不相溶的液体，如油与水，在容器中分成两层，密度小的油在上层，密度大的水在下层。若
4、加 入适当的表面活性剂在强烈的搅拌下，油被分散在水中，形成乳状液，该过程叫乳化。 3.3 佐剂 adjuvant 非特异性免疫增强剂，当与抗原一起注射或预先注入机体时，可增强机体对抗原的免疫应答或改变 免疫应答类型。佐剂增强免疫应答的机制是通过改变抗原的物理形状，延长抗原在机体内保留时间，刺 激单核吞噬细胞对抗原的递呈能力，刺激淋巴细胞分化，增强扩大免疫应答能力。 4 羊品种选择和 饲养要求 选用体 重 约 35 kg的健康青年羊公羊，年龄在 10月龄至 2周岁。免疫前全部打上耳标，采用群养放牧 饲养方式，白天放牧 4 h，上午、下午各 2 h，晚上添加少量精料，有利于羊只身体健壮，避免过肥，
5、自 动饮水，每天早晚各观察次 羊的健康状况。 DB32/T 4058-2021 5 免疫佐剂选用 首次免疫佐剂采用 sigma 完全弗氏佐剂，从第二次免疫开始，采用 ISA206 佐剂。 6 抗原乳化 采用高速剪切 法乳 化抗原。将佐剂按需要量放置在乳化容器中，乳化容器需放置在降温夹套中，用 漩涡混合器使之高速旋转， 5号针头逐滴加入载脂蛋白 B抗原溶液，待前滴抗原溶液完全消失后，再加 入第二滴抗原溶液；抗原溶液全部加完后，再混合 15 min。 7 免疫剂量和部位 免疫剂量和部位见表 1.。 表 1 免疫剂量和部位 次数 间隔时间（ d） 免疫接种部位 免疫剂量（ mg） 第一次免疫接种 1
6、5 腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧，足窝注射 2 第二次免疫接种 9 腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧，腹股沟淋巴结点的免疫 2 第三次免 疫接种 9 腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧 2 第四次免疫接种 9 腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧 2 第五次免疫接种 9 腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧 2 8 抗体检测 8.1 外观 应 呈 黄色或微红色血清状液体、允许少量的絮状物或沉淀。 8.2 效价测定 采用琼脂扩散法进行效价测定 ,效价不低 于 1： 256。 9 采血 在第五次免疫后，检测抗体水平，达到效价要求后，采用动脉一次性采血。血液用 250 mL 玻 璃瓶 收集，血液占玻璃瓶的 1/5。 10 血清分离 把收集好血液的玻璃瓶， 放在 37 恒温 水浴锅中一个小时 ， 把玻璃瓶从水浴锅中取出；再把血清 从玻璃瓶中吸出；用低速离心机 4500 rmp/min，离心 15 min， 取 上清液，颜色为 乳 白色 或微 黄色， 去掉 沉淀 物 杂质。 DB32/T 4058-2021 11 血清保存 用玻璃瓶 收集 血清，放 在 -20 保存 3 年，或 -70 保存 6 年 冰柜保存。 12 记录 对生产全过程进行记录，生产档案保存血清， 没有用完血清继续保存 用完。 _
