1、 ICS 65.150 CCS B50 DB46 海南省 地 方 标 准 DB 46/T 512 2020 合浦珠母贝人工繁育技术规程 Guidelines for Pinctada fucata artificial breeding and seedling technique 2020 - 11 - 16发布 2020 - 12 - 15实施 海南省市场监督管理局 发布 DB46/T 512 2020 I 前 言 本 文件 按 GB/T 1.1-2020 给出的规 则起草。 本 文件 由原海南省海洋与渔业厅提出，由海南省农业农村厅归口。 本 文件 起草单位：中国水产科学研究院南海水产研究
2、所热带水产研究开发中心、中国水产科学研 究院南海水产研究所、三亚热带水产研究院。 本 文件 主要起草人：陈明强、李有宁、王雨、邓正华、于刚、陈旭、吴开畅、赵旺 、魏海军 、方 伟 。 DB46/T 512 2020 1 合浦珠母贝人工繁育技术规程 1 范围 本 文件 规定了合浦珠母贝 （ Pinctada fucata Gould） 人工繁育环境条件、亲贝、饵料培养、繁育、 贝苗及运输等要求。 本 文件 适用于合浦珠母贝的人工繁育技术。 2 规范性引用文件 下列文 件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用
3、文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 11607 渔业水质标准 NY 5052 无公害食品 海水养殖用水水质 NY 5362 无公害食品 海水养殖产地环境条件 SC/T 2072 马氏 珠母贝 亲贝和苗种 SC/T 9103 海水养殖水排放要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 合浦珠母贝 Pinctada fucata 合浦珠母贝又称 马氏珠母贝（ Pinctada martensii Dunker），在动物分类学地位上属于软体动物门 （ Mollusca） 、瓣鳃纲（ Lamellibranchia）、翼形亚纲（ Pterimorphia）、珍珠贝
4、目（ Pterioida）、珍珠 贝科（ Pteriidae）、珠母贝属（ Pinctada），属于暖水性贝类，分布于热带、亚热带的太平洋和印度洋 沿岸，我国主要分布于海南、广东、广西及台湾等省沿海一带海域，是海水珍珠贝类中培育珍珠的主要 贝种。 3.2 亲贝 Brood stocks 天然海区生 长或人工养殖的成贝壳长 6 cm达到性腺成熟的个体 。 3.3 壳长 Shell length 壳前端至壳后端的最大 直线 距离。 DB46/T 512 2020 2 3.4 壳高 Shell height 壳顶至腹缘的最大距离。 3.5 D 型幼虫 D type larva 又称初期面盘幼虫或直线
5、铰合幼虫 ， 由壳腺分泌形成的两片贝壳包裹了全身，侧面观如英文字母 D。 3.6 壳顶幼虫 Shell top larva D型幼虫经过一段时间的发育，铰合线开始向背部隆起，形成壳顶 的幼虫 。 3.7 眼点幼虫 Eye point larva 在壳顶幼虫后期，幼虫足的基部出现 的 一对黑褐色 腺体的眼点 。 3.8 稚贝 Juvenile shell fish 幼虫向幼贝过渡的 一个 发育阶段， 主要特征是 面盘完全退化，钙质的贝壳形成，用鳃呼吸，足 部 发达 ， 营附着 生活。 3.9 规格合格率 Specification Qualification Rate 达到规格的苗种数量 占苗种
