1、以正式出版文本为准 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5184 2020 禽副伤寒检疫技术规范 Quarantine protocol for avian paratyphoid 2020-12-30 发布 2021-07-01 实施 ICS 10.040.65 CCS B 41 中华人民共和国海关总署发 布 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 SN/T 51842020 I 前 言 本文件按照 GB / T 1.12 009 给出的规则编制。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：中华人民共和国长春海关。 本文件主要起草人：孟日增、刘韬、孟庆峰、石建平
2、、冯博、王宁、曲辉。 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 SN/T 51842020 1 禽副伤寒检疫技术规范 1 范围 本文件规定了禽副伤寒的临床诊断、病理学诊断、病原分离与鉴定技术、玻片凝集试验和聚合 酶链式反应（PCR 法）。 本文件适用于进出境活鸡或散养鸡禽副伤寒现场诊断与实验室诊断。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB / T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室 生物安全通
3、用要求 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 生物安全措施 样品采集、样品处理及检验过程所涉及的实验操作和防护要求应符合 GB 19489 的规定。 5 诊断技术 5.1 临床诊断 雏鸡副伤寒以急性败血型为主，往往孵出后不久很快死亡，看不到明显症状，10 d 左右的雏鸡 发病后，精神委顿，怕冷，头和翅膀下垂，羽毛松乱，喜欢拥挤在温暖的地方，食欲废绝，烦渴， 下痢，排出水样稀粪，肛门周围常被稀粪沾污。有的发生眼炎、失明，有的表现为呼吸困难。常在 1 d2 d 内死亡，死亡率 10%80%。 成年鸡感染后多不表现症状，成为慢性带菌者，肠道带菌的时间长达 916 个月。成年鸡感染后
4、厌食、下痢、脱水、全身衰弱、翅膀下垂和羽毛松乱，死亡率约 10%，大部分能在短期康复。 5.2 病理学诊断 剖检时， 最急性的往往病变不显著，仅见肝脏淤血肿大，胆囊扩张，充满胆汁。病程稍长的病鸡 死后显现消瘦、失水、卵黄凝固的症状。肝脏、脾脏发生淤血、有出血条纹或针尖大灰白色坏死点。 肾脏淤血。有心包炎，心包液增多， 含有纤维素性渗出物。小肠有出血性炎症， 尤以十二指肠最严重， 盲肠扩张，肠腔中有时有淡黄或白色干酪样物质堵塞。10 日龄以内幼雏常有肺炎病变。 以正式出版文本为准 SN/T 51842020 2 5.3 病原分离与鉴定 5.3.1 试剂与材料 5.3.1.1 非选择性增菌液：缓冲
5、蛋白胨水（BP），见 A.1。 5.3.1.2 选择性增菌液：亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）、四硫磺酸钠煌绿增菌培养基（TTB）、RVS 大 豆蛋白胨增菌液（Rappaport-Vassiliadis soya peptone broth），见 A.2A.4。 5.3.1.3 非选择性琼脂平板：血琼脂平板，营养琼脂平板，见 A.5A.6。 5.3.1.4 选择性琼脂平板：亚硫酸铋琼脂（BS）、胆硫乳琼脂（DHL）、HE 琼脂（Hektoen Enteric Agar）、木糖赖氨酸去氧胆酸盐琼脂（XLD）、沙门氏菌显色培养基，见 A.7A.11。 5.3.1.5 生化鉴定试剂：三糖铁琼脂、赖氨酸脱
6、羧酶培养基、鸟氨酸脱羧酶培养基、尿素酶培养基、 半固体琼脂、糖发酵管、微量生化管、生化鉴定试剂盒或试剂条，见 A.12A17。 5.3.1.6 诊断血清：A-F 多价 O 血清，O9 因子血清，O12 因子血清，H-a 因子血清，H-d 因子血清， H-g. m 因子血清和 H-g. p 因子血清。 5.3.1.7 蒸馏水：用于配制培养基和试剂的蒸馏水需符合 GB / T 6682 二级水的要求。 5.3.2 设备与器材 5.3.2.1 生物安全柜。 5.3.2.2 全自动微生物鉴定系统。 5.3.2.3 恒温培养箱：25 1 ，30 1 ，35 1 。 5.3.2.4 恒温水浴锅：46 1
