1、 ICS 03.120 CCS C 04 DB4403 深 圳 市 地 方 标 准 DB4403/T 125 2020 DNA 档案制作技术规范 Technical regulation for the production of DNA profile 2020-11-23 发布 2020-12-01 实施 深圳市市场监督管理局 发布 DB4403/T 125 2020 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 缩略语 . 2 5 主要仪器和试剂 . 2 6 DNA 档案位点 . 2 7 制作流程 . 2 附录 A（资料性） 推荐
2、DNA 档案位点 . 5 附录 B（ 资料性） DNA 档案知情同意书示例 . 8 附录 C（资料性） DNA 报告模板 . 10 DB4403/T 125 2020 II 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 2020标准化工作导则 第 1部分：标准化文件的结构和起草规则的 规定 起 草。 本 文件 由深圳市发展和改革委员会提出和归口。 本 文件 起草单位： 深圳华大法医科技有限公司、深圳华大基因股份有限公司、深圳华大基因科技 有 限公司。 本 文件 主要 起草人： 李栋、沈悦生、李博文、王秋娟、侯月兰、陈拓、郭小森、叶明芝、 吴昊、 姜 华艳、王洪琦、尹烨。 DB4403/T 125 20
3、20 1 DNA 档案 制作 技术规范 1 范围 本 文件 规定了 DNA 档案制作的 主要仪器和试剂 、 DNA 档案位点 、 制作流程等内容 。 本 文件 适用于 深圳市 公共安全领域中的人类 DNA 档案制作。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 37223 2018 亲权鉴定技术规范 GB/T 37226 2018 法庭科学人类荧光标记 STR 复合扩增检测试剂质量基本要求 GA/T 383 2014 法
4、庭科学 DNA 实验室检验规范 SF/Z JD0105002 2014 生物学全同胞关系鉴定实施规范 3 术语 和定义 下列术语和定义适用于本 文件 。 3.1 DNA 档案 DNA profile 专业人员通过采集人体血液、毛囊、指甲、唾液、 口腔上皮粘膜 等含有 DNA 的样本， 通过人类荧光标 记 STR 复合扩增技术，基于互联网云平台将相关个体的 DNA 基因分型原始数据存储于 数据库中 的一种身 份识别形式。 3.2 直接扩增 direct amplification 无需提取样本（血卡、血纸、毛囊、口腔脱落细胞等）的 DNA，直接进行 PCR扩增的方法 ， 简称直扩 。 3.3 短
5、串联重复序列 short tandem repeat 存在于人类基因组 DNA 中的一类具有长度多态性的 DNA 序列，其核心序列一般由 2 6个碱基构成，由 于核心序列重复次数不同致个体间存在差异。 3.4 基因座 locus 基因在染色体上占有 的 特定位置，也称为“基因位点”或“位点” 。 一条染色体上含有许多基因座 。 DB4403/T 125 2020 2 注： 基因座 英文的复数为 loci。 3.5 引物混合物 primer mix 一定数量的标记和未标记荧光的寡核苷酸引物按一定浓度比例混合而成的溶液。 3.6 等位基因分型标准物 allelic ladder 所有位点常见等位基
6、因的混合物，用其来定义待检样本的分型。 3.7 分子量内标 internal lane size standard 一系列已知分子量大小、标定特定荧光的 DNA 片段混合物，用于计算同一泳道内的 DNA 片段分子量大 小 ， 也称内标 。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DNA： 脱氧核糖核酸（ Deoxyribonucleic Acid） PCR： 聚合酶链式反应（ Polymerase Chain Reaction） STR： 短串联重复序列 （ Short Tandem Repeat） 5 主要仪器和试剂 要求 5.1 主要仪器 要求 DNA 档案制作所需的仪器 应至少包括 ：移液
