1、 ICS 65.020.20 B 61 DB32 江苏省 地 方 标 准 DB 32/T 3889 2020 河滩冬青组织培养技术规程 Technical regulation for tissue culture of Ilex metabaptista 2020 - 10 - 13 发布 2020 - 11 - 13 实施 江苏省市场监督管理局 发布 DB32/T 3889 2020 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准由江苏省林业局提出 并归口 。 本标准 由 江苏省林业科学研究院起草。 本标准主要起草人： 张敏 、 陈庆生 、 周鹏 、 黄婧 、
2、郝明灼 、 李飞。 DB32/T 3899 2020 1 河滩冬青组织培养技术规程 1 范围 本标准规定了河滩冬青组织培养的母株选择、外植体选择与处理、初代培养、 继代增殖 、瓶外生根 培养、增殖苗扦插、插后管理 和记录。 本标准适用于河滩冬青 的组培快繁。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用 于本标准。 LY/T 1882 2010 林木组织培养育苗技术规程 3 母株选择 选择河滩冬青优树株系或无性系分株。 4 外植体选择与处理
3、4.1 选择 在 4 月 6 月，选择连续 3 d 以上的晴天， 从母株上剪取生长健壮无病虫害的当年生萌芽条作为外 植体，截取部位以萌芽条的中、下部为宜，规格以长度 10 cm 15 cm、直径 3 mm 左右为宜。 4.2 灭菌 用中性洗洁精 洗净外植体，并用自来水冲洗 10 min 15 min。 在超净工作台 上 ，用 75 %乙醇溶液 消 毒 外植体 30 s，无菌水 冲洗 2 次；再用 10 %次氯酸钠溶液浸泡 外植体 8 min 10 min，无菌水 漂洗 2 次， 每次 5 min，随后置于灭 菌 处理过的 滤纸上吸去表面水分 。 5 初代培养 5.1 培养基 诱导培养基： MS
4、+ 0.2 mg/L ZT +2.0 mg/L 6-BA + 0.5 g/L 活性炭， pH5.7。 培养基制备按照 LY/T 1882 2010的规定进行。 5.2 诱导培养 将经 灭菌 处理的外植体剪去接触 灭菌 液的伤口部位，切成约 1.0 cm 带芽茎段，接种在含有诱导培 DB32/T 3899 2020 2 养基的培养瓶中，培养温度为 24 26 ，光照强度为 1500 lx 3000 lx，光照时间为 12 h15 h。培养 30 d，长成 6 cm 8 cm 高的无菌试管苗。 6 继代增殖 6.1 培养基 继代培养基： MS+ 4.0 mg/L ZT + 0.2mg/L IBA
5、+ 活性碳 0.5 g/L， pH5.7。 培养基制备 按照 LY/T 1882 2010的规定进行。 6.2 继代培养 将诱导培养的试管苗 剪成 1 cm 2 cm 带芽茎段 垂直 接种于继代培养基。培养温度为 24 26 ， 光照强度为 1500 lx 3000 lx，光照时间为 12h15h。每隔 50 d 继代 1 次。 7 瓶外生根培养 7.1 设施 宜在温室进行培养。 7.2 容器 宜采用 塑料穴盘，穴 孔 呈倒锥形， 口径约 4.5 cm，高约 5 cm。 旧穴盘需 清洗 消毒后才可使用。 7.3 基质 基质选用 pH 6.2 pH 6.8 的草炭。 7.4 基质的消毒处理 用
6、0.2%高锰酸钾和 0.2%多菌灵交替喷洒扦插基质至完全湿润，用薄膜覆盖堆捂，待使用前 2 d 3 d 揭膜晾晒，装入容器后即可扦插。 8 增殖苗扦插 8.1 插条处理 选择生长健壮的增殖苗，剪去芽苗根部膨大部分，清水清洗根部，按单株剪下，每株剪成 3 cm4 cm 带芽茎段 作为插条。 8.2 扦插 插条基部采用 500 mg/L IBA浸泡 30 min，处理后用镊子将组培苗基部插入基质，深度为 0.8 cm 1.0 cm。 8.3 覆膜 扦插后浇透水，在穴盘上覆盖保鲜膜，保温保湿。 DB32/T 3899 2020 3 9 插后管理 9.1 环境控制 置于温度 20 30 、光照 2 000 lx 2 500 lx、光周期 16 h/d、湿度 80%的环境条件下培养， 2周 3周后 揭膜 。 9.2 水肥管理 每隔 3 d 浇一次水，每两周喷一次叶面肥， 喷施浓度为 0.1 % 0.3 % 的尿素溶液。 9.3 病 害防治 每月喷一次杀菌剂，宜采用 0.1%的多菌灵和百菌清混合药剂。 9.4 出苗 苗高 10 cm15 cm， 根系发达 ，无病虫害，即可出苗。 10 记录 根据 组织培养 技术规程内 容进行 记录 ，按时填写，做到准确无误 ，记录保存 2年以上。 _