6、总数的百分比 。 4 环境条件 4.1 育苗场环境 育苗场应选择在避风防潮条件好，周边无工业和生活污染源，取水方便、电力保证、交通便利等 沿海地方建造。海水养殖底质应符合 NY 5362 的规定。 4.2 水质要求 水质符合 GB 11607 、 NY 5052 的规定，苗种繁育水环 境要求见表 1。 表 1 苗种繁育水环境要求 项目 水温 （） 盐度 （） 溶解氧（ mg/L） pH 光照强度 (Lx) 亲贝培育 25 29 25 35 5 7.8 8.5 3000 5000 幼虫培育 25 29 25 35 5 7.8 8.5 300 500 DB46/T 512 2020 3 表 1 （
7、续） 项目 水温 （） 盐度 （） 溶解氧（ mg/L） pH 光照强度 (Lx) 稚贝培育 25 29 25 34 5 7.5 8.5 300 500 苗种培育 25 29 24 35 5 7.5 8.5 500 1000 4.3 育苗设施 4.3.1 育苗场 设施 育 苗场面积为 6 亩以上， 配备 育苗室、沉淀池、过滤池、贮水池、育苗池、供水系统、饵料培养 设备、采苗器等。 4.3.2 育苗室 包括亲贝蓄养池、孵化池和育苗池， 形状为方形或长方形， 池的上方设进水口，池底部设排水口， 配备充气、增氧系统。育苗室 设施要求见表 2。 表 2 育苗 室 设施要求 项目 体积（ m3/ind）
8、 水深（ m） 蓄养池 1 3 1.0 1.5 孵化池 1 3 1.0 1.5 育苗池 10 30 1.0 1.5 4.3.3 沉淀池 沉淀池 的 体积 为 孵化池和育苗池体积的 3倍及以上。 4.3.4 过滤 池 过滤池 形状为方形或长方形 ， 池内 铺设 有 碎 石和砂子等过滤材料， 具体要求见表 3。 表 3 过滤池的材料要求 层次 材料 孔径大小（ mm） 厚度（ cm） 1 细砂 0.1 80 100 2 筛绢网布 0.1 0.1 0.2 3 粗砂 2 3 20 40 4 筛绢网布 1 0.2 0.3 5 碎石 15 20 10 20 6 筛绢网布 2 0.2 0.3 7 筛板 20
9、 25 5 8 4.3.5 贮水池 DB46/T 512 2020 4 位置 高于育苗池，形状为方形或长方形，建设容积是孵化池和育苗池体积的 2倍 及 以上。 4.3.6 附属设备 包括抽水泵、发 电机组、控温设备和水管等。水管选用塑料管或 PVC管为宜，忌用金属的水管。 4.3.7 饵料培养设施及设备 包括藻种培养室、室内外培养池 等 。藻种的培养室要求通风条件好，光线充足，温度可控性好 ； 室 内外培养 设施 有水泥池、玻璃钢桶、塑料桶、专用培养塑料袋等， 饵料培养池面积为育苗池总面积的 50 以上 。 室内设备应有 常用 的 培养仪器 、 显微镜 和 解剖镜等。 5 亲贝 5.1 亲贝来
10、源 采捕自然海区的野生亲贝或采用原（良）种场选育的亲贝。 5.2 亲贝质量要求 亲贝质量应符合 SC/T 2072 的要求。 5.3 亲贝培育 5.3.1 海区培育 采用直径 35 cm 40 cm的锥形笼 或双圈笼，以 25 只 /笼装笼吊养在水深 1.5 m 2.0 m的海区养殖培 育， 亲贝应 符合 SC/T 2072要求。 5.3.2 室内培育 在室内蓄养池培育，以 20 只 /笼吊养水深 60 cm 70 cm， 离池底 10 cm 15 cm， 放养密度为每立方 水体放养 150 只。投喂饵料以扁藻为主，金藻及硅藻为辅，日投饵量为 5 104 cell/mL 6 104 cell/
