1、以正式出版文本为准 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5221 2019 出口植物源食品中氯虫苯甲酰胺 残留量的测定 Determination of Chlorantraniliprole residue in foodstuffs of plant origin for export 2019-12-27 发布 2020-07-01 实施 ICS 67.050 C 53 中华人民共和国海关总署发 布 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 SN/T 5221 2019 I 前 言 本标准按照 GB / T 1.12009 给出的规则进行起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专
2、利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国厦门海关技术中心、中华人民共和国福建海关技术中心。 本标准主要起草人：徐敦明、魏一婷、张云、丁琳、钟莉萍、张志刚、曾三妹、赖国银。 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 1 SN/T 5221 2019 出口植物源食品中氯虫苯甲酰胺残留量的测定 1 范围 本标准第一法规定了出口植物源性食品中烯虫酯残留量的气相色谱 - 质谱测定方法。第二法规 定了粮谷中烯虫酯的残留量的液相色谱测定方法。 本标准适用于桃子、梨子、黄瓜、土豆、茄子、苹果、木瓜、青椒、生菜、大米等植物源食品 中
3、氯虫苯甲酰胺残留量的测定和确证。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB / T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 第一法 液相色谱 - 质谱 / 质谱法 3 方法提要 采用乙腈提取试样中残留的氯虫苯甲酰胺，提取液经 NH 2 氨基固相萃取柱净化，以 C 18 柱分离待 测物，采用电喷雾离子化，正离子扫描和多反应监测模式（MRM）检测，外标法定量。 4 试剂和材料 除特殊说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。
4、4.1 乙腈（CH 3 CN）：色谱级。 4.2 甲醇（CH 3 OH）：色谱级。 4.3 甲酸（HCOOH）：色谱级。 4.4 无水硫酸镁（MgSO 4 ）。 4.5 氯化钠（NaCl）。 4.6 无水硫酸镁和氯化钠混合粉末（1 : 1）：分别称取 50 g 无水硫酸镁、50 g 氯化钠粉末于烧杯中混 合均匀，现配现用。 4.7 0.1 % 甲酸水溶液：准确吸取 1mL 甲酸（4.3）于 1000 mL 容量瓶中，加水定容至刻度线，混匀 备用。 4.8 标准物质：氯虫苯甲酰胺（CAS 号 500008-45-7），纯度大于 99 %。 4.9 标准储备溶液：准确称取适量的氯虫苯甲酰胺标准物质
5、（4.8），用甲醇（4.2）配制成浓度为 100 mg/L 的标准储备溶液，于 -18以下避光保存。 4.10 中间标准溶液：吸取适量上述标准储备液（4.9），用乙腈（4.1）稀释配制成 1.0 g/mL 的中间 标准溶液，于 4以下避光保存。 4.11 标准工作溶液：吸取适量的中间标准液（4.10），用空白样品溶液配制成适当浓度的标准工作 溶液，现配现用。 以正式出版文本为准 2 SN/T 5221 2019 4.12 氨基固相萃取柱：6 mL，1 g 或相当者，使用前用 6 mL 乙腈（4.1）活化，保持柱体湿润。 4.13 微孔滤膜：0.22 mm，有机相型。 5 仪器与设备 5.1 液
6、相色谱串联四极杆质谱仪：配电喷雾正离子源（ESI + ）。 5.2 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。 5.3 涡旋混合器。 5.4 均质器。 5.5 离心机：转速大于 3 000 r/min。 5.6 氮吹浓缩仪。 5.7 离心管：50 mL 聚四氟乙烯离心管。 5.8 固相萃取装置。 6 样品制备与保存 在制样过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。 6.1 蔬菜和水果等含水量高的样品 取代表性样品部分约 500 g，将其可食部分先切碎，经搅拌机充分捣碎均匀，试样均分为两份， 装入洁净容器，密封，并标明标记，于 -18以下冷冻存放。 6.2 大米类含水量低的样品 取代表
7、性样品部分约 500 g，用粉碎机充分粉碎，混匀。试样均分为两份，装入洁净容器，密封， 并标明标记，常温下保存。 7 分析步骤 7.1 样品提取 7.1.1 水果蔬菜等含水量高的样品 称取 5 g（精确至 0.01 g）均匀试样于 50 mL 离心管中，加入 15 mL 乙腈（4.1），然后加入 4 g 氯化 钠和无水硫酸镁混合粉末（4.6），使水溶液达到饱和，高速均质提取 1 min，于 3 000 r / min 离心 2 min， 将乙腈层转移至 25 mL 带刻度玻璃试管中，残渣再用 10 mL 乙腈（4.1）重复提取一次，合并提取液。 45下氮吹至接近 2 mL，待净化。 7.1.2
