1、以正式出版文本为准 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5219 2019 出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸 残留量的测定 液相色谱 - 质谱 / 质谱法 Determination of picloram, aminopyralid residues in foods tuffs for export LC-MS/MS method 2019-12-27发布 2020-07-01 实施 ICS 67.050 C 53 中华人民共和国海关总署发 布 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 SN/T 52192019 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。
2、 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳海关。 本标准主要起草人：吴凤琪、赵琼晖、陈波、吴卫东、靳保辉、张建莹、金晓蕾、梁淑雯。 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 1 SN/T 52192019 出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定 液相色谱 - 质谱 / 质谱法 1 范围 本标准规定了出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸的制样和液相色谱 - 质谱 / 质谱测定方法。 本标准适用于大白菜、菠菜、西红柿、芥蓝、苹果、香蕉、火龙果、梨、大米、小麦、猪肉、 牛肉、鸡肉、虾、鲫鱼等食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定和确证。 2 规范性引用文件 下
3、列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要 试样中的氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸用酸化乙腈提取后，利用改进的 QuEChERS（150 mg C 18 、 900 mg Na 2 SO 4 ）试剂，对提取液进行净化处理后，采用液相色谱串联质谱仪进行定性定量分析，外 标法定量。 4 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3
4、 甲酸。 4.4 正己烷。 4.5 无水硫酸镁。 4.6 C 18 粉末。 4.7 氯化钠。 4.8 乙酸铵。 4.9 无水硫酸钠。 4.10 氨氯吡啶酸（Picloram，C 6 H 3 C l3 N 2 O 2 ，CAS No ：1918-02-1）：纯度大于或等于 99.0。 4.11 氯氨吡啶酸（Aminopyralid，C 6 H 4 Cl 2 N 2 O 2 ， CAS No ：150114-71-9）：纯度大于或等于 99.0。 4.12 标准储备溶液：分别准确称取 10 mg 氨氯吡啶酸（4.10）、氯氨吡啶酸（4.11），用甲醇（4.2） 溶解，定容至 10 mL，避光 -1
5、8 保存，保存期为 6 个月。 4.13 混合标准使用液：分别移取 100 nullL 各物质标准储备溶液（4.12），加空白基质提取液定容至 10 mL， 避光 -18 保存，保存期为 1 个月。 4.14 微孔滤膜：0.22 nullm，有机系。 以正式出版文本为准 2 SN/T 52192019 5 仪器与设备 5.1 液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2 分析天平：感量分别为 0.1 mg 和 0.01 g。 5.3 均质器。 5.4 高速离心机：转速不低于 9 500 r/min。 5.5 氮吹仪。 5.6 涡旋混合器。 5.7 组织捣碎机。 6 试样制备与保存
6、6.1 试样制备 取有代表性样品 500 g，用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装入洁净的盛样容器内，密封 并标明标记。 6.2 试样保存 试样于 -18 以下冷冻保存。 在制样和保存的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 6.3 提取 6.3.1 水果、蔬菜类样品 称取试样 10.0 g，精确至 0.01 g，置于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 1% 甲酸乙腈，9 500 r/min 均 质 5 min，再加入 4g 无水硫酸美（4.5）、1g 氯化钠（4.7），涡旋振荡 10 min，9 500 r/min 离心 5 min。 6.3.2 粮谷类样品 称取试样
7、 5.0 g，精确至 0.01 g，置于 50 mL 离心管中，加入 3 mL 水，涡旋浸润样品后，加入 10 mL 1 % 甲酸乙腈，9 500 r/min 均质 5 min，再加入 4g 无水硫酸美（4.5）、1g 氯化钠（4.7），涡旋振 荡 10 min，9 500 r/min 离心 5 min。 6.3.3 肉类样品 称取试样 2.0 g，精确至 0.01 g，置于 50 mL 离心管中，加入 2 mL 5 mmoL/L 的乙酸铵缓冲液，涡 旋浸润样品后，加入 10 mL 5 % 甲酸乙腈和 5 mL 乙腈饱和的正己烷，9 500 r/min 均质 5 min，再加入 4g MgSO
8、 4 、1g NaCl，涡旋振荡 10 min，9 500 r/min 离心 5 min。 6.4 净化 6.4.1 水果、蔬菜类样品 取 6 mL 上清液，加入预先加有 150 mg C 18 粉末（4.6）、900 mg 无水硫酸钠（4.9）的 15 mL 离 心管中，涡旋振荡 3 min，9 500 r/min 离心 5 min。移取 1 mL 上清液于 15 mL 离心管中，氮吹近干， 用 10 % 甲醇水溶液定容至 1 mL，涡旋混合，过 0.22 nullm 微孔滤膜（4.14），供液相色谱串联质谱仪测定。 以正式出版文本为准 3 SN/T 52192019 6.4.2 粮谷类样品
