1、 ICS 65.100.01 CCS Z18 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 21302021 土壤中硝 基呋喃类 药物残留 量的测定 高效液相 色谱法 Determination of nitrofurans residues in soilhigh performance liquid chromatography method 2021-03-25 发布 2021-04-25 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 21302021 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.12020 标准 化工 作导则 第1 部分： 标准化 文件 的结构 和起草 规则 的
2、规 定 起草。 本文件 由赤 峰市 农牧 科学 研究院 提 出。 本文件 由内 蒙古 自治 区畜 牧业标 准化 技术 委员 会（SAM/TC 19） 归 口。 本文件 起草 单位 ：赤峰 市农 牧 科学 研究 院。 本文件 主要 起草 人： 乌 仁图 雅 、 文 辉、 荣迪 、 邓 宇、 王 岩、 王国 全、 娜日 娜、 王 盛男 、 曲 颖超、 陈 琪、赵 剑平 、李 雯雯 、索 力墨、 李峰 、正 月、 刘丹 竹、刘 汉宇 。 DB15/T 21302021 1 土 壤中硝 基呋喃类 药物残 留量的测 定 高效液 相色谱 法 1 范围 本文件 规定了 土壤 中呋喃 西林、 呋喃妥 因、 呋
3、喃唑 酮和呋 喃它酮4种硝 基呋 喃 类药物 残留量 的高 效 液相色 谱测 定方 法。 本文件 适用 于土 壤中 硝基 呋喃类 药物 残留 量的 测定 。 2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用 于 本 文件。 NY/T 395农 田土 壤环 境质 量监测 技术 规范 3 术语和 定义 本文件 没有 需要 界定 的术 语和定 义。 4 原理 试样经
4、60 %乙 腈溶 液振荡 、超声 提取处 理后 ，HLB 固 相萃取 柱净化 ，高 效液相 色谱法 测定， 外标 法 定量。 5 试剂和 材料 5.1 乙腈（C2H3N ） ：色 谱纯 。 5.2 甲醇（CH4O ） ：色 谱纯 。 5.3 甲酸（CH2O2 ） ：色 谱纯 。 5.4 氨水（H5NO）。 5.5 乙酸铵(C2H7NO2) 。 5.6 硝基呋 喃类 药物 标准 品： 呋 喃西林(furacilin), 纯度 大于等 于99.9 % ； 呋喃 妥因(nitrofurantoin), 纯度大 于等 于99.9 %；呋喃 唑 酮(furazolidone), 纯度 大 于等于99.9
5、 % ； 呋喃它 酮(furaltanone), 纯度 大于等 于 99.9 %。 5.7 乙酸铵 溶液(0.05 %)：称 取 0.5 g 乙 酸 铵（5.5 ） ， 加水 溶 解， 用稀 酸稀 碱调 pH 为 4.8，定 容 至 1000 mL。 DB15/T 21302021 2 5.8 硝基呋 喃类 药物 标准 储备 液（100 g/mL）： 称 取 4 种 硝 基呋 喃类 药物各 10 mg(精 确到 0.00001 g) 于4 个100 mL 容 量瓶 中，加 乙 腈（5.1 ）超 声溶 解定容 至 刻度 ，超 声溶 解。0 4 保 存6 个月 。 5.9 硝基呋 喃类 药物 混合