11、mL， 每 2 d洗池与换水一次，连续充气。 水质应符合 GB 11607 、 NY 5052的要求。 6 饵料培养 6.1 主要 种类 等鞭金藻、叉鞭金藻、绿色巴夫藻、扁藻及小球藻等单细 胞藻类。 6.2 藻种保存 藻种宜放在试管或三角烧瓶中 ， 置于光照培养箱 内 保存， 光照强度为 5000 Lx 10000 Lx。 6.3 设施、设备消毒 DB46/T 512 2020 5 所有需要的设施 、设备中的 容器、工具等都要经过消毒，消毒方法采用 5 mg/L 高锰酸钾水溶液浸 泡 5 min，再用经臭氧处理的消毒海水冲洗 2 3 次；或用 100 mg/L 300 mg/L漂白粉（含有效氯
12、 25% 35%）水溶液浸泡 30 min，再用经臭氧处理的消毒海水冲洗 3 4 次。 6.4 培养液的配制 根据保存的藻类选择适宜的培养液，主要藻类的培养液配方见表 4。 表 4 金藻与扁藻常 用培养液配方 金藻常用培养液配方 扁藻常用培养液配方 成分 单位 含量 成分 单位 含量 NaNO3 g 0.06 NaNO3 g 0.05 K2HPO4 g 0.004 KH2PO4 g 0.005 FeC6H5O7 mg 0.5 FeC6H5O7(1%溶液 ) mL 0.2 维生素 B1 g 0.1 0.5 维生素 B1 mg 200 维生素 B12 mg 0.5 1.5 维生素 B12 g 20
13、0 NaHCO3 g 1 pH 7.8 8.4 pH 7.5 8.5 海水 mL 1000 海水 mL 1000 注： 表中培养液配方适用于其它单 细 胞藻类培养的参考值。 6.5 接种 接种前要对藻种进行检查，方法是用吸管吸取 1 滴藻种于载玻片上，放在显微镜下观察 ，其藻体 健壮、活力强、无病害者移入培养液中 培养 ，培养液使用见表 4。 扁藻的藻种浓度为 3 105 cell/mL 4 105 cell/mL，一、二级培养的比例为 1:2 1:5，生产性培 养 1:5 1:20。金藻的藻种浓度为 2.5 106 cell/mL 以上，一、二级培养的比例为 1:3 1:5。 单细胞藻类经
14、过 7 d左右的一级培养可转入二级培养，生产性培养 5 d 7 d可用于 饵料 投喂。 6.6 一级培养 一级培养在 500 mL 3000 mL三角烧瓶中进行。三角烧瓶应经 120 以上高温消毒 30 min ，培养液 和扩种用海水应煮沸消毒。 6.7 二级培养 二级培养在容积为 50 L 100 L 的白色塑料桶或尼龙袋中进行。培养用海水经次氯酸钠溶液 (含有 效氯 8%)150 mL/m3 200 mL/m3消毒， 10 h 12 h后，用硫代硫酸钠（ Na2S2O3）约 35 g/m3中和。 6.8 生产性培养 生产性培养在面积为 20 m2 40 m2的饵料培养池中进行，蓄水高度为
15、80 cm 100 cm。 营养盐可采 用化学纯或工业纯级别。氮肥可选用尿素（ CON2H4）或硝酸钠（ NaNO3），使用量分别为 50 g/m3或 44 g/m3； 磷肥选用磷酸二氢钾（ KH2PO4），用量为 4.4 g/m3。 DB46/T 512 2020 6 6.9 日常管理 每天用显微镜对藻类生长情况观察与检查，检查培养液和藻类的颜色变化情况、有无沉淀、附壁 现象及病虫害污染等，发现藻类出现颜色异常、混浊、沉淀、水表面出现菌膜，表明被污染或死亡， 应及时排 放处理。 接种、一级培养阶段，每天上、下午要摇动三角烧瓶 1 次；二 级培养、生产性培养阶段要保障昼 夜不停地充气。阴天与雨