9、 取 6 mL 上清液，加入预先加有 150 mg C 18 粉末（4.6）、900 mg 无水硫酸钠（4.9）的 15 mL 离 心管中，涡旋振荡 3 min，9 500 r/min 离心 5 min。移取 2 mL 上清液于 15 mL 离心管中，氮吹近干，用 10 % 甲醇水溶液定容至 1 mL，涡旋混合，过 0.22 nullm 微孔滤膜（4.14），供液相色谱串联质谱仪测定。 6.4.3 肉类样品 取 6 mL 上清液，加入预先加有 150 mg C 18 粉末（4.6）、900 mg 无水硫酸钠（4.9）的 15 mL 离 心管中，涡旋振荡 3 min，9 500 r/min 离心
10、 5 min。移取 5 mL 上清液于 15 mL 离心管中，氮吹近干， 用 10 % 甲醇水溶液定容至 1 mL，加入 2 mL 乙腈饱和的正己烷，涡旋混合，9 500 r/min 离心 5 min， 过 0.22 nullm 微孔滤膜（4.14），供液相色谱串联质谱仪测定。 7 测定 7.1 液相色谱 / 质谱条件 7.1.1 色谱柱：Eclipse Plus C 18 色谱柱， 50 mm2.1 mm（内径），粒径 1.8 nullm 或性能相当者。 7.1.2 柱温：30 。 7.1.3 进样量：5 nullL。 7.1.4 流动相：A 为 0.2 % 甲酸，2 mmoL/L 乙酸铵水
11、溶液，B 为甲醇（4.2）。 7.1.5 流速：0.3 mL/min。 7.1.6 梯度：参见附录 A 表 A.1。 7.1.7 质谱条件：参见附录 A 表 A.2。 7.2 液相色谱 / 质谱检测 在仪器最佳工作条件下，对基质标准校准溶液进样，以被测物峰面积为纵坐标，基质校准溶液 为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，待测样液中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶 酸的响应值均应在仪器检测的线性范围内，上述色谱和质谱条件下，标准物质多反应监测质量色谱图 参见附录 B。 7.3 液相色谱 / 质谱定性 如果样液与标准工作溶液的质量色谱图中，在相同保留时间有色谱峰出现，允许偏差小于 2.5
12、%， 所选择离子的丰度比与标准品对应离子的丰度比，其值在允许范围内（允许范围见表 1），则可判断 样品中存在相应的被测物。在 7.1 条件下，氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸的液相色谱 - 质谱多反应监测相 对离子丰度的最大允许偏差见表 2。 表 1 定性液相色谱 - 质谱时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 / % 50 2050 1020 10 允许的相对偏差 / % 20 25 30 50 以正式出版文本为准 4 SN/T 52192019 a 表 2 氨氯吡啶酸及氯氨吡啶酸的监测离子对和定量离子对 1） 序号 化合物名称 参考保留时间/ min 母离子 / （m/z） 子离子 / （m/z
13、） 碰撞能量（CE）/eV 1 氯氨吡啶酸 1.74 208.9 190.9 a 20 208.9 162.9 30 2 氨氯吡啶酸 2.87 242.9 224.8 a 20 242.9 196.7 30 注： 对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。 a 为定量离子。 7.4 空白试验 除不加试样外，均按上述测定条件和操作步骤进行。 8 结果计算和表述 用色谱数据处理软件中的外标法或按式（1）计算试样中药物的残留量： 1000 1000 = m Vc X （1） 式中： X试样中待测组分的含量，单位为微克每千克（ nullg/kg）； c 从基质标准曲线上得到
14、的样液中分析物的含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）； V样品定容体积，单位为毫升（mL）； m样品称样量，单位为克（g）。 9 测定低限、回收率 9.1 测定低限 本方法对大白菜、菠菜、西红柿、芥蓝、苹果、香蕉、火龙果、梨、大米、小麦、猪肉、虾、 牛肉、鸡肉、鲫鱼等食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定低限均为 0.010 mg/kg。 9.2 回收率 在添加浓度水平分别为10 nullg/kg、20 nullg/kg及100 nullg/kg时，大白菜、菠菜、西红柿、芥蓝、苹果、 香蕉、火龙果、梨、大米、小麦、猪肉、虾、牛肉、鸡肉、鲫鱼等食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸的 回收率数据见表 3
15、。 1）非商业性声明：表 2 及附录 A 所列参考质谱条件是在 AB 4500 型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪 器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。 以正式出版文本为准 5 SN/T 52192019 样品基质 化合物 添加水平 / （ nullg/kg） 回收率范围 / % 相对标准偏差（RSD） / % 大白菜 氨氯吡啶酸 10 75.190.2 7.1 20 78.383.4 2.0 100 73.784.7 4.8 氯氨吡啶酸 10 74.387.2 5.6 20 75.184.5 4.7 100 79.585.9 2.8 菠菜 氨氯吡
16、啶酸 10 71.290.4 9.7 20 71.086.1 6.8 100 73.282.8 5.2 氯氨吡啶酸 10 74.186.2 5.5 20 71.580.6 5.1 100 70.285.4 8.2 西红柿 氨氯吡啶酸 10 63.480.1 9.0 20 77.397.2 7.2 100 62.184.3 9.8 氯氨吡啶酸 10 65.282.3 8.9 20 80.096.1 7.2 100 74.386.7 5.7 芥蓝 氨氯吡啶酸 10 67.290.3 11.4 20 72.483.7 6.7 100 76.785.2 3.7 氯氨吡啶酸 10 105.1110.5
17、3.3 20 106.7118.6 3.7 100 79.585.5 3.1 苹果 氨氯吡啶酸 10 65.489.2 9.3 20 66.491.5 10.2 100 75.090.6 6.5 氯氨吡啶酸 10 69.184.4 8.0 20 69.290.0 9.9 100 77.090.2 6.4 表 3 不同样品基质中氨氯吡啶酸及氯氨吡啶酸加标回收率 以正式出版文本为准 6 SN/T 52192019 表 3（续） 样品基质 化合物 添加水平 / （ nullg/kg） 回收率范围 / % 相对标准偏差（RSD） / % 香蕉 氨氯吡啶酸 10 64.184.2 10.3 20 69.