7、。 5.3.2.5 均质器或灭菌乳钵。 5.3.2.6 显微镜：10100。 5.3.2.7 接种环、接种针。 5.3.2.8 锥形烧瓶。 5.3.2.9 灭菌试管：18 mm180 mm。 5.3.2.10 灭菌吸管：10 mL（刻度精度 0.1 mL）和 1 mL（刻度精度 0.01 mL）。 5.3.2.11 灭菌量筒： 容量 100 mL 和 250 mL。 5.3.2.12 灭菌培养皿：直径 90 mm100 mm。 5.3.2.13 可调微量移液器或移液管：10 L200 L，50 L1 000 L 及吸头。 5.3.3 病料采集与分离 5.3.3.1 泄殖腔和新鲜粪便拭子 将拭子
8、直接划线接种于选择性培养基平板上后，将平板置于 36 1 培养 24 h，挑取可疑菌落 进行鉴定；同时将划线后的棉拭子置于选择性增菌液中，培养 24 h 和 48 h，转种于选择性琼脂平板 上。琼脂平板经 24 h 培养，直接挑取可疑菌落进行鉴定。 5.3.3.2 胆囊内容物 将胆囊内容物拭子划线于非选择性和选择性琼脂平板上。同时，将拭子分别置于非选择性和选择 性增菌液中，培养 24 h 和 48 h，再划线转种于选择性琼脂平板上。 5.3.3.3 组织器官 将无菌采自个体的病变组织拭子或组织匀浆直接划线接种于非选择性和选择性琼脂平板上。之 后，将划过线的拭子或剩余组织匀浆分别置于非选择性和选
9、择性增菌液中，36 1 培养 24 h 和 以正式出版文本为准 SN/T 51842020 3 48 h，再划线转种于选择性琼脂平板上。 5.3.3.4 带菌鸡 对于带菌鸡的确诊需要大量的样品材料。分离鸡白痢沙门氏菌宜用卵和输卵管，分离鸡伤寒沙 门氏菌宜用肝脏和胆囊，也可用卵和输卵管。好的分离效果宜从各种组织包括脾脏中采取样品。用少 量肉汤将组织制成匀浆，直接划线于选择性和非选择性琼脂平板上，同时，各取 10 mL 分别接种到 90 mL 非选择性肉汤如缓冲蛋白胨水和 90 mL 选择性肉汤如 SC 中，于 36 1 培养 24 h，再划线 转种于选择性琼脂平板上。 5.3.3.5 消化道包括
10、盲肠扁桃体和肠内容物 在 1 ：10 研磨或匀浆后，各取 10 mL 分别加入到 90 mLSC 和 90 mL TTB 选择性增菌肉汤中，分 别置 36 1 和 42 1 培养 24 h 和 48 h，再划线转种于选择性琼脂平板上。 5.3.3.6 蛋壳 各取 10 g 碎蛋壳，分别加入到 90 mL SC 和 90 mL TTB 选择性增菌肉汤中，分别置于 36 1 和 41 1 培养 24 h 和 48 h，再划线转种于选择性琼脂平板上。 5.3.3.7 蛋内容物 无菌采取新鲜鸡蛋的内容物 25 g，加入 225 mL 缓冲蛋白胨水或营养肉汤搅拌匀浆，置 36 1 培养 24 h 和 4
11、8 h，再划线转种于选择性琼脂平板上。孵过的蛋，不管是否受精或含有小胚胎，都可 作类似处理。 5.3.3.8 鸡胚 将鸡胚制成匀浆，直接划线接种于非选择性和选择性琼脂平板上。同时，分别取 1 g 组织匀浆接 种于 9 mL 非选择性增菌肉汤如缓冲蛋白胨水和选择性增菌肉汤如 SC 中，于 36 1 培养 24 h 和 48 h，再划线转种于非选择性和选择性琼脂平板上。 5.3.3.9 垫料等环境样品 包括粘附在孵化器的绒毛、蛋壳碎片或小鸡排泄物样品、出雏盒垫料、地板上粪便或垃圾样品 等。取 25 g 样品分别加入到 225 mL SC 和 225 mL TTB 中，混合均匀，分别置于 36 1
12、和 42 1 培养 24 h 和 48 h，再划线转种于选择性琼脂平板上。 5.3.4 病原生化鉴定 先用接种针在平板上挑取 5 个典型或可疑菌落分别接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再穿刺底 层；接种针无需灭菌，直接接种赖氨酸脱羧酶培养基或尿素酶培养基和营养琼脂平板。于 36 1 培养 24 h 2 h。必要时可延长至 48 h 3 h。沙门氏菌在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶培养基或尿素酶培 养基的反应分别见表 1 和表 2。 以正式出版文本为准 SN/T 51842020 4 表1 沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶培养基内的反应结果 三糖铁琼脂 赖氨酸脱羧酶培养基 初步判断 斜面 底层 产气
