1、 ICS 65. CCS B21 安 2020-1 020.01 徽 染 Tech 1-27 发 布 徽 染 井 吉 nical regu 布 安 省 吉 野 樱 lations fo 安 徽省市 场 地 樱 组 培 r tissue cu 场 监督管 理 方 培 育苗 lture of 理 局 发 方 DB 技术 规 Prunus 发 布 3 标 34/T 37 规程 yedoensi 2020- 4 准 19 2020 s 12-27 实 准 实 施 DB 34/T 3719 2020 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定
2、起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由安徽省林业高科技开发中心提出。 本文件由安徽省林业局归口。 本文件起草单位：安徽省林业高科技开发中心、界首市佳祺农业开发有限公司、安徽天润建筑工程 集团有限公司、芜湖市雨田润农业科技股份有限公司、安徽林业职业技术学院、合肥市包河区林业工作 站、安徽省农科院农业工程研究所、皖西盐肤木研究所、利辛县东方美景园林绿化工程有限公司。 本文件主要起草人：许早时、朱谦、任杰、汪耀、许娟、沈国良、纪坤、殷勇、姚瑶、刘若森、李 春生、李葵阳、孙刚、孟可、孔伶俐、李媛、张作坊、胡仲华、江鸿超、雷经洋。 DB 34/T 3
3、719 2020 2 染井吉野樱组培育苗技术规程 1 范围 本文件规定了良种染井吉野樱（ Prunus yedoensis）组培育苗中外植体材料的选择、消毒灭菌、 初代培养、继代培养、生根培养、炼苗、移植、苗期管护、质量标准、包装标签和运输、档案记录管理 等技术要求。 本文件适用于染井吉野樱组培育苗生产作业。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 3095 环境质量标准 LY/T 2289 林木种苗生产经营管理档案
4、 LY/T 2290 林木种苗标签 危险化学品安全管理条例 中华人民共和国国务院令第645号 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 植物组培 plant tiss ue culture 将从植物体分离出的符合需要的组织、器官或细胞及原生质体等材料，通过无菌操作接种在含有各 种营养物质及植物激素的培养基上进行培养以获得再生的完整植株的技术。 3.2 接种 inoculation 将消毒后的外植体或干净培养材料在无菌条件下接入培养容器内培养基中的过程。 3.3 消毒 disinfection 通过物理、化学方法去除物体表面大部分有害病原微生物（孢子除外）的过程。 3.4 灭菌 st
5、erilization 通过物理和化学方法杀灭一切微生物（包括孢子等）的过程。 3.5 外植体 explant 从自然生长的活体植物上获取的用于建立植物组培快繁体系的起始材料。 3.6 初代培养 primar y culture DB 34/T 3719 2020 3 直接从机体取下的细胞、组织和器官等材料的培养。 3.7 继代培养 subculture 将培养材料从老培养基中转接入新鲜培养基中继续培养的过程。 3.8 生根培养 rooting culture 将继代增殖后的无根芽苗转接至生根培养上诱导生根培养得到完整的植株的过程。 3.9 炼苗 acclimatization 炼苗是在保护地
6、育苗的情况下，采取放风、降温、适当控水等措施对幼苗强行锻炼的过程。 4 外植体材料的选择 4 月6 月从染井吉野樱健壮母株上截取半木质化的腋芽茎段或顶芽等器官作为组培快繁体系的 外植体材料。 5 消毒灭菌 5.1 洁净 用 1% 2% 的洗衣粉水浸泡 20 min 30 min，用软毛刷去除外植体表面的尘土等杂质，再用 流动的自来水冲洗 2 h4 h。 5.2 消毒 洁净后的外植体材料至超净工作台上用质量分数 70%75% 乙醇消毒 8 s15 s 后，用无菌水清 洗 3 次6 次。 5.3 灭菌 用 15% 次氯酸钠溶液浸泡 8 min 15 min，用玻璃棒搅拌；无菌水冲洗 4 次6 次，
7、最后用无 菌纱布或无菌滤纸吸干外植体表面水珠后待用。消毒剂按照 GB 3095 及中华人民共和国国务院令第645 号的规定执行。 6 初代培养 诱导培养基为 MS+BA 0.5 mg/L1.0 mg/L+NAA 0.02 mg/L+TDZ 2.0 mg/L 3.0 mg/L+蔗糖20 g/L 30 g/L+琼脂 5.5 g/L6.5 g/L。将经过消毒处理后的染井吉野樱腋芽茎段或顶芽切成 1.5 cm2.5 cm 小段接种至上述培养基中。先在 22 25 条件下全暗培养 5 d7 d，然后置于每天光照 10 h 12 h，光照强度 1500 lx2 000 lx 的培养室中培养，25 d 左右
8、继代一次，直至诱导形成丛生芽。 7 继代培养 继代培养基为1/2MS+BA0.5 mg /L0.8 mg/L+NA A0.05 mg/L0.08 mg/L+蔗糖20 g/L 30 g/L+琼脂 5.5 g/L6.5 g/L。将4.3获得的丛生 芽分切成芽块至继代增殖培养基中，置于每天光照10 h12 h， DB 34/T 3719 2020 4 光照强度约2000 lx ，培养温度22 25 的条件下培养，多次反复切 割进行继代增殖培养，直至得 到健壮丛生芽。 8 生根培养 生根培养基为1/2MS+NAA0. 01 mg/L0.02 mg /L+蔗糖20 g/L + 琼脂5 .5 g/L 6.