8、 大米类含水量低的样品 称取 5 g（精确至 0.01 g）均匀试样于 50 mL 离心管中，加入 6 mL 水，涡旋 2 min，再加入 15 mL 乙腈（4.1），然后加入 4 g 氯化钠和无水硫酸镁混合粉末（4.6），使水溶液达到饱和，高速均质提取 1 min，于 3 000 r/min 离心 2 min，将乙腈层转移至 25 mL 带刻度玻璃试管中，残渣再用 10 mL 乙腈 （4.1）重复提取一次，合并提取液。45下氮吹至接近 2 mL，待净化。 7.2 净化 将提取液（7.1）转入氨基固相萃取柱（4.12）中，以约 1d / s 的流速使样液全部通过固相萃取柱， 以正式出版文本为准
9、 3 SN/T 5221 2019 再用 8 mL 乙腈（4.1）洗脱并抽干固相萃取柱，收集全部流出液于 15 mL 玻璃试管中，45下氮吹至 近干，残渣用乙腈（4.1）定容至 1.0 mL。涡旋混匀后，过微孔滤膜（4.13），供液相色谱 - 质谱 / 质 谱仪测定。 7.3 测定 7.3.1 液相色谱条件 7.3.1.1 色谱柱：Phenomenex Kinetex C 18 柱（50 mm2.1 mm,2.6 mm,100 A），或相当者。 7.3.1.2 柱温：35。 7.3.1.3 流速：400 mL/min。 7.3.1.4 进样量：0.5 mL。 7.3.1.5 流动相及梯度洗脱条
10、件见表 1。 表 1 流动相、流速及梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /（mL /min） 0.1% 甲酸 - 水溶液 /% 乙腈 /% 0.00 400 95.0 5.0 0.10 400 20.0 80.0 3.00 400 20.0 80.0 3.10 400 95.0 5.0 7.00 400 95.0 5.0 7.3.2 质谱条件 7.3.2.1 离子化模式：电喷雾离子源。 7.3.2.2 扫描方式：正离子扫描。 7.3.2.3 检测方式：多反应监测（MRM）。 其他参考质谱条件参见附录 A。 7.3.3 液相色谱质谱 / 质谱仪测定 7.3.3.1 定量测定 在仪器最佳工作条件下
11、，对标准工作溶液进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液浓度为横坐标绘 制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的 线性范围内。在上述仪器条件下，氯虫苯甲酰胺的参考保留时间为 3.04 min ；标准溶液的多反应监测 （MRM）色谱图参见附录 B 中图 B.1。 7.3.3.2 定性测定 按照上述测定样品和标准溶液，样品中待测物质的保留时间与基质标准溶液的保留时间偏差在 2.5 % 之内；定性离子对的相对丰度与浓度相当的基质标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行 比较，相对丰度偏差不超过表 2 规定的范围，则可判定为样品中存在相应的待测物。 以正式出版文本为
12、准 4 SN/T 5221 2019 表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 / % 50 2050 1020 10 允许的相对偏差 / % 20 25 30 50 7.3.4 空白试验 除不加试样处，均按上述测定条件和步骤进行。 8 结果计算与表述 按式（1）计算试样中氯虫苯甲酰胺的残留量： 1000 1000)( 0 = m Vcc X （1） 式中： X 试样中氯虫苯甲酰胺残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； c 从标准工作曲线所得的氯虫苯甲酰胺浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； c 0 空白试验所得氯虫苯甲酰胺浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； V 样液
13、最终定容体积，单位为毫升（mL）； m 最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。 注：计算结果应扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。 9 方法定量限与回收率 9.1 定量限 本方法的定量限为 0.005 mg/kg。 9.2 回收率 采用本方法对桃子、梨子、黄瓜、土豆、茄子、苹果、木瓜、青椒、生菜、大米 10 种植物源食 品基质进行添加回收实验，氯虫苯甲酰胺的添加水平和回收率数据参见附录 C 中表 C.1。 第二法 液相色谱法 10 方法提要 采用乙腈（4.1）提取试样中残留的氯虫苯甲酰胺，提取液经氨基固相萃取柱（4.12）净化，以 C 18 柱分离待测物，供配有