13、硫化氢 K A +（-） +（-） + 可疑沙门氏菌属 K A +（-） +（-） - 可疑沙门氏菌属 A A +（-） +（-） + 可疑沙门氏菌属 A A + / - + / - - 非沙门氏菌 K K + / - + / - + / - 非沙门氏菌 注： K ：产碱；A ：产酸；+ ：阳性；- ：阴性；+（-）：多数阳性，少数阴性；+ / - ：阳性或阴性。 表 2 沙门氏菌属在三糖铁琼脂和尿素酶培养基内的反应结果 三糖铁琼脂 尿素酶培养基 初步判断 斜面 底层 产气 硫化氢 K A +（-） +（-） - 可疑沙门氏菌属 A A +（-） +（-） - 可疑沙门氏菌属 K A +（-）
14、 +（-） + 非沙门氏菌 A A +（-） +（-） + 非沙门氏菌 K K + / - + / - + / - 非沙门氏菌 注： K ：产碱；A ：产酸；+ ：阳性；- ：阴性；+（-）：多数阳性，少数阴性；+ / - ：阳性或阴性。 符合可疑沙门氏菌属的培养物采用全自动生化鉴定系统或接种于添加有葡萄糖、甘露醇、麦芽 糖、山梨醇、乳糖、蔗糖、杨苷、侧金盏醇、 NAD 的脲酶、氧化酶、吲哚、枸椽酸盐、硝酸盐还原 酶等的细菌微量生化鉴定管，置 37 培养 48 h，按细菌微量生化鉴定管说明书判定。 葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、山梨醇发酵并产气；乳糖、蔗糖、杨苷、侧金盏醇不发酵；脲酶试 验、氧化酶试
15、验、吲哚试验均为阴性； V-P 试验为阴性； M.R 试验为阳性；并且接触酶、枸椽酸盐、 硝酸盐还原试验均为阳性者符合副伤寒沙门氏菌生化反应结果，需进一步进行血清学鉴定。 5.3.5 血清学鉴定 5.3.5.1 在洁净的玻片上划出 2 个 1 cm2 cm 的区域，挑取一环待鉴定菌，各放 1 / 2 环于玻片上的 每一个区域上部，在其中一个区域下部加 1 滴沙门氏菌的 A-F 群“O”多价血清，在另一个区域下部 加 1 滴生理盐水作为对照。用无菌的接种环或针分别将两个区域的菌落研成乳状液。轻轻摇动玻片 1 min2 min，在黑色背景下观察。如对照出现凝集，即判断菌株自凝，不能进行血清分型；如
16、对照 不凝集，则试验区域的任何凝集现象均判为阳性反应。 5.3.5.2 如果培养物与 O1、O2、O4、O5、O6、O7、O12 因子血清呈阳性反应，与 H-a、H-b、H-c 因子血清呈阳性反应，则可判为禽副伤寒沙门氏菌。 5.4 玻片凝集试验 5.4.1 材料准备 5.4.1.1 禽副伤寒多价染色平板抗原、强阳性血清（500 IU / mL）、弱阳性血清（10 IU / mL）、阴性 以正式出版文本为准 SN/T 51842020 5 血清。 5.4.1.2 玻璃板、吸管、金属丝环（内径 7. 5 mm8.0 mm）、反应盒、酒精灯、针头、消毒盘和酒精 棉等。 5.4.2 操作 在 20
17、25 环境条件下，用定量滴管或吸管吸取抗原，垂直滴于玻璃板上 1 滴（相当于 0.05 mL），然后用针头刺破鸡的翅静脉或冠尖取血 0.05 mL（相当于内径 7.5 mm 8.0 mm 金属丝环 的两满环血液），与抗原充分混合均匀，并使其散开至直径为 2 cm，轻轻摇动玻璃板，计时判定结 果，同时设强阳性血清、弱阳性血清、阴性血清对照。 5.4.3 结果判定 5.4.3.1 凝集反应判定标准如下： 100 % 凝集（ #）：紫色凝集块大而明显，混合液稍浑浊； 75 % 凝集（ + + +）：紫色凝集块较明显，但混合液有轻度浑浊； 50 % 凝集 （ + +）： 出现明显的紫色凝集颗粒，但混合