7、器、 扩增 仪、 旋涡 混匀仪、小型离心机、遗传分析仪 。仪器 应符合 GA/T 383 2014 的要求 。 5.2 DNA 分型试剂 要求 DNA 分型试剂 应 符合 GB/T 37226 2018 的要求 或获取 GA 认证证书，兼容 DNA数据库建设的位点。 6 DNA 档案位点 DNA 档案位点应符合 GB/T 37223 2018、 SF/Z JD0105002 2014 中 对 STR 位点及 STR数据库信息 的要 求 ，推荐 DNA 档案位点信息见 附录 A。 7 制作流程 DNA 档案制作分 7 个步骤，具体流程见图 1。 DB4403/T 125 2020 3 图 1 D
8、NA档案制作流程图 7.1 签署知情同意书 知情同意书的签署符合以下要求： a) 知情同意书 应含有 DNA 档案的基本功能、预期目的、技术方法、风险性和必要性， DNA 档案知 情同意书范本见附录 B； b) 本人、监护人或委托人理解并同意知情内容，签署知情同意书； c) 核实委托人身份信息并登记，本人签署知情同意书，可 参考附录 B； d) 填写采样卡、样本袋上有关个人信息（身份证号、联系方式等个人信息必填） 。 7.2 样本采集 7.2.1 概述 DNA档案常用人的血痕、口腔拭子等，但样本不限于此，理论上只要含有 DNA均可作为样本。样本间 单独包装，不能互相接触 ， 以免造成污染 。另
9、重复采集多个样本，分别用于检验、储存和核验 。 7.2.2 血痕样本 DNA档案中常用的血痕样本的采集过程如下： a) 准备专用采血卡、医用纱布、采血滤纸、医用棉签、采血针、样本袋，并在样本袋上标明姓名、 身份证号等信息； b) 用酒精消毒手指、耳垂或足跟等采血部位，用采血针扎破，挤出血滴； c) 依次挤出 2 3 滴黄豆大小的血滴，依次散开摁在对应样本载体上，自然阴干后放入对应的样 本袋中； d) 将血痕自然阴干，不 应使 用吹风机吹干、暖气烘干或太阳晒干；不同的样本不能互相接触，以 免造成样本污染。为避免感染或其他意外，采样前必须清洁双手，采血针单人单用，采样后注 意止血消毒 ； e) 记
10、录 采样人和被采样人的确认程序。 7.2.3 口腔拭子样本 DNA档案中常用的口腔拭子样本的采集过程如下： a) 用清水漱口，保证口腔内无食物残渣； b) 用医用棉签，伸进口腔，在口腔内侧两颊处反复擦拭 至少 15 次 （不时旋转棉签）； c) 取出棉签，将棉签放在干净处自然阴干； d) 将阴干的 棉签放入对应的样本袋中，在样本袋上标明样本信息 ； e) 记录 采样人和被采样人的确认程序。 7.3 PCR 扩增 7.3.1 试剂准备 分型试剂包括 PCR 反应液、引物混合物、等位基因分型标准物、分子量内标、阳性对照、分子级水、 试剂说明书等。取出试剂， 室温 融化，振荡混匀，短暂离心备用。 D
11、B4403/T 125 2020 4 7.3.2 检材准备 首先应 在不损伤检材的前提下， 对检材上的明显污垢、灰尘等杂质进行清洁，再 根据 样本类型的 不 同使用 对应的工具，如 打孔器、手术剪等 取 适量检材直接放入 PCR 扩增管中备用。 7.3.3 PCR 扩增 PCR扩增应在符合 GA/T 383 2014要求的实验室中进行，其具体步 骤如下： a) 将完全融化后的 PCR 反应液和引物混合物漩涡震荡，短暂离心后使用； b) PCR 反应体系及 PCR 扩增程序按照试剂盒说明书操作； c) 扩增产物应该避光保存在 温度 低于 4 的 条件下，以防荧光淬灭以及 DNA 片段降解。 7.
