1、ICS 11.220B 41 DB1303秦 皇 岛 市 地 方 标 准DB1303/T 286 2020猪 传 染 性 胸 膜 肺 炎 防 治 技 术 规 程 2020- 11-25发 布 2020 -11- 28实 施秦 皇 岛 市 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB13/T XXXXXXXX I 前 言本 文 件 按 照 GB/T 1.1 2020 标 准 化 工 作 导 则 第 1部 分 ： 标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定起 草 。本 文 件 由 河 北 科 技 师 范 学 院 提 出 。本 文 件 由 秦 皇 岛 市 农 业 农 村 局 归 口
2、。本 文 件 起 草 单 位 ： 河 北 科 技 师 范 学 院 。本 文 件 主 要 起 草 人 ： 芮 萍 、 张 珍 珍 ， 关 景 林 ， 宋 涛 、 叶 云 鹏 、 严 世 杰 、 焦 桂 华 、 马 增 军 、 刘 谢 荣 。 DB13/T XXXXXXXX 1 猪 传 染 性 胸 膜 肺 炎 防 治 技 术 规 程1 范 围本 文 件 规 定 了 猪 传 染 性 胸 膜 肺 炎 的 术 语 和 定 义 、 诊 断 和 防 治 措 施 。本 文 件 适 用 于 秦 皇 岛 地 区 生 猪 饲 养 场 （ 户 ） 和 动 物 诊 疗 单 位 对 猪 传 染 性 胸 膜 肺 炎 的 诊
3、 断 和 防 治 。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款 。 其 中 ， 注 日 期 的 引 用 文 件 ，仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件 ； 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本文 件 。 GB/T 17824.2-2008 规 模 猪 场 生 产 技 术 规 程NY/T 537-2002 猪 放 线 杆 菌 胸 膜 肺 炎 诊 断 技 术NY 5030-2006 无 公
4、害 食 品 生 猪 饲 养 兽 药 使 用 准 则NY 5031-2001 无 公 害 食 品 生 猪 饲 养 兽 医 防 疫 准 则SN/T 1447-2011 猪 传 染 性 胸 膜 肺 炎 检 疫 技 术 规 范 中 华 人 民 共 和 国 兽 药 典 兽 药 质 量 标 准 （ 不 建 议 引 用 ， 若 引 用 ， 建 议 写 全 名 称 及 版 本 ）3 术 语 和 定 义本 文 件 没 有 需 要 界 定 的 术 语 和 定 义 。4 诊 断 病 原 胸 膜 肺 炎 放 线 杆 菌 为 巴 氏 杆 菌 科 放 线 杆 菌 属 ， 革 兰 氏 阴 性 小 球 杆 菌 ， 有 荚 膜
5、 和 鞭 毛 。 根 据 荚 膜 多 糖和 LPS的 抗 原 性 差 异 ， 目 前 将 APP分 为 15个 血 清 型 ， 其 中 血 清 1型 和 5型 又 分 为 1a、 1b及 5a、 5b两 个 亚 型 。根 据 对 辅 酶 （ NAD） 的 依 赖 性 ， 又 分 为 生 物 型 和 型 ， 型 依 赖 NAD， 包 括 1 12及 15型 ， 型 不 依赖 NAD， 包 括 13、 14型 。 其 中 血 清 1、 5、 9和 11型 的 毒 力 最 强 ， 3和 6型 毒 力 低 。流 行 特 点4.2.1 发 病 日 龄各 种 年 龄 猪 均 易 感 ， 其 中 6周 龄