18、液较为浑浊； 25% 凝集 （ +）：仅出现少量的细小颗粒，而混合液浑浊； 不凝集（ -）：无凝集颗粒出现，混合液浑浊。 5.4.3.2 在 2 min 内，抗原与强阳性血清应呈 100% 凝集（#），弱阳性血清应呈 50% 凝集（+ +），阴 性血清不凝集（-），判试验有效。 5.4.3.3 在 2 min 内，被检全血与抗原出现 50%（+ +）以上凝集者为阳性，不发生凝集则为阴性， 介于两者之间为可疑反应，将可疑鸡隔离饲养 1 个月后，再作检疫，若仍为可疑反应，按阳性反应 判定。 5.5 聚合酶链式反应 （ PCR） 5.5.1 试剂和材料 5.5.1.1 对照品：副伤寒沙门氏菌标准菌株
19、 DNA 提取物作为阳性对照，水作为阴性对照。 5.5.1.2 Pre-mix 2 倍预混液：包含 rTaq 酶、 PCR 缓冲液、 Mg 2+ 、 dCTP、 dGTP、 dATP、 dTTP 等。 5.5.1.3 PCR 引物：上游引物 P1 为 5-TAA CCG CAG CAA TTG ACG TTA CC-3，下游引物 P2 为 5-TCT CTA CGC ATT TCA CCG CTA CA -3。 5.5.1.4 器材和设备： PCR 扩增仪、离心机、电泳仪、凝胶成像分析仪、微量移液器用吸头、普通冰 箱、低温冰箱、组织匀浆器或研磨器、灭菌离心管、吸头等。 5.5.2 PCR 样品
20、准备 5.5.2.1 组织病料 采集待检病死鸡的病料约 1 g，剪碎后加 5 mL 水匀浆成糊状，煮沸 10 min，10 000 r / min 高速离 心 5 min，取上清液 -20 保存备用。 5.5.2.2 培养物 分离纯化的菌株用接种环刮取 2 个菌落洗脱于含 100 L 无菌水的离心管，煮沸 10 min，10 000 r / min 高速离心 5 min，取上清液 -20 保存备用。 5.5.3 DNA 模板的制备 采用商品化 DNA 提取试剂盒抽提 DNA 模板，操作按说明书进行。 以正式出版文本为准 SN/T 51842020 6 5.5.4 PCR 反应体系 2Pre-m
21、ix 预混液 12.5 L，引物 P1（20 pmol / L）1.0 L，引物 P2（20 pmol / L）1.0 L，模 板 2 L，加 ddH 2 O 至总体积 25 L。 5.5.5 PCR 反应条件 94 5 min，94 30 s，56 30 s，72 45 s，30 个循环；72 10 min。 5.5.6 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳 制备 1 % 琼脂糖凝胶，内加适量溴化乙锭或其替代物，取 PCR 产物 10 L 20 L 分别与适量 加样缓冲液混合后，加入到样品孔，9 V / cm 恒压下电泳 15 min 30 min。将电泳好的凝胶放到紫外 投射仪或凝胶成像系统上观察结
22、果。 5.5.7 结果判定 5.5.7.1 阳性对照扩增到 240 bp 条带，同时阴性对照未扩增到条带时，试验成立。 5.5.7.2 在试验结果成立的前提下，如果样品扩增到 240 bp 条带，可确认为可疑培养物或分离纯化 的菌株副伤寒沙门氏菌核酸阳性。 以正式出版文本为准 SN/T 51842020 7 附录A （ 规范性 ） 培养基的制备 A.1 缓冲蛋白胨水（BP） 蛋白胨 10.0 g 氯化钠 5.0 g 磷酸氢二钠（含 12 个结晶水） 9.0 g 磷酸二氢钾 1.5 g 蒸馏水 1 000 mL 将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，煮沸溶解，调节 pH 为 7.20.2，分装后 12
23、1 高压灭菌 15 min。 A.2 亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC） 蛋白胨 5.0 g 乳糖 4.0 g 磷酸氢二钠 10.0 g 亚硒酸氢钠 4.0 g L- 胱氨酸 0.01 g 蒸馏水 1 000 mL 除亚硒酸氢钠和 L- 胱氨酸外，将各成分加入蒸馏水中，搅拌均匀，静置约 10 min，煮沸溶解， 冷至 55 以下，以无菌操作加入亚硒酸氢钠和 1 g / L 的 L- 胱氨酸溶液 10 mL（称取 0.1 g L- 胱氨酸， 加 1 mol / L 氢氧化钠溶液 15 mL，使之溶解，再加灭菌蒸馏水至 100 mL 即成，如为 DL- 胱氨酸，用 量应加倍）。摇匀，调节 pH 为 7.