16、天光照不 足时 ，要用日光灯照明调节光照，光 照 强度为 2000 Lx 6000 Lx， 并做好防止雨水及灰尘进入藻池中； 当 pH 值变化升高或降低时，可用 1N 的 HCL或 NaOH来调节。 7 人工繁育 7.1 准备工作 繁育前对所有要用的水池进行消毒处理与清洗干净。采用 10 mg/L高锰酸钾溶液浸泡水池或淋洒池 壁几遍，或用 100 mg/L 300 mg/L 漂白粉溶液浸泡水池或淋洒池壁， 30 min 后再用过滤海水冲洗干 净。 7.2 人工授精 7.2.1 采用诱导法人工授精 人工诱导催 产方法包括阴干刺激 法和变温刺激法，促使亲贝排放精卵而受精； 阴干刺激法：挑选雄、雌贝
17、清洗干净，雄雌比例为 1:3或 1:4，置于阴凉处阴干 1 h 2 h， 然后放入 装有过滤海水的孵化池中，受刺激的亲贝即能排精产卵而受精，海水温度为 25 29 。 变温刺激法：通过对海水温度进行升温和降温，每次升降水温温差为 2 3 ， 以刺激亲贝排精 和放卵而受精。如在水温 24 时，升温 2 3 ，处理 30 min，再移回产卵池中， l h后亲贝 自然 排 放精卵；在亲贝培育的水温 25 29 时， 升温 2 3 并保持 0.5 h，然后换 入海水，接着再重 复一次，以 刺激亲贝排精和放卵而受精 。 7.2.2 采用解剖法人工授精 挑选成熟的 雌 贝和 雄 贝，用解剖刀切断闭壳肌，使
18、生殖腺裸露，用消毒脱脂药棉擦去体液，然后 用消毒过的吸管刺穿生殖腺表皮组织抽取精、卵，分别置于盛有少量过滤海水的烧杯中。先把卵液倒 入 配好 氨浓度为 0.05 0.06 的 海水 中，用玻璃棒搅动， 5 min 6 min 后倒入精液 ，再 用玻璃棒轻 轻搅动。 20 min 30 min 后 镜检，如卵子极体出现，表明已受精，即可换过滤海水。 30 min 40 min 后 再换水 1 次 2 次。 7.2.3 胚胎发育 在水温 25 29 的条件下，合浦珠母贝胚胎发育过程见附录 A。 7.3 幼虫培育 7.3.1 培育密度 DB46/T 512 2020 7 浮游幼虫进入 D型幼虫期，计
19、算幼虫数量，按培养水体 1 个 /mL 3 个 /mL 的密度移入育苗池中培 养，移入育苗池前应预先灌注 1/3左右的过滤海水， 温差不超过 2 。 7.3.2 加水 幼虫移入育苗池后的 1 d 3 d，每天加水为总容量的 1/4左右，以水池的预定水量为止。注意进水 水温与育苗池水温的温差变化，不能超过 3 。 7.3.3 换水 第 4 d 5 d开始换水，每天排水 1/3。换水时先排水后进水，也可进、排水同时进行，要连续充气。 9:00以前完成换水。随 着幼虫的生长换水量也逐渐增加，从初期换水量约 1/3到壳顶中后期增至 1/2，变 态期达 2/3以上。当幼虫附着稳定后可改用经沉淀的海水进行
20、培育。 7.3.4 饵料投喂 幼虫移入育苗池后第 2 d 开始投喂饵料，日投饵量见表 5。 表 5 幼虫不同发育阶段日投饵量 发育阶段 单位 金藻 扁藻 D 形幼虫期 cell/mL 200 500 300 500 壳顶幼虫初期 cell/mL 600 1000 500 1000 壳顶幼虫中期 cell/mL 600 1000 1000 1500 壳顶幼虫后期 cell/mL 600 1000 1500 2000 稚贝期 cell/mL 2000 3000 3000 4000 注：表内数字为参考用量，在实际操作中，可根据具体情况进行调整。 7.3.5 采苗器 7.3.5.1 采苗器 种类 采苗
