1、 ICS 13.060 C 51 DB37 山东省 地方标准 DB37/T 4163 2020 水质 藻类计数 视野计数法 Water quality Algae count Field count method 2020 - 09 - 25 发布 2020 - 10 - 25 实施 山东省市场监督管理局 发布 DB37/T 4163 2020 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 原理 . 1 4 试剂和材料 . 1 5 仪器和设备 . 1 6 样品 . 2 7 分析步骤 . 3 8 结果计算与报告 . 4 9 精密度 . 5 10 质量保证和质量控制
2、 . 5 附录 A（资料性附录） 常见藻类图谱 . 6 参考文献 . 20 DB37/T 4163 2020 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准由山东省住房和城乡建设厅提出并组织实施。 本标准由山东省城镇给水排水标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省城市供排水水质监测中心、国家城市供水水质监测网福州监测站、东营市 自来水公司水质检测中心、国家城市供水水质监测网武汉监测站、潍坊市公用事业产品服务质量监测中 心、山东省济南生态环境监测中心。 本标准主要起草人：贾瑞宝、孙韶华、王明泉、赵清华、石近淼、刘轲、逯南南、朱光 进、李令春、 张昊天、田立平、
3、郑琳琳、王辉、王晓波、钱君丽、吴锦铃。 DB37/T 4163 2020 1 水质 藻类计数 视野计数法 1 范围 本标准规定了测定水中藻类计数的视野计数法。 本标准适用于生活饮用水及其水源水中藻类计数的测定。 取样 1 L，浓缩至 50 mL时，本方法检测限为 0.1 万个 /L。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5750.2 2006 生活饮用水标准检验方法 水样的采集与 保存 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 水和
4、废水监测分析方法（第四版 增补版） 中国环境科学出版社 3 原理 藻类漂浮在水体中，难以进行活体显微观察、计数。利用鲁哥氏液固定藻类，并使藻类的鞭毛、纤 毛、细胞核及细胞内淀粉染色，通过计数藻类细胞或个体数目，反映水体中藻类的分布情况。 4 试剂和材料 除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为纯水。 4.1 纯水：符合 GB/T 6682 二级及以上分析实验室用水要求。 4.2 碘：分析纯。 4.3 碘化钾：分析纯。 4.4 甲醛：分析纯，含量 37 % 40 %。 4.5 鲁 哥氏液：碘（ 4.2） 50 g；碘化钾（ 4.3） 100 g；纯水（ 4.1） 1 000
5、 mL。称取 100.0 g 碘化钾， 溶于 800 mL 蒸馏水中，待完全溶解后充分摇动，再加入 50.0 g 碘。待碘完全溶解后定容至 1 000 mL， 储存于磨口棕色试剂瓶内。 4.6 40 %甲醛溶液：甲醛（ 4.4） 40 mL；纯水（ 4.1） 60 mL。量取 40 mL 甲醛，倒入 100 mL 烧杯中，再 量取 60 mL 纯水，倒入烧杯中搅拌均匀，储存于磨口棕色试剂瓶内。 5 仪器和设备 5.1 显微镜：具 10 倍目镜，具 20 倍、 40 倍、 100 倍物镜，测微尺。 5.2 竖式 采水器：不锈钢 2 L。 5.3 样品瓶：棕色玻璃瓶， 4 L。 DB37/T 41
6、63 2020 2 5.4 筒形分液漏斗： 1 000 mL。 5.5 虹吸管：管内直径 3 mm 5 mm，一端使用孔径 64 m 筛绢扎紧。 5.6 锥形离心管：塑料，具盖 50 mL。 5.7 量筒： 50 mL 和 100 mL。 5.8 滴管： 1 mL。 5.9 浮游生物计数框：体积 100 L，面积 20 mm 20 mm，横竖划分为 10 10 行，共 100 个计数小格， 每个计数小格面积为 2 mm 2 mm。 5.10 浮游生物计数器。 5.11 烧杯： 500 mL。 5.12 容量瓶： 1 L。 6 样品 6.1 样品的采集 6.1.1 采样点位的设置 采样点的设置要