14、二级管阵列检测器或紫外检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。 11 试剂和材料 除特殊说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 以正式出版文本为准 5 SN/T 5221 2019 11.1 乙腈（CH 3 CN）：（同 4.1）。 11.2 甲醇（CH 3 OH）：（同 4.2）。 11.3 甲酸（HCOOH）：（同 4.3）。 11.4 无水硫酸镁（MgSO 4 ）。 11.5 氯化钠（NaCl）。 11.6 无水硫酸镁和氯化钠混合粉末：（同 4.6） 。 11.7 标准物质：（同 4.8）。 11.8 标准储备溶液：（同 4.9）。 11.9 中间标准溶
15、液：（同 4.10）。 11.10 标准工作溶液：吸取适量的中间标准溶液（11.9），用乙腈（4.1）配制成适当浓度的标准工作 溶液，现配现用。 11.11 氨基固相萃取柱：（同 4.12）。 11.12 微孔滤膜：（同 4.13）。 12 仪器与设备 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。其他仪器和设备的要求与第 5 章一致。 13 样品制备与保存 试样的制备与保存同第 6 章。 14 分析步骤 14.1 样品提取 样品提取步骤同 7.1。 14.2 净化 样品净化步骤同 7.2，供高效液相色谱仪测定。 14.3 液相色谱测定 14.3.1 液相色谱参考条件 14.3.1.1 色
16、谱柱：C 18 柱，250 mm( 柱长） 4.6 mm( 内径），粒度 5 m，或相当者。 14.3.1.2 流动相：水 ： 乙腈 = 30 ： 70。 14.3.1.3 流速：0.8 mL/min，15 min。 14.3.1.4 柱温：35。 14.3.1.5 进样量：20 L。 14.3.1.6 检测波长：265 nm。 14.3.2 测定 在仪器最佳工作条件下，对标准工作溶液进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液浓度为横坐标绘 制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线 以正式出版文本为准 6 SN/T 5221 2019 性范围内。在上述仪器
17、条件下，氯虫苯甲酰胺的参考保留时间为 6.6 min，标准物质的色谱图参见附 录 D 中图 D.1。 14.3.3 空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。 15 计算 按式（2）计算样品中氯虫苯甲酰胺的含量： 1000 1000)( 0 = m Vcc X （2） 式中： X 试样中氯虫苯甲酰胺残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； c 从标准工作曲线所得的氯虫苯甲酰胺浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； c 0 空白试验所得氯虫苯甲酰胺浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； m 最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。 注：计算结果应扣
18、除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。 16 方法定量限和回收率 16.1 定量限 本方法的定量限为 0.05 mg/kg。 16.2 回收率 采用本方法对桃子、梨子、黄瓜、土豆、茄子、苹果、木瓜、青椒、生菜、大米 10 种植物源食 品基质进行添加回收实验，氯虫苯甲酰胺的添加水平和回收率数据参见附录 C 中表 C.2。 以正式出版文本为准 7 SN/T 5221 2019 附录A （资料性附录） 参考质谱条件 A.1 离子化模式：ESI + ； A.2 质谱扫描方式：多反应监测（MRM）； A.3 电喷雾电压：5 500 V ； A.4 离子源温度：550 ； A.5
19、 碰撞气体：氮气； A.6 气帘气压力：20 psi ； A.7 喷雾气压力：40 psi ； A.8 辅助加热气压力：40 psi ； A.9 其他质谱参数见表 A.1。 表 A.1 氯虫苯甲酰胺的质谱参数 化合物 母离子 子离子 CE/eV DP/ V 氯虫苯甲酰胺 484.1 453.0 a 23.92 60286.0 19.64 176.8 64.53 注：CE，碰撞能量；DP，去簇电压。 a 为定量离子。 以正式出版文本为准 8 SN/T 5221 2019 附录B （资料性附录） 氯虫苯甲酰胺标准溶液多反应监测（MRM）色谱图 a） 氯虫苯甲酰胺总离子流图 b） 提取色谱图（484
20、.1453.0） c） 提取色谱图（484.1286.0） d）提取色谱图（484.1176.8） B.1 0.005 g/mL 氯虫苯甲酰胺标准溶液多反应监测（MRM）色谱图 t/min t/min t/min t/min 以正式出版文本为准 9 SN/T 5221 2019 附录C （资料性附录） 添加回收率数据 表 C.1 液相色谱质谱 / 质谱法测定氯虫苯甲酰胺回收率结果（ n=6） 基质 添加浓度 / （mg/kg） 回收率 / % 基质 添加浓度 /（mg/kg） 回收率 / % 桃子 0.005 75.891.2 苹果 0.005 75.290.2 0.01 83.5104 0.