24、00.2。 A.3 四硫磺酸钠煌绿增菌培养基（TTB） A.3.1 基础液 蛋白胨 10.0 g 牛肉膏 5.0 g 氯化钠 3.0 g 碳酸钙 45.0 g 蒸馏水 1 000 mL 除碳酸钙外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，再加入碳酸钙，调节 pH 为 7.00.2，121 高压灭菌 20 min。 A.3.2 硫代硫酸钠溶液 硫代硫酸钠（含 5 个结晶水） 50.0 g 蒸馏水 100 mL 121 高压灭菌 20 min 以正式出版文本为准 SN/T 51842020 8 A.3.3 碘溶液 碘片 20.0 g 碘化钾 25.0 g 蒸馏水 100 mL 将碘化钾充分溶解于少量的蒸馏
25、水中，再投入碘片，振摇玻璃瓶至碘片全部溶解为止，然后加 蒸馏水至规定的总量，贮存于棕色瓶内，塞紧瓶盖备用。 A.3.40.5煌绿水溶液 煌绿 0.5 g 蒸馏水 100 mL 溶解后，存放暗处，不少于 1 d，使其自然灭菌。 A.3.5 牛胆盐溶液 牛胆盐 10.0 g 蒸馏水 100 mL 加热煮沸至完全溶解，121 高压灭菌 20 min。 A.3.6 制法 基础液 900 mL 硫代硫酸钠溶液 100 mL 碘溶液 20.0 mL 煌绿水溶液 2.0 mL 牛胆盐溶液 50.0 mL 临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另 一种成分。 A.4R
26、VS 大豆蛋白胨增菌液 A.4.1 溶液 A 酶消化大豆蛋白 5.0 g 氯化钠 8.0 g 磷酸二氢钾（KH 2 PO 4 2 H 2 O） 1.4 g 磷酸氢二钾（K 2 HPO 4 2 H 2 O） 0.2 g 蒸馏水 1 000 mL 将各种成分加入蒸馏水中，加热至 70 溶解，该溶液应当在制备完全培养基的当天配制。 A.4.2 溶液 B 氯化镁（MgCl 2 6 H 2 O） 400 g 蒸馏水 1 000 mL 将氯化镁溶于水中。 以正式出版文本为准 SN/T 51842020 9 A.4.3 溶液 C 孔雀绿 0.4 g 蒸馏水 100 mL 将孔雀绿溶于水中。溶液可室温保存于棕
27、色玻璃瓶中，至少可保存 8 个月。 A.4.4 完全培养基 溶液 A 1 000 mL 溶液 B 100 mL 溶液 C 10 mL 按上述比例配制完全溶液，调节 pH 为 5.20.2。分装试管，115 高压灭菌 15 min。 A.5 营养琼脂 蛋白胨 10.0 g 牛肉膏 3.0 g 氯化钠 5.0 g 琼脂 18.0 g20.0 g 蒸馏水 1 000 mL 将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，煮沸溶解，调节 pH 为 7.20.2，121 高压灭菌 15 min。 待培养基冷却至 45 再倒板。 A.6 血琼脂平板 将A.5高压灭菌好的营养琼脂冷却至50 ，按5%10%加入无菌采集的新鲜
28、脱纤维兔血或羊血， 混匀后立即倾注平板。 A.7 亚硫酸铋琼脂（BS） 蛋白胨 10.0 g 牛肉膏 5.0 g 葡萄糖 5.0 g 硫酸亚铁 0.3 g 磷酸氢二钠 4.0 g 0.5% 煌绿 5.0 mL 柠檬酸铋铵 2.0 g 亚硫酸钠 6.0 g 琼脂 18.0 g20.0 g 蒸馏水 1 000 mL 将前 3 种成分加入 300 mL 蒸馏水（制作基础液）中，将硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入 20 mL 和 30 mL 蒸馏水，将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入 20 mL 和 30 mL 蒸馏水中，将琼脂加入 600 mL 蒸馏水中。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。冷至 80 左右时，先将