7、有代表性，采集 的藻类能够代表一个水体或者一个水体不同区域的实际状况。根据 水体和周围环境的自然生态类型、人类干扰的空间特性，布设有代表性的采样点位（断面），与长期定 位观测及水化学监测点位（断面）尽可能保持一致，同时考虑采样点位（断面）布设的经济性。 6.1.2 采样频次 采样频率一般全年至少四次（每季度一次），条件允许时，每个月一次。当出现水华风险时，要随 时增加采样次数。考虑到浮游藻类的日变化，监测时间尽量选择在一天的相近时间，比如上午的 8 10 时，如果无法做到，则需记录下每次实际的监测时间。 6.1.3 采样要求 生活饮用水的采集，参照 GB/T 5750.2 2006，取样时应打
8、开龙头放水数分钟，排出沉积物，采集 水样。 地表水的采集，需根据采样点位的水深设置采样层次。水深 2 m时，不分层，在表层下 0.5 m采集； 水深为 2 m 5 m时，分别在表层下 0.5 m、底层上 0.5 m各采集一次；水深 5 m时，则在表层下 0.5 m处、 中层以及底层上 0.5 m处各采集一次。不同层次采集的样品作等比例混合样处理。 地下水的采集，对于自喷的泉水，可 在涌口处直接采集；对于不自喷的泉水，应将停滞在抽水管中 的水汲出，新水更替后再进行采集；从井水采集水样，应在充分抽汲后进行，以保证水样的代表性。 采样量根据浮游藻类的密度而定。一般原则使用竖式采水器（ 5.2）采集不
9、少于 2 L水样。 6.1.4 样品标识和记录 在样品瓶外侧标注样品编号，在现场采样记录表上记录采样日期、天气状况、水体名称、采样地点、 采样方法等信息。 6.2 样品的固定和保存 按照水和废水监测分析方法（第四版 增补版），取混匀水样 1 L倒入筒形分液漏斗（ 5.4）， 加入 10 mL鲁哥氏液（ 4.5）混匀，静置 24 h。 未固定的水样在 4 10 条件下避光保存不得超过 4 h。 DB37/T 4163 2020 3 7 分析步骤 7.1 浓缩 将虹吸管（ 5.5）带有筛绢的一端放入水样中，将上层清液缓慢吸出（不可搅动溶液底部，如被搅 动则需重新静置沉淀 24 h），虹吸管使用时随
10、液面缓慢向下移动并接近上液面，最后将剩余 30 mL 40 mL 样品转入 50 mL量筒（ 5.7）中。为减少藻类损失，用少许纯水冲洗筒形分液漏斗 1 2次并转入 50 mL量筒 中，最终定容至 50 mL，移入锥形离心管（ 5.6），室温下避光保存，待检。浓缩液在 14 d内镜检计数。 如需长期保存（ 14 d）， 补加 1 mL 2 mL 40 %甲醛溶液（ 4.6）。 7.2 制片 7.2.1 新购买的浮游生物计数框（ 5.9）应对其体积进行校准：吸取 100 L 纯水注入计数框内，制片 后应达到无气泡、无溢出的要求。 7.2.2 将浓缩液缓慢多次摇匀后，将盖玻片斜盖在计数框上，用滴管
11、（ 5.8）吸取 0.1 mL 浓缩液移入 计数框，在计数框中一边进样，另一边出气，避免气泡产生。注满后把盖玻片移正，盖上盖玻片，盖玻 片下不能存有气泡。将计数框放置于潮湿、暗室内静置 15 min 30 min，使具有气囊类藻类沉降至计数 框底层，便于计数。 7.3 镜检 7.3.1 预观察 在 10倍目镜、 20倍物镜下定性观察，在 10倍目镜、 40倍物镜下计数，每个视野以十几个藻体为宜。 若计数框中藻类分布不均匀或杂质粘附无法分辨清楚，再次混匀浓缩液重新制片；若视野中藻类过多难 以计数时，将浓缩液用纯水（ 4.1）稀释后重新制片。 7.3.2 分类鉴定 按照藻类形态，对照标准图谱进行分
12、类。藻类形态学鉴定到属。常见藻类图谱见附录 A。 7.3.3 计数面积选择 计数时，对计数框中的第 2、 5、 8行共 30个计数小格进行计数，视野数可按浮游藻类多少而酌情增 减，以优势种类超过 300个细胞为宜。若每个视野中只有 1 2个藻体，则全片计数。计数面积选择见图 1。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 2 3 4 5 6 7 8 9 10 图 1 计数面积选择 DB37/T 4163 2020 4 7.3.4 计数 7.3.4.1 当藻体一半以上处于计数视野内则计数；当藻体的一半在计数视野内而另一半在计数视野外， 计上不计下，计左不计右，计数规则见图 2。 7.3.4.2