9、5 g/ L。将4.4获 得的高度约为2.5 cm3.5 cm的健壮芽分切接种至生根培养基中，接种后先在2225左右条件下暗 培养 0 d5 d，然后置于光照10 h12 h，光照强度 2000 lx，温度为2225 左右的培养室中培 养30 d 35 d 即可出瓶。 9 炼苗 9.1 生根苗移植条件 在培养容器中生长的根、茎、叶俱全的完整植株，苗高3.5 cm 5.5 cm，基部长出3 根5根不定 根时，即可进行炼苗。 9.2 炼苗方法 将培养容器松开容器盖放置在有散射光的温室中3 d5 d，温度控制在（25 5）。 10 移植 10.1 移植时间 生根瓶苗一般在春季（3月5月）或秋季（9月
10、11月）炼苗移植为宜。 10.2 栽培基质 泥炭土、 园土及珍珠岩按 5： 3： 2 的比例混配， 用 75可湿性多菌灵粉剂 1000 倍溶液喷透混匀， 装入穴盘中并稍压实待用。 10.3 洗苗 取出组培苗，放入自来水中将表面培养基漂洗干净，并用 75 可湿性多菌灵粉剂 1500 倍溶液浸 泡 20 min30 min，最后用自来水冲洗一次。操作过程中注意轻拿轻放。 10.4 移植方法 在穴盘基质上打孔，孔径 1 cm 左右，孔深 3 cm 。将洗净的组培苗植入孔中，保持根系舒展。 10.5 摆放 穴盘苗按移植日期在温室苗床上整齐摆放。 11 苗期管理 11.1 缓苗期管理 DB 34/T 3
11、719 2020 5 缓苗期大约 15 天左右。温度应控制在 153 0；每天定期给幼苗喷雾保湿，叶片周围湿度保 持在 7590；遮光率 70左右。 11.2 幼苗期管理 待15 d 长出新叶、新根后便进入温室正常管理。温室大棚相对湿度保持在 6070。 11.3 施肥 移植 4 周8 周内，每周可喷施高氮型叶面肥（N：P：K =40：20：20）)一次，稀释浓度为 2000 倍液。8 周后视植株生长情况，调整施肥的肥料种类、浓度和次数。 12 质量标准 12.1 组培苗质量标准 在培养容器中生根培养 30天35 天，生根苗达表1合格苗标准即可出瓶。 表1 染井吉野樱组培生根苗质量标准 类目
12、质量要求 株形 苗粗壮、挺直有活力，叶片大小协调 根系 有不定根 3条5 条，根长适中色白健壮 苗高 3 cm8 cm 叶色及数量 叶正常，叶色具母本特性，有光泽，4片6 片 整齐度 同一培养周期，90以上的苗高度一致 有无污染 无污染或培养基少量点状污染 有无病虫害 无 12.2 组培穴盘苗的质量标准 温室培育40 d 后，穴盘苗达表2合格苗标准即可出圃。 表2 染井吉野樱穴盘苗质量标准 类目 质量要求 株形 苗矮壮墩实、挺拔，株形饱满、完整 根系 有完整而发达的根系，根系充满穴盘孔 苗高 10 cm15 cm 叶色及数量 叶色泽正常，具母株品种特性，4片6 片 整齐度 同一批次 95以上的
13、苗高度一致 纯度 变异率低于 5 有无病害 无 有无虫害 无 13 包装、标签和运输 13.1 包装 DB 34/T 37 6 13.1.1 组 13.1.2 琼 过 25泡 沫 13.1.3 无 纸箱包装， 13.1.4 穴 宜使用托 盘 13.2 标 签 注明 树 植物检疫 证 理等的苗 木 13.3 运 输 装车 时 到达目的 地 14 档案 记 在林 木 映生产经 营 按照 LY/T 19 2020 组 培苗产品按 琼 脂苗包装： 琼 沫 箱应加冰 袋 无 琼脂苗包装 超过 25 泡 穴 盘苗包装： 盘 。 签 树 种、品种、 证 明编号、苗 批 木 进行备注） 输 时 切勿倒置， 用
14、 地 。 记 录管理 木 种苗生产 经 营 种苗的来 源 2289 的规 定 照客户（或 者 琼 脂苗保留 在 袋 。为防止 上 ：生根组培 苗 泡 沫箱应放 冰 穴盘装在小 纸 苗龄、原产 地 批 号、备注 。按照 LY/ T 用 厢式货车 运 经 营活动中形 成 源 、产地、数 量 定 执行。 者 订单）要 求 在 培养容器 中 上 下倒置， 运 苗 洗去琼脂 后 冰 块。 纸 箱内，再 将 地 、产地、 （对于进口 苗 T 2290 的 规 运 输以避免 日 成 的具有保 存 量 、质量与 销 求 包装。 中 ，培养容 器 运 输时可使 用 后 ，先装入 小 将 小纸箱装 入 质量指标、
15、 苗 木、转基 因 规 定执行。 日 晒、 雨淋， 运 存 价值的文 字 销 售去向、 销 器 整齐摆放 于 用 托盘。 小 塑料盒（ 袋 入 大纸箱内， 生产日期、 因 材料繁殖 的 运 输途中温 度 字 、图表、 声 销 售日期等 内 于 泡沫箱， 箱 袋 ），再放在 每箱装 3 个 林木种子 生 的 苗木、授权 度 保持 10 声 像等不同 形 内 容，保证 生 箱 外再用纸箱 在 泡沫箱里， 箱 个 4 个穴盘 生 产经营许 可 品种苗木以 及 25， 应 在 形 式的记录， 能 生 产经营过 程 包装，超 箱 外再用 ，运输时 可 证编号、 及 药剂处 在 5 d 内 能 真实反 程 可追溯。