21、01 81.293.6 0.02 86.596.0 0.02 82.598.0 0.1 84.999.4 0.1 81.597.3 10 84.3102 10 85.498.1 20 83.098.5 20 84.094.5 梨子 0.005 90.6102 大米 0.005 76.494.6 0.01 86.2110 0.01 72.490.2 0.02 86.293.5 0.02 76.584.5 0.1 84.697.4 0.1 81.297.4 10 80.496.2 10 84.697.2 20 81.097.5 20 82.594.0 黄瓜 0.005 77.887.0 木瓜 0.
22、005 82.4100 0.01 86.893.6 0.01 79.894.6 0.02 80.594.5 0.02 86.597.5 0.1 81.694.6 0.1 80.691.6 10 81.695.6 10 81.697.8 20 85.094.5 20 83.594.5 土豆 0.005 93.0103 青椒 0.005 92.6105 0.01 83.4110 0.01 78.692.8 0.02 84.594.0 0.02 82.594.0 0.1 86.497.8 0.1 81.497.6 10 84.095.4 10 83.798.6 20 81.094.5 20 82.0
23、101 茄子 0.005 77.493.6 生菜 0.005 82.297.8 0.01 83.498.7 0.01 85.2106 0.02 77.597.5 0.02 81.0101 0.1 83.494.0 0.1 81.495.3 10 82.197.6 10 84.296.3 20 86.596.0 20 83.095.5 以正式出版文本为准 10 SN/T 5221 2019 表 C.2 液相色谱法测定氯虫苯甲酰胺回收率结果（ n=6） 基质 添加浓度 / (mg/kg） 回收率 / % 基质 添加浓度 /（mg/kg） 回收率 / % 桃子 0.05 83.6102 苹果 0.0
24、5 86.4110 0.1 87.2104 0.1 81.6102 1 81.495.1 1 86.497.2 10 82.397.5 10 84.696.4 20 84.598.5 20 82.594.0 梨子 0.05 86.2110 大米 0.05 74.298.4 0.1 89.5103 0.1 81.189.0 1 80.897.6 1 81.089.6 10 84.197.5 10 83.794.2 20 84.0104 20 80.093.0 黄瓜 0.05 86.4109 木瓜 0.05 83.4110 0.1 80.8103 0.1 86.497.5 1 86.394.6 1
25、 91.6109 10 86.795.6 10 86.4105 20 86.095.5 20 82.096.5 土豆 0.05 89.797.6 青椒 0.05 93.6103 0.1 81.2104 0.1 86.498.2 1 85.199.9 1 85.997.3 10 83.495.4 10 86.298.1 20 81.097.0 20 88.095.5 茄子 0.05 85.4105 生菜 0.05 96.2101 0.1 80.997.6 0.1 84.1106 1 85.093.8 1 83.695.3 10 87.797.8 10 86.1105 20 80.596.0 20
26、 88.5102 以正式出版文本为准 11 SN/T 5221 2019 附录D （资料性附录） 氯虫苯甲酰胺液相色谱图 图 D.1 氯虫苯甲酰胺液相色谱图（0.5 g/mL） 以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫 中国海关出版社有限公司出版发行 北京市朝阳区东四环南路甲 1 号（100023） 编辑部：（010）65194242-7509 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 开本 8801230 1/16 印张 1 字数 28 千字 2020 年 3 月第一版 2020 年 3 月第一次印刷 印数 1500 书号：155175149 定价 18.00 元 出口植物源食品中氯虫苯甲酰胺 残留量的测定 行 业 标 准 SN/T 52212019 SN/T 52212019 * * * 网址 SN/T 5221 2019