6、 标准 储备液 （10 g/mL） ： 精密量 取 100 g/mL 的 4 种 硝基 呋 喃类 药物 标准贮 备 液各 10 mL 于100 mL 容量 瓶 中， 用乙 腈（5.1 ）定容 至 刻度 。0 4 保存 6 个月 。 5.10 混合标 准工 作液 ： 分别 移取 适量10 g/mL 混合 标准 贮备液 于 10 mL 容量 瓶中 ， 用乙腈 水 （5.14 ） 定容至 刻度 ， 配 制成0.10 g/mL 、0.20g/mL、0.50 g/mL、1.00g/mL、2.00g/mL 和 4.00g/mL 的系列 标准 工作 液。0 4 保存 1 周。 5.11 乙腈水 （60 %）
7、： 量 取 600 mL 乙腈 （4.1 ）与 400 mL 水混 匀。 5.12 甲酸乙 腈（0.1 %） ：量取1 mL 甲 酸（4.3 ）与999 mL 乙 腈混 匀。 5.13 甲醇溶 液（10 %）： 量 取 100 mL 甲 醇（4.2 ）与 900 mL 水混 匀。 5.14 乙腈水 （10 %）： 量 取 100 mL 乙腈 （4.1 ）与 900 mL 水混 匀。 5.15 固相萃 取柱 ：HLB 柱， 规格 为 60 mg/3 mL。 5.16 针式滤 膜：0.22 m （ 有机相 ） 。 5.17 微孔滤 膜： 规格 为 0.2 m 。 6 仪器和 设备 6.1 高效液
8、相色 谱仪 ：配 有紫 外检测 器或 二极 管阵 列检 测器。 6.2 分 析 天平 ：感量 0.00001 g。 6.3 分析天 平： 感量 为 0.01 g 。 6.4 离 心 机： 转速 不低于 4000 r/min 。 6.5 振 荡 器： 振荡 频率 不低于300 r/min 。 6.6 超声波 清洗 器。 6.7 旋转蒸 发仪 ：配 有 50 mL 茄型瓶 。 6.8 固相萃 取装 置。 6.9 移液枪 ：1000L。 6.10 移液枪 ：100 L 。 6.11 具塞离 心管 ：50 mL 。 6.12 样品筛 ：0.5 mm 。 6.13 容量瓶 ：10 mL 、100 mL
9、、1000 mL。 6.14 漩涡混 匀仪 ：振 荡频 率不 低于 2800 r/min。 DB15/T 21302021 3 7 分析步 骤 7.1 样品采 集 土壤样 品采 集按NY/T 395 的规定 执行 。 7.2 制备 样品采 集后 去杂 物后 充分 混匀， 在室温 条件 下自 然 风干， 粉粹， 全部 通过0.5 mm样 品筛 ， 装入 洁净 容器， 密封 保存 。 7.3 样品的 提取 、净 化 7.3.1 提取 称取试 样2 g （精 确至0.01 g）于50 mL 具塞 离心 管中 ， 加入15 mL 乙 腈水 溶液 （5.11），以200 r/min 振荡5 min （6
10、.5 ）, 超 声提取15 min （6.6 ） ，以4000 r/min 离心10 min （6.4 ） ，重复 提取3次， 上清 液 合并摇 匀， 置于50 mL 茄形瓶 中 ，45 旋转 蒸发 至近干 （6.7 ）， 用10 mL 甲酸 乙腈（5.12 ）溶 解， 待净 化。 7.3.2 净化 将HLB柱 安装 于固相 萃取 装 置上（6.8 ）， 依 次用 甲醇（5.2）3 mL 、水3 mL活 化 。将样 品液通 过固 相萃取 柱，用 水3 mL 、用3 mL 甲 醇溶 液（5.13 ） 淋洗、 抽 真空1 min ，用10 mL 甲醇（5.2 ） 洗脱， 收集 洗脱液 并在45 旋
11、 转蒸 发 至近干 （6.7），加 乙 腈 水（ 5.14） 2.00 mL 涡 旋溶 解， 过0.22 m滤 膜（ 5.16）， 供高效 液相 色谱 仪测 定。 7.3.3 空白实 验 除不加 样品 外， 其余 均按 照上述 测定 步骤 进行 。 7.4 测定 7.4.1 液相色 谱仪 参考 条件 7.4.1.1 色谱柱 ：C18 色谱 柱， 柱长 250 mm，内径 4.6 mm ， 粒径 4.6 m 。 7.4.1.2 流动相 ：乙 腈：0.05 %乙酸 铵 ，体 积比 80:20 ， 调至 pH 值为 4.8 。 7.4.1.3 流速：1.0mL/min 。 7.4.1.4 检测波 长