6、至 6月 龄 的 猪 较 多 发 ， 但 以 3月 龄 仔 猪 最 为 易 感 。4.2.2 发 病 季 节一 年 四 季 均 可 发 生 ， 但 夏 末 秋 初 或 冬 末 春 初 时 较 易 发 生 。 DB13/T XXXXXXXX 2 4.2.3 传 染 源病 猪 和 亚 临 床 感 染 带 菌 猪 。4.2.4 传 播 途 径传 播 途 径 主 要 包 括 ： 直 接 接 触 或 短 距 离 的 飞 沫 传 播 ； 远 距 离 可 通 过 污 染 的 工 具 和 饲 养 人 员 的 衣 服 、 靴 子 以 及 漂 浮 于 空 气 中 的 气 溶 胶 传 播 ； 小 啮 齿 类 动 物
7、 和 鸟 也 可 能 传 播 此 病 ； 引 种 使 不 同 猪 群 间 传 播 ； 饲 养 环 境 突 然 改 变 、 猪 群 的 转 移 或 混 群 、 拥 挤 或 长 途 运 输 、 通 风 不 良 、 湿 度 过 高 、 气 温 骤 变 等应 激 因 素 ， 均 可 引 起 本 病 发 生 或 加 速 疾 病 传 播 。临 床 症 状 4.3.1 最 急 性 型 主 要 表 现 为 ： 发 病 突 然 ， 体 温 高 达 41.5 ， 精 神 沉 郁 ； 呼 吸 困 难 ， 血 液 循 环 衰 竭 ， 在 鼻 、 耳 、 腿 和 躯 体 末 稍 表 现 发 绀 ， 很 快 死 亡 ；
8、有 的 病 例 看 不 到 任 何 临 床 症 状 ， 突 然 死 亡 ， 通 常 于 口 腔 和 鼻 孔 流 出 大 量 的 血 色 分 泌 物 。4.3.2 急 性 型 主 要 表 现 为 ： 呼 吸 髙 度 困 难 ， 张 口 呼 吸 ， 严 重 腹 式 呼 吸 ， 呈 犬 坐 姿 势 ， 体 温 可 达 40.5 41 ， 表 现 精 神 沉郁 ， 拒 食 ； 死 亡 前 鼻 孔 流 出 大 量 带 血 泡 沫 状 液 体 。4.3.3 慢 性 型 主 要 表 现 为 ： 在 急 性 症 状 消 失 之 后 ， 往 往 转 成 亚 急 性 或 慢 性 型 。 此 期 很 少 有 发 热
9、 或 者 不 发 热 ； 见 咳 嗽 、 喘 气 ， 运 动 时 更 加 明 显 ， 生 长 不 良 。4.3.4 其 他 表 现 为 ： 流 产 ， 尤 以 SPF猪 群 多 见 ； 胸 膜 肺 炎 放 线 杆 菌 3型 菌 株 感 染 多 为 慢 性 型 经 过 ， 且 并 发 关 节 炎 、 心 内 膜 炎 及 不 同 部 位 的 脓 肿 。病 理 剖 检 特 征4.4.1 本 病 的 病 变 仅 出 现 在 胸 腔 的 组 织 器 官 。 肺 炎 病 变 大 多 为 双 侧 性 、 局 灶 性 ， 病 变 在 膈 叶 为 主 ， 往往 涉 及 心 叶 和 间 叶 ， 病 变 部 与 健
10、 部 界 限 清 楚 。4.4.2 最 急 性 型 病 理 剖 检 特 征 为 ： 以 泛 发 性 纤 维 素 性 出 血 性 胸 膜 肺 炎 病 变 为 主 要 特 征 ； 有 败 血 症 变 化 ， 肺 脏 严 重 充 血 、 出 血 ， 呈 暗 红 色 ， 膨 大 ； 肺 病 变 组 织 脆 弱 易 碎 ， 往 往 切 面 不 整 ， 流 出 大 量 血 色 液 体 ， 胸 腔 中 有 大 量 的 血 色 液 体 。4.4.3 急 性 型 病 理 剖 检 特 征 为 ： 肺 脏 严 重 出 血 ， 呈 暗 红 色 ， 肿 胀 实 变 ， 肺 脏 切 面 迅 速 渗 出 血 液 ； 气 管