12、4 电泳检测 PCR扩增产物的 毛细管 电泳检测 应在符合 遗传分析仪 制造商要求的环境中进行，其 步骤如下： a) 预热遗传分析仪，使炉温至 60 ； b) 根据不同型号及试剂本身特点设置分析仪染料组合、上样电压、上样时间等参数； c) 电泳体系按照对应试剂盒说明书操作； d) 初次使用新试剂 应 对仪器进行光谱校正。 7.5 DNA 分型 对 遗传分析仪 产生的原始数据进行 DNA分型的步骤如下： a) 使用 与检测仪器 配套 的 软件进行 DNA 分型，如为初次使用 应 导入对应试剂盒提供的 Panel， bins， Analysis method，以及内标片段长度； b) 导入遗传分析
13、仪 产生的原始 数据，对 DNA 进行分型。 7.6 DNA 档案数据储存 DNA档案数据储存符合以下要求： a) DNA 档案 应 包含姓名、样本编号、身份证号码（如有）、 DNA 档案生成日期及 DNA 分型信息 等 内容 ， 示例 见附录 C； b) DNA 档案 信息化 数据 应 存储于有安全性保障的数据库或存储于拥有不少于 3072 个字节内存的 芯片卡，以 便发放给本人使用。 7.7 DNA 分型数据查询 可选择以下三种方式之一，用于 DNA档案结果告知 ： a) 纸质报告； b) 电子报告； c) 建设专门网站，登录查询 。 DB4403/T 125 2020 5 A 附 录 A
14、 （资料性） 推荐 DNA 档案位点 A.1 常染色体 STR 位点 DNA档案推荐使用的常染色体 STR位点见表 A.1。 表 A.1 常染色体 STR位点 序号 染色体 位点 序号 染色体 位点 1 chr1 D1S1656 18 chr10 D10S1435 2 chr2 D2S1338 19 chr11 D11S2368 3 chr2 D2S441 20 chr11 TH01 4 chr2 TPOX 21 chr12 D12S391 5 chr3 D3S1358 22 chr12 vWA 6 chr3 D3S3045 23 chr13 D13S317 7 chr4 FGA 24 chr
15、13 D13S325 8 chr5 D5S818 25 chr16 D16S539 9 chr5 CSF1PO 26 chr15 D15S659 10 chr6 D6S0143 27 chr16 Penta E 11 chr6 D6S477 28 chr18 D18S51 12 chr6 SE33 29 chr18 D18S1364 13 chr6 D6S1043 30 chr19 D19S253 14 chr7 D7S820 31 chr19 D19S433 15 chr8 D8S1179 32 chr21 D21S11 16 chr8 D8S1132 33 chr21 Penta D 17
16、 chr10 D10S1248 34 chr22 D22S1045 DB4403/T 125 2020 6 A.2 Y STR位点 DNA档案推荐使用的 Y STR位点见 表 A.2。 表 A.2 Y STR位点 序号 位点 序号 位点 序号 位点 1 DYS19(=DYS394) 21 DYS458 41 DYS587 2 DYS385a 22 DYS459a 42 DYS593 3 DYS385b 23 DYS459b 43 DYS596 4 DYS388 24 DYS460 44 DYS617 5 DYS389I 25 DYS481 45 DYS622 6 DYS389II 26 DYS
17、508 46 DYS626 7 DYS390 27 DYS510 47 DYS627 8 DYS391 28 DYS518 48 DYS630 9 DYS392 * 29 DYS520 49 DYS635 10 DYS393 * 30 DYS522 50 DYS643 11 DYS437* 31 DYS527a(=DYS401a) 51 DYS645 12 DYS438 * 32 DYS527b(=DYS401b) 52 DYS713 13 DYS439 * 33 DYS531 53 DYS387S1a 14 DYS443 34 DYS533 54 DYS387S1b 15 DYS444 35