18、281.4 5.0 100 71.587.0 5.9 氯氨吡啶酸 10 67.884.8 8.0 20 83.698.8 6.6 100 88.094.2 2.7 火龙果 氨氯吡啶酸 10 65.379.2 8.3 20 67.282.5 7.1 100 77.094.1 7.2 氯氨吡啶酸 10 70.884.9 7.8 20 72.082.0 5.9 100 98.6108.8 4.2 梨 氨氯吡啶酸 10 63.185.2 11.8 20 65.278.6 6.3 100 72.987.4 7.3 氯氨吡啶酸 10 73.086.5 7.2 20 67.076.1 4.9 100 90.
19、1104.5 6.6 大米 氨氯吡啶酸 10 95.2110.7 6.1 20 93.4109.0 5.6 100 100.7109.4 2.7 氯氨吡啶酸 10 91.8110.7 8.9 20 81.690.3 3.6 100 87.690.3 1.4 小麦 氨氯吡啶酸 10 81.596.4 6.0 20 98.9114.9 6.0 100 104.1114.2 3.0 氯氨吡啶酸 10 73.588.4 6.3 20 90.0107.6 7.8 100 87.293.9 2.8 以正式出版文本为准 7 SN/T 52192019 表 3（续） 样品基质 化合物 添加水平 / （ nul
20、lg/kg） 回收率范围 / % 相对标准偏差（RSD） / % 猪肉 氨氯吡啶酸 10 56.665.4 5.4 20 59.664.8 3.0 100 79.585.8 3.0 氯氨吡啶酸 10 79.689.2 4.7 20 77.482.6 2.5 100 77.784.2 2.9 虾 氨氯吡啶酸 10 60.774.9 7.1 20 66.072.6 3.5 100 70.877.4 3.2 氯氨吡啶酸 10 90.0104.8 6.6 20 79.187.6 3.5 100 75.077.1 1.0 牛肉 氨氯吡啶酸 10 83.690.4 2.9 20 79.786.5 2.6
21、氯氨吡啶酸 100 78.085.8 3.3 10 80.490.7 5.0 20 76.482.4 2.6 100 69.471.0 0.9 鸡肉 氨氯吡啶酸 10 83.4114.8 12.6 20 81.386.4 2.2 100 73.678.6 2.3 氯氨吡啶酸 10 71.684.4 5.9 20 73.877.5 2.2 100 64.971.4 3.8 鲫鱼 氨氯吡啶酸 10 105.7119.8 5.2 20 92.9109.6 5.7 100 74.177.4 1.6 氯氨吡啶酸 10 76.886.0 4.0 20 75.483.0 3.3 100 68.272.3 2
22、.0 以正式出版文本为准 8 SN/T 52192019 附 录 A （资料性附录） 液相色谱梯度洗脱及质谱条件 表 A.1 液相色谱梯度洗脱条件 时间 /min A/% B/% 0 90 10 4 30 70 4.1 10 90 7 10 90 7.1 90 10 10 90 10 表 A.2 质谱条件 极性 正 气帘气压力 25 psi 离子化电压 5 500 V 气体温度 550 喷雾气压力 55 psi 辅助加热气压力 55 psi 碰撞气 Medium 扫描模式 MRM 以正式出版文本为准 9 SN/T 52192019 附 录 B （资料性附录） 标准物质多反应监测质量色谱图 图
23、B.1 氯氨吡啶酸和氨氯吡啶酸（100 g/kg）多反应监测质量色谱图 以正式出版文本为准 SN / T 52192019 SN/T 5219 2019 中华人民共和国出入境检验检疫 开本 8801230 1/16 印张 1 字数 20 千字 2019 年 月第一版 2019 年 月第一次印刷 印数 1500 书号：15517559 定价 18.00 元 出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸 残留量的测定 液相色谱 - 质谱 / 质谱法 行 业 标 准 SN/T 52192019 * * * 北京市朝阳区东四环南路甲 1 号（100023） 编辑部：（010）65194242-7509 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 中国海关出版社有限公司出版发行 网址