29、硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀，倒 入基础液中，混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混匀。调节 pH 为 7.50.2， 随即倾入琼脂液中，混合均匀，冷至 50 55 。加入 0.5% 煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿。 以正式出版文本为准 SN/T 51842020 10 A.8 胆硫乳琼脂（DHL） 蛋白胨 20.0 g 牛肉膏 3.0 g 乳糖 10.0 g 蔗糖 10.0 g 去氧胆酸钠 1.0 g 硫代硫酸钠 2.3 g 柠檬酸钠 1.0 g 柠檬酸铁铵 1.0 g 中性红 0.03 g 琼脂 18.0 g20.0 g 蒸馏水 1 000 mL 将除中性红和琼脂以外的成分溶解
30、于 400 mL 蒸馏水中，调节 pH 为 7.50.2。琼脂加入 600 mL 蒸馏水中，煮沸溶解，两液合并，加入 0.5% 中性红溶液 6 mL，待冷却至 50 55 倾注平皿。 A.9HE 琼脂 蛋白胨 12.0 g 牛肉膏 3.0 g 乳糖 12.0 g 蔗糖 12.0 g 水杨素 2 .0 g 胆盐 20.0 g 氯化钠 5.0 g 琼脂 18.0 g20.0 g 蒸馏水 1 000 mL 0.4溴麝香草酚蓝溶液 16.0 mL Andrade 指示剂 20.0 mL 甲液 20.0 mL 乙液 20.0 mL 将前面 7 种成分溶解于 400 mL 蒸馏水内作为基础液，将琼脂加入
31、600 mL 蒸馏水内。然后分别搅 拌均匀，煮沸溶解。将甲液和乙液加入基础液内，调节 pH 为 7.50.2。再加入指示剂，并与琼脂液 合并，待冷至 50 55 倾注平皿。 注： 本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性。 甲液的配制 硫代硫酸钠 34.0 g 柠檬酸铁铵 4.0 g 蒸馏水 100 mL 乙液的配制 去氧胆酸钠 10.0 g 蒸馏水 100 mL Andrade 指示剂 以正式出版文本为准 SN/T 51842020 11 酸性复红 0.5 g 1 mol / L 氢氧化钠溶液 16.0 mL 蒸馏水 100 mL 将酸性复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧
32、化钠溶液。数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液 1 mL2 mL。 A.10 木糖赖氨酸去氧胆盐琼脂（XLD） 酵母膏 3.0 g L- 赖氨酸 5.0 g 木糖 3.75 g 乳糖 7.5 g 蔗糖 7.5 g 去氧胆酸钠 2.5 g 柠檬酸铁铵 0.8 g 硫代硫酸钠 6.8 g 氯化钠 5.0 g 琼脂 15.0 g 酚红 0.08 g 蒸馏水 1 000 mL 除酚红和琼脂外，将其他成分加入 400 mL 蒸馏水中，煮沸溶解，调节 pH 为 7.40.2。另将琼脂加 入 600 mL 蒸馏水中，煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后，再加入酚红指示剂，待冷至 50 55 时倾注平皿。 注
33、： 本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于室温暗处。本培养基宜于 当天制备，第二天使用。 A.11 沙门氏菌显色培养基 按使用说明称取干粉培养基，加适量蒸馏水，加热溶解后，待冷至 50 55 时倾注平皿。 A.12 三糖铁琼脂（TSI） 蛋白胨 20.0 g 牛肉膏 5.0 g 乳糖 10.0 g 蔗糖 10.0 g 葡萄糖 1.0 g 硫酸亚铁铵（含 6 个结晶水） 0.2 g 酚红 0.025 g 或 5.0 g / L 溶液 5.0 mL 氯化钠 5.0 g 硫代硫酸钠 0.2 g 琼脂 12.0 g 蒸馏水 1 000 mL 除酚红和琼脂外，将其他成分