18、 DYS549 55 DYS404S1a 16 DYS446 36 DYS552 56 DYS406S1b 17 DYS447 37 DYS557 57 Y GATA A10 18 DYS448 38 DYS413b 58 Y GATA H4 19 DYS449 39 DYS570 59 Y indel 20 DYS456 40 DYS576 60 Amelogenin * DB4403/T 125 2020 7 A.3 X STR 位点 DNA档案推荐使用的 X STR位点见表 A.3。 表 A.3 X STR位点 序号 位点 序号 位点 1 DXS101 19 DXS9902 2 DXS9
19、81 20 DXS10074 3 DXS6789 21 DXS10075 4 DXS6795 22 DXS10079 5 DXS6800 23 DXS10101 6 DXS6803 24 DXS10103 7 DXS6807 25 DXS10134 8 DXS6809 26 DXS10135 9 DXS6810 27 DXS10146 10 DXS7132 28 DXS10148 11 DXS7133 29 DXS10159 12 DXS7423 30 DXS10162 13 DXS7424 31 DXS10164 14 DXS8377 32 HPRTB 15 DXS8378 33 GATA1
20、65B12 16 DXS9895 34 GATA172D05 17 DXS9898 35 GATA31E08 18 DXS9907 36 Amelogenin DB4403/T 125 2020 8 附 录 B （资料性） DNA 档案知情同意书 示例 DNA档案知情同意书 示例 见图 B.1和图 B.2。 DNA 档案知情同意书 第一部分 DNA 档案须知 1. DNA 档案是通过采集含 DNA 的生物样本，由有资质的检测机构，采用 荧光标记 STR 复合扩增技术 和毛细管电泳分型技术 获得 STR 分型 ，将分型电子数据保存到国家基因库的一种身份识别的形式 。 2. 该 DNA 档案利用
21、DNA 序列中的遗传标记，可以辅助个人身份识别和个体 DNA 特征，且此类遗传标记保持终身不变 且具有个 体特异性 。 3. DNA 档案内容仅针对非编码区的中立 DNA 信息，不含功能基因。 4. DNA 档案结果报告属于专家提供的专业性意见，其是否被采信取决于相关机构的审查和判断，检测机构无权干涉。 5. 本检测的 DNA 样本，如果由于取样不当、标签条码脱落或模糊不清，运输不当（如样本管破裂）、样本混淆、污染、寄送 延误超时以及不可抗力因素所致样品耗损或难以辨识，可能影响本次检测结果或导致本次检测无法进行， 应 进行再次样本采 集。 6. DNA 分型结果报告仅说明个体特征，不得用于任何
22、其他 商业 用途 。 用于司法 裁判 目的人类基因组分型程序，必须采用司法 检验程序。结果仅对样本负责，检测机构不承担连带责任。 7. 如受检者中途反悔退出本检测，本检测中所有涉及受检者的信息及剩余样本将被销毁，不再退回。 8. 检测机构将保障受检者在样本检测中数据的存 储安全。 9. 报告查询，请登录 XXXXXX。 图 B.1 DNA 档案知情同意书示例 第一部分 DB4403/T 125 2020 9 第二部分 信息确认 与签名 1. 我已充分了解 DNA 档案的性质、合理的预期目的、风险性和必要性，并已知晓知情同意书的相关内容，经本人及家属慎重 考虑，我愿意进行基因分型检测，并承担因检
23、测带来的相关风险。 2. 我知道此报告结果属于专家提供的专业性意见，其是否被采信取决于相关机构的审查和判断，检测机构无权干涉。我已知 晓上述检测失败或未达预期目的等可能情形。 3. 对检测结果有疑问，可咨询检测机构。 4. 我承诺提供的相关信息真实可靠，并授权检 验人员及检测机构对检测涉及的生物样本 等 医疗废弃物进行处理。我同意授权 检测机构在不透露本人 隐私 信息的前提下，将检测所获取的实验数据用于检测技术改进、科学成果的数据积累。 5. 如检测中途退出，本检测中与我相关的所有信息及剩余样本将被销毁，不再退回。 受检者或其监护人签名： _ 与受检者关系： _ 签名日期： _年 _月 _日 采样人签名： _ 签名日期： _年 _月 _日 图 B.2 DNA 档案知情同意书 示例 第 二 部分 DB4403/T 125 2020 10 附 录 C （资料性） DNA 报告 模板 表 C.1给出了 DNA报告模板。 表 C.1 DNA 报告模板 DNA档案 一、基本信息 姓名 性别 身份证号码 样本编号 样本类型 DNA档案编号 采样日期 存储路径 报告日期 二、档案信息 染色体名称 位点名称 位点分型信息 检测人 审核人 _