11、 和 支 气 管 充 满 泡 沫 样 血 色 黏 液 分 泌 物 ， 胸 腔 中 有 血 色 液 体 。4.4.4 慢 性 型 病 理 剖 检 特 征 为 ： 最 常 见 在 膈 叶 上 有 大 小 不 等 的 坏 死 结 节 ， 周 围 包 有 结 缔 组 织 形 成 的 厚 包 囊 ， 坏 死 结 节 有 的 在 肺 DB13/T XXXXXXXX 3 内 部 ， 有 的 突 出 于 肺 表 面 ； 剖 检 见 严 重 的 心 包 炎 ， 心 内 膜 有 出 血 点 。 肺 脏 表 面 覆 盖 纤 维 素 性 渗 出 物 ， 或 者 与 胸 壁 粘 连 ， 或者 肺 脏 表 面 和 实 质
12、 有 脓 性 病 灶 。病 原 学 诊 断4.5.1 病 料 采 集病 料 采 集 方 式 如 下 ：a) 活 体 病 料 采 集 ： 用 棉 拭 子 伸 入 鼻 腔 采 集 分 泌 物 ， 放 入 无 菌 试 管 中 立 即 送 回 实 验 室 ；b) 死 后 病 料 采 集 ： 无 菌 采 集 具 有 典 型 病 变 的 肺 组 织 、 胸 水 、 鼻 及 气 管 渗 出 物 ， 立 即 接 种 培 养 基 或送 回 实 验 室 ；c) 样 品 运 送 ： 采 集 的 样 品 ， 应 在 4 条 件 下 ， 24 h 内 送 回 实 验 室 。4.5.2 涂 片 镜 检 涂 片 作 常 规
13、 革 兰 氏 染 色 镜 检 ， APP为 革 兰 氏 染 色 阴 性 ， 两 极 着 染 略 深 的 小 球 杆 菌 或 纤 细 杆 菌 。 继 代培 养 中 呈 明 显 多 形 态 ， 幼 龄 培 养 物 中 偶 有 成 丝 状 。4.5.3 细 菌 分 离 培 养无 菌 将 病 料 接 种 到 TSA+培 养 基 ， 置 于 5% CO2环 境 37 培 养 18 24 h（ 烛 缸 培 养 亦 可 ） ， 观 察 细 菌的 生 长 情 况 。 分 离 菌 在 TSA+培 养 基 平 板 上 长 出 圆 形 、 表 面 光 滑 、 灰 白 色 半 透 明 的 水 珠 样 菌 落 。4.5
14、.4 CAMP（ 第 一 次 出 现 ， 应 写 全 程 ， 或 者 是 在 缩 略 语 中 表 明 ） 试 验用 金 黄 色 葡 萄 球 菌 在 7%鲜 血 琼 脂 平 板 中 央 划 一 条 直 的 接 种 线 ， 然 后 在 线 的 两 侧 距 离 3 mm 5 mm处 垂直 划 线 接 种 每 个 待 检 培 养 物 ， 37 培 养 18 h 24 h， 两 种 细 菌 交 界 处 形 成 箭 头 状 的 溶 血 区 为 CAMP试 验 阳性 。血 清 学 诊 断 4.6.1 ELISA试 验用 针 对 ApxIV毒 素 建 立 的 ELISA鉴 别 诊 断 试 剂 盒 ， 具 体
15、试 验 方 法 按 试 剂 盒 说 明 书 操 作 。4.6.2 改 良 补 体 结 合 试 验操 作 程 序 参 照 NY/T 537-2002进 行 。PCR 诊 断4.7.1 引 物参 考 Boss JT等 设 计 的 APP Apx IV 通 用 检 测 引 物 ， 上 游 引 物 5 - TTATCCGAACTTTGGTTTAGCC -3 ，下 游 引 物 5 - CATATTTGATAAAACCATCCGTC-3 。 扩 增 目 的 片 段 长 度 为 418 bp。4.7.2 模 板 制 备 挑 取 APP单 菌 落 于 20 L灭 菌 生 理 盐 水 中 ， 在 旋 窝 震 荡