34、加入 400 mL 蒸馏水中，煮沸溶解，调节 pH 为 7.40.2。另将琼脂 加入 600 mL 蒸馏水中，煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后，再加入指示剂，混匀，分装试管，每 以正式出版文本为准 SN/T 51842020 12 管约3 mL4 mL，121 高压灭菌10 min 或115 高压灭菌15 min，灭菌后置成高层斜面，呈桔红色。 A.13 赖氨酸脱羧酶培养基 蛋白胨 5.0 g 酵母浸膏 3.0 g 葡萄糖 1.0 g 蒸馏水 1 000 mL 1.6溴甲酚紫 - 乙醇溶液 1.0 mL L- 赖氨酸或 DL- 赖氨酸 0.5 g / 100 mL 或 1.0 g / 100
35、mL 除赖氨酸以外的成分加热溶解后，分装，每瓶 100 mL，分别加入赖氨酸。L- 赖氨酸按 0.5加 入，DL- 赖氨酸按 1加入。调节 pH 为 6.80.2。对照培养基不加赖氨酸。分装于无菌的小试管内， 每管 0.5 mL，上面滴加一层液体石蜡，115 高压灭菌 10 min。 A.14 鸟氨酸脱羧酶培养基 蛋白胨 5.0 g 酵母浸膏 3.0 g 葡萄糖 1.0 g 蒸馏水 1 000 mL 1.6溴甲酚紫 - 乙醇溶液 1.0 mL L- 鸟氨酸或 DL- 鸟氨酸 0.5 g / 100 mL 或 1.0 g / 100 mL 除赖氨酸以外的成分加热溶解后，分装，每瓶100 mL，分
36、别加入赖氨酸。L-鸟氨酸按0.5加入， DL- 鸟氨酸按 1加入。调节 pH 为 6.80.2。对照培养基不加鸟氨酸。分装于无菌的小试管内，每 管 0.5 mL，上面滴加一层液体石蜡，115 高压灭菌 10 min。 A.15 尿素酶培养基 蛋白胨 1.0 g 氯化钠 5.0 g 葡萄糖 1.0 g 磷酸二氢钾 2.0 g 0.4酚红 3.0 mL 琼脂 20.0 g 蒸馏水 1 000 mL 20尿素溶液 100 mL 除尿素、琼脂和酚红外，将其他成分加入 400 mL 蒸馏水中，煮沸溶解，调节 pH 为 7.20.2。另 将琼脂加入 600 mL 蒸馏水中，煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀，
37、再加入指示剂后分装，121 高 压灭菌 15 min。冷至 50 55 时加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为 2。分装于无 菌试管内，放成斜面备用。 A.16 半固体琼脂 牛肉膏 0.3 g 以正式出版文本为准 SN/T 51842020 13 蛋白胨 1.0 g 氯化钠 0.5 g 琼脂 0.35 g0.4 g 蒸馏水 100 mL 按以上成分配好，煮沸溶解，调节 pH 为 7.40.2，分装于小试管中。121 高压灭菌 15 min。 直立凝固，备用。 A.17 糖发酵管 牛肉膏 5.0 g 蛋白胨 10.0 g 氯化钠 3.0 g 磷酸氢二钠（含 12 个结晶水） 2.0 g 0
38、.2溴麝香草酚蓝溶液 12.0 mL 蒸馏水 1 000 mL 按上述成分配好后，调节 pH 为 7.40.2。按 0.5加入各种糖，分装于试管。如配制葡萄糖发酵 管，需于试管内倒置一小管， 112 高压灭菌 15 min。 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 中华人民共和国出入境检验检疫 开本 8801230 1/16 印张 1.25 字数 28 千字 2021 年 1 月第一版 2021 年 1 月第一次印刷 印数 1500 书号：155175129 定价 22.00 元 禽副伤寒检疫技术规范 行 业 标 准 SN/T 51842020 * * * SN/T 5184 2020 北京市朝阳区东四环南路甲 1 号（100023） 编辑部：（010）65194242-7509 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 中国海关出版社有限公司出版发行 网址