12、：365nm 。 7.4.1.5 柱温：40 。 7.4.1.6 进样量 ：20 L。 7.4.2 液相色 谱测 定 7.4.2.1 标准系 列工 作曲 线的 绘制 在仪器 最佳 条件 下， 将标 准系列 工作 溶液 （5.10） 分别注 入液 相色 谱仪 中， 测定相 应的 色谱 峰 ， 以 标准系 列工 作液 的浓 度为 横坐标 ， 以峰 面积 为纵 坐 标， 绘制 标准 工作 曲线 。 标 准溶液 液相 色谱 图参 见附 录A。 DB15/T 21302021 4 7.4.2.2 试样溶 液及 空白 溶液 的测 定 分 别 移取 试样 溶液 和空 白溶 液， 分别 注入 液相 色谱仪 中
13、。 以色 谱峰 面积 进行外 标 法定 量。 试 样液 中 硝基呋 喃类 的响 应值 均应 在仪器 检测 的线 性范 围之 内。试 样浓 度不 在线 性范 围内时 将样 品稀 释后 进样。 注： 按照液相色谱条件测定样品溶液和标准溶液， 如果样品溶液中某组分保留时间与标准溶液的某一组分保留时间 相差在0.5 % 以内，可认定相 同组分。 8 结果计 算 土壤中 硝基 呋喃 类残 留量Xi 质 量分 数（mg/kg）表 示, 按式（1）计 算: = 1000 1000 (1) 式中： Xi 试样 硝基 呋喃 类的 含量， 单位 为毫 克每 千克 （mg/kg）； Ci 从工 作曲 线得 到的 被
14、测组 分溶 液浓 度， 单位 为微克 每毫 升（ g/mL）； V 提 取液 总体 积， 单位为 毫 升（mL ）； f 稀 释倍 数； m 样 品称 样量 ，单 位为克 （g ）。 9 精密度 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值不应 超过 算术 平均 值的10 %。 10 检出限 、定 量限 和回 收率 10.1 本方法 的检 出限 ：呋 喃西 林0.16 mg/kg ； 呋喃 托因0.14 mg/kg； 呋喃 唑酮 0.16 mg/kg；呋 喃它 酮0.12 mg/kg 。 10.2 本方法 的定 量限 ：呋 喃西 林 0.34 mg/kg ； 呋喃 托因
15、0.30 mg/kg； 呋喃 唑酮 0.34 mg/kg；呋 喃它 酮0.27 mg/kg 。 10.3 呋喃西林回收率 ：88.59 %102.92 % ， 相对标准偏 差（RSD）： 2.24 %4.20 %；呋喃妥因回 收 率：74.43 %89.72 % ， 相 对标准偏 差（RSD）： 0.91 %4.29 % ； 呋喃唑 酮回收 率：78.61 %91.81 % ， 相对标准 偏差（RSD）： 0.65 %3.85 %；呋喃 它酮回 收率：81.47 %89.86 % ， 相对标准 偏差（RSD）： 1.70 %4.49 %。 DB15/T 21302021 5 附录A （资料 性） 土壤中 硝基 呋喃 类药 物标 准物质 色谱 图 硝基呋 喃类 药物 标准 物质 色谱图 见图A.1 注1 ：呋喃西林保留时间7.013 min。 注2 ：呋喃妥因保留时间8.801 min。 注3 ：呋喃唑酮保留时间11.423 min 。 注4 ：呋喃它酮保留时间13.782 min 。 图A.1 硝基 呋喃 类药 物标 准物 质 液相色 谱图 min 2 4 6 8 10 12 14 16 mAU 0 5 10 15 20 7.013 8.801 11.423 13.782