13、单一细胞个体，按照细胞计数，例如针杆藻、小环藻、曲壳藻、衣藻等。 7.3.4.3 不规则团块藻体，例如微囊藻、团藻等 ，按照估计细胞计数。 7.3.4.4 规则团块、胶被囊类藻体，根据其细胞数量的偶数倍数特性计数。例如：色球藻等以两个细 胞计为一个藻体，卵囊藻、平裂藻、栅藻等以四个细胞计为一个藻体。 7.3.4.5 丝状藻体，以 20 m 为一个计数单位进行计数。例如：伪鱼腥藻、浮丝藻、泽丝藻、束丝藻、 鱼腥藻、颤藻、席藻、直链藻、水绵等。丝状藻体断裂形成藻殖段，不足 20 m 时，与视野中观察到 的下一个藻殖段相加后计数。 7.3.4.6 藻体细胞残体不计数，未完成分裂的按一个细胞计。 图
14、2 计数规则 8 结果计算与报告 8.1 结果计算 按照公式（ 1）计算每升水中藻类的数量： 4= 1 0w cb VANnA V V . (1) 式中： N 每升水中藻类的数量（万个 /L）； A 计数框面积，即 100个 计数小格； Ac 计数面积，当计数第 2、 5、 8行时，计数面积为 30个计数小格； Vw 水样经沉淀浓缩后的样品体积（ mL）； Vb 计数框体积（ mL）， 0.1 mL； V 水样体积（ L）； n 计数所得的藻体的个体数或细胞数。 8.2 结果报告 DB37/T 4163 2020 5 测定结果小数点后位数的保留与检测限一致，最多保留三位有效数字。 9 精密度
15、9.1 阳性纯藻种精密度 6家实验室对阳性纯藻种进行测定，实验室内相对标准偏差为 1.2 % 20.4 %。 9.2 实际水样精密度 6家实验室对藻类总数 100 万个 /L 500 万个 /L的地表水进行测 定，实验室内相对标准偏差为 7.1 % 15.0 %；对藻类总数 500 万个 /L 2 000 万个 /L的地表水进行测定，实验室内相对标准偏差为 1.7 % 14.5 %。 10 质量保证和质量控制 每批次样品，取其中一个样品的浓缩液，计数两片取其平均值。若两片计数结果相对偏差大于 15 %， 则进行第三片计数，结果取其中相近两片的平均值。 DB37/T 4163 2020 6 A
16、A 附 录 A （资料性附录） 常见藻类图谱 A.1 硅藻门 图 A.1 脆杆藻 图 A.2 脆杆藻 DB37/T 4163 2020 7 图 A.3 菱形藻 图 A.4 平板藻 图 A.5 曲壳藻 DB37/T 4163 2020 8 图 A.6 曲壳藻（侧面观） 图 A.7 双壁藻 图 A.8 小环藻 DB37/T 4163 2020 9 图 A.9 星杆藻 图 A.10 针杆藻 图 A.11 直链藻 DB37/T 4163 2020 10 图 A.12 舟形藻 A.2 蓝藻门 图 A.13 颤藻 图 A.14 浮丝藻 DB37/T 4163 2020 11 图 A.15 鞘丝藻 图 A.
17、16 束丝藻 图 A.17 微囊藻 DB37/T 4163 2020 12 图 A.18 伪鱼腥藻 图 A.19 鱼腥藻 DB37/T 4163 2020 13 图 A.20 泽丝藻 A.3 绿藻门 图 A.21 栅藻 图 A.22 刚毛藻 DB37/T 4163 2020 14 图 A.23 胶网藻 图 A.24 空球藻 图 A.25 空星藻 DB37/T 4163 2020 15 图 A.26 卵囊藻 图 A.27 盘星藻 DB37/T 4163 2020 16 图 A.28 水绵属 图 A.29 衣藻 DB37/T 4163 2020 17 图 A.30 实球藻 A.4 甲藻门 图 A.
18、31 多甲藻 DB37/T 4163 2020 18 图 A.32 飞燕角甲藻 A.5 隐藻门 图 A.33 蓝隐藻（鞭毛丢失） DB37/T 4163 2020 19 图 A.34 隐藻属 A.6 裸藻门 图 A.35 裸囊藻 DB37/T 4163 2020 20 A.7 金藻门 图 A.36 锥囊藻 DB37/T 4163 2020 21 参 考 文 献 1 胡鸿钧 , 魏印心 . 中国淡水藻类 系统、分类及生态 M. 科学出版社 , 2006. 2 马放 , 杨基先 , 魏利 . 环境微生物图谱 M.中国环境科学出版社 , 2010. 3 陈茜 . 浙江省主要常见淡水藻类图集（饮用水水源） M. 中国环境科学出版社 , 2010. 4 郑洪萍 . 福建省大中型水库常见淡水藻类图集 M. 中国环境科学出版社 , 2012. _
