1、 ICS 65.020.30 CCS B44 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 24072021 兴羔肉羊分子标记辅助育种技术规程 Technical code of breeding practice with molecular marker assisted selection for Xinggao mutton sheep 2021-10-15发布 2021-11-15实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 24072021 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业
2、标准技术委员会（SAM/TC 19）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古赛诺种羊科技有限公司、内蒙古杜美牧业生 物科技有限公司。 本文件主要起草人：付绍印、刘永斌、王标、祁云霞、何小龙、达赖、孙素珍、特日格勒、何江峰、 王力伟、李俊龙、马跃军、刘学文、郝宸昉、陈欣、方勤圆。 DB15/T 24072021 1 兴羔肉羊分子标记辅助育种技术规程 1 范围 本文件规定了兴羔肉羊分子标记辅助育种的基本要求和操作要求。 本文件适用于兴羔肉羊的育种。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于
3、本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 1236 绵、山羊生产性能测定技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 分子标记辅助选择 molecular marker assisted selection；MAS 利用性状关联的主效基因或者紧密连锁的DNA分子标记对目标性状进行选择的育种技术。 3.2 标记辅助最佳线性无偏预测 marker -assisted best linear unbiased prediction;MA-BLUP 适用于羊MAS的一种混合线性模型方法。该混合线性模型同时利用分子标记和表型信息，通过混合 模
4、型方程组(MME)求解分子标记效应和微效多基因效应，羊个体估计育种值为分子标记效应和微效多基 因效应之和。 4 基本要求 4.1 分子标记辅助选择的适用范围和条件应满足以下基本要求： 4.1.1 分子标记类型一般为单核苷酸多态。 4.1.2 已知目标性状的主效基因或与之紧密连锁的标记，且分型标记来自于主效基因内部或与之紧密 连锁的侧翼标记。 4.1.3 单基因或寡基因的标记辅助选择适用于质量性状、阈性状以及数量性状已知主效基因或大效应 位点的情形。 4.1.4 多基因标记辅助选择的适用对象主要为数量性状或微效多基因的性状。 4.2 实施分子标记辅助选择的基本要求： DB15/T 2407202
5、1 2 具备表型测定与采集，样品采集、运输、标识和存储，基因分型的实验条件和技术人员。 4.3 分子标记辅助选择包含内容： 分子标记辅助选择的活动应包括检验（血液或组织样品采集、DNA提取和纯化、DNA定量、PCR扩增 与产物分型）、有利与有害基因型的判定、个体育种值估计、目标个体的保留与淘汰等环节。 5 操作要求 5.1 采样 5.1.1 采样时，需要填写采样日期、采样地点、被采个体信息（耳号、年龄、性别）、样品编号、采样 人等，并妥善保存相关记录。 5.1.2 样品可以是血液、组织样品，也可以是其它生物学样品。 5.1.3 样品采集过程避免个体交叉污染。 5.1.4 样品采集后应冷冻保存和
6、运输。 5.2 DNA提取与纯化 按照农业农村部2406号公告-7-2016执行。 5.3 基因分型 5.3.1 标记位点或基因的来源 宜选公开文献报道且已公开并获使用许可的专利；也可由实施单位或委托单位前期研究获得影响同 一性状的标记或基因。标记的最小等位基因频率应满足多态性的定义。 5.3.2 分型与结果判读 单基因标记可采用PCR扩增产物的相关方法判读基因型（PCR-RFLP、单分辨率熔解曲线、KASP等）。 多基因标记可采用分别针对每个标记分型的策略，亦可采用适合多基因标记分型的其他方法进行分型。 5.4 表型测定 生产性能测定按NY/T 1236要求执行。单基因标记辅助选择无需进行表
7、型测定。 5.5 分子标记辅助选择 5.5.1 直接选择 直接根据育种群的基因分型结果，淘汰不利基因型（或有害基因型）或基因型组合的个体，保留有 利基因型（或理想基因型）或基因型组合的个体。根据育种规模，可按照一次选择或者多次选择的方法 进行选种留种。 5.5.2 两阶段选择 对于在进行生产性能测定前必须进行预选的情形，宜使用两阶段选择法。第一阶段，根据育种群目 标基因检测分型结果，保留全部有利基因型或基因型组合的个体，淘汰不利基因型或基因型组合的个体。 DB15/T 24072021 3 第二阶段，对保留个体组成的育种群进行性能测定获得表型信息，实施基于传统育种的遗传评估（如 BLUP），根
8、据目标性状的个体育种值选留优秀亲本。 5.5.3 MA-BLUP选择 对于多基因或者微效多基因控制的数量性状，宜采用MA-BLUP进行选择：利用MA-BLUP模型见附录A 整合系谱、表型和分子标记信息，估计个体MA -BLUP育种值并排序，按预设留种率选留优秀亲本。 DB15/T 24072021 4 A A 附录A （资料性） MA-BLUP模型及说明 MA-BLUP基本模型计算见式A.1: y =Xb+Wa+Zu+e(A.1) 式中： y为羊性状表型值向量， b为非遗传固定效应向量， a为分子标记提供的前景遗传效应值向量， u为系谱信息提供的背景遗传值，即剩余多基因加性效应向量， e为个体随机残差向量， X、W、Z分别为b、a、u的关联矩阵。