21、器的种类有聚氯乙烯塑料板（规格 30 cm 30 cm，厚 0.6 mm）、遮阳网布（规格 30 cm 30 cm， 或以育苗池大小而定）和聚乙烯胶丝网片（ 40 mm/条）。 可以 选用以上一种 或几种 采苗器 同时 使用。 7.3.5.2 采苗器投放 采苗器投放前要清洗干净，用 5 mg/L高锰酸钾溶液浸泡 30 min消毒， 再 用过滤海水冲洗干净。当 眼点 幼虫总 量达 20%左右时，在换水前 投放采苗器 或边换水投放。先投放池底， 2 d 3 d后在水池中间 吊放，分批进行。采苗器投放后，要增加充气、换水量和投饵量及检查附着量。幼虫量密度大于 2 106 ind/m3时，应迁移部分采
22、苗器到其它育苗池疏养，促使 幼虫 生长。 7.3.6 日常管理 DB46/T 512 2020 8 育苗期间管理主要检查幼虫生长发育与活动情况、幼虫密度、有无出现脱苗死亡情况、投饵与摄食 情况及敌害生物等；暴风雨天气，可停止换水，保障昼夜不停地充气增氧；幼虫生长出现突发性的大量 下沉，可采取每天换水 2 次或 5 d 7 d倒池洗苗并换移育苗池。 7.4 稚贝 培育 7.4.1 培育密度 稚贝培育密度为 1 106 ind/m2，随着个体的生长而逐渐降低， 7 d 10 d疏减培养密度 50%。 7.4.2 换水 每天换水量为 3/4 或全部，换水时排水和加水同时进行，保持池水平衡，并 连续充
23、气 。 7.4.3 投饵 每天投饵 2 次 3 次，换水后 1 h内进行，日投饵量见表 5。 7.4.4 日常管理 稚贝培育管理除做好换水工作外，还要 检查生长发育情况、投饵与摄食情况等 ，注意充气增氧 ；暴 雨天气，可停止换水，保障昼夜不停地充气增氧 。 7.5 尾水排放 尾水排放按 SC/T 9103的规定执行。 8 贝苗 8.1 规格与质量 贝苗出苗时壳长、壳高与规格合格 率， 应符合 SC/T 2072的规定要求。 8.2 贝苗采收 塑料板和池壁及池底的贝苗，可用海绵轻轻抹下；遮阳网布和胶丝网片上附着的贝苗，可用薄竹片 或刀片刮下或直接装入贝苗笼内移往海区养殖。 9 运输 9.1 贝苗
24、充氧运输 用双层聚乙烯薄膜袋装入四分之一过滤海水，每袋放入贝苗 2.0 万只 2.5 万只，然后充氧打包装。 第一次充氧后压出气体，第二次充氧后扎紧袋口，装入泡沫箱中。泡沫箱内加冰袋或用封口袋装入冰块 （冰袋及冰块用旧报纸包裹），再用胶带封箱。温度 23 25 ，运输时间 10 h以内，途中防止日晒 。 9.2 贝苗水车充氧运输 DB46/T 512 2020 9 用 活水车充氧运输。将贝苗装入筛绢网袋中，浸泡在装有海水的水柜中运输。水温 23 26 ，运输时间宜在 12 h以内，放养地的水温温差 3 。途中防止日晒，保持温度在安全范围内。 水质应符合 GB 11607 和 NY 5052要求
25、。 DB46/T 512 2020 10 A A 附 录 A （资料性附录） 合浦珠母贝胚胎发育过程 表 A.1给出了合浦珠母贝胚胎发育的过程。 表 A.1 合浦珠母贝胚胎发育的过程 发育期 发育时间（受精后时间） 壳高 x 壳长（微米） 第一极体出现 25 分钟 4848 4 细胞期 1 小时 20 分 5448 8 细胞期 1 小时 30 分 5450 16 细胞期 2 小时 10 分 5250 桑椹期 3 小时 8 分 4852 囊胚期 4 小时 10 分 5057 担轮幼虫期 4 小时 50 分 4866 D 型幼虫期 21 小时 6472 壳顶初期 8 天 97102 壳顶期 17 天 204210 眼点期 21 天 212220 变态期 24 天 221232 附着贝苗 26 27 天 238246 注：合浦珠母贝胚胎发育过程 （ 水温 25 -29 ） _