16、 仪 上 轻 径 混 匀 后 作 为 PCR反 应 模 板 。4.7.3 PCR 扩 增 体 系 DB13/T XXXXXXXX 4 反 应 总 体 积 为 15 L， 其 中 2Taq master Mix 7.5L， 10mol/ L上 、 下 游 引 物 各 1 L， DNA模 板2.0L， 灭 菌 双 蒸 水 3.5 L。4.7.4 PCR反 应 程 序95 5 min， 95 30 s， 55 30 s， 72 45s， 30个 循 环 ， 72 5 min。 取 6 L PCR 扩 增 产 物 ，置 于 1%琼 脂 糖 凝 胶 中 80 V电 泳 25 min检 测 。5 防 治加
17、 强 生 物 安 全 措 施坚 持 自 繁 自 养 、 全 进 全 出 及 “ 两 点 式 ” 或 “ 三 点 式 ” 饲 养 方 式 ， 如 需 引 进 公 猪 或 后 备 母 猪 时 ， 应 进行 血 清 学 检 测 ， 避 免 引 进 阳 性 种 猪 ， 做 好 引 种 及 猪 群 转 出 隔 离 。 严 格 控 制 场 内 外 人 员 出 入 ； 车 辆 应 专 车 专 用 ， 彻 底 消 毒 ； 猪 舍 及 环 境 应 定 期 消 毒 ， 每 次 消 毒 要 全 面 、 彻 底 、 不 留 死 角 ， 保 证 药 物 浓 度 和 药 物 作用 时 间 。加 强 饲 养 管 理按 GB
18、/T 17824.2执 行 ， 减 少 断 奶 后 混 群 和 转 栏 的 频 率 ， 尽 可 能 做 到 保 育 阶 段 的 全 进 全 出 ； 注 意 猪群 密 度 合 理 、 猪 舍 良 好 通 风 ； 减 少 人 员 串 栏 引 起 的 交 叉 传 播 。免 疫 预 防疫 苗 接 种 是 生 产 中 控 制 猪 传 染 性 胸 膜 肺 炎 的 有 效 手 段 。 根 据 本 地 区 流 行 菌 株 的 血 清 型 ， 选 择 多 价 灭活 疫 苗 进 行 免 疫 。药 物 防 治5.4.1 对 于 发 病 的 猪 场 ， 最 好 分 离 致 病 菌 ， 通 过 药 敏 试 验 筛 选
19、敏 感 药 物 ， 有 针 对 性 进 行 防 治 。 5.4.2 在 治 疗 过 程 中 所 有 药 物 的 使 用 应 符 合 NY5030-2006、 NY5031-2001、 中 华 人 民 共 和 国 兽 药 典 、 兽 药 质 量 标 准 的 规 定 。 DB13/T XXXXXXXX 5 附 录 A（ 附 录 应 在 正 文 中 提 及 ）（ 规 范 性 ）培 养 基 配 置A.1 胰 蛋 白 胨 大 豆 琼 脂 培 养 基 （ TSA培 养 基 ）称 取 38 g TSA培 养 基 于 1L蒸 馏 水 中 ， 加 热 煮 沸 至 完 全 溶 解 ， 121 灭 高 压 菌 15 min后 ， 冷 却 至 50后 倒 平 皿 。A.2 TSA+培 养 基称 取 38 g TSA培 养 基 于 1L蒸 馏 水 中 ， 加 热 煮 沸 至 完 全 溶 解 ， 121 灭 高 压 菌 15 min后 ， 冷 却 至 55 ，加 入 10 g/mL NAD和 5%小 牛 血 清 混 匀 后 倒 平 皿 。 A
