1、ICS 65.020.01 B23 DB32 江苏省 地 方 标 准 DB 32/ T 3863 2020 甘薯 抗 茎线虫病鉴定技术规程 Technical regulation for evaluation on sweetpotato resistance to stem nematode disease 2020 - 10 - 13 发布 2020 - 11 - 13 实施 江苏省市场监督管理局 发布 DB32/T 3863-2020 I 前 言 本 标准按 照 GB/T 1.12009给出的规则起草 。 本 标准 由江苏徐州甘薯研究中心提出 。 本标准有 江苏省农作物标准化技术委员会
2、归口 。 本 标准 起草单位：江苏徐州甘薯研究中心。 本 标准 起草人： 孙厚俊 、 谢逸萍 、 张成玲 、 杨冬静 、 徐振、 赵永强 、 马居奎 、 谢睿寰、 唐伟、 孙井 康 。 DB32/T 3863-2020 1 甘薯 抗 茎线虫病鉴定技术规程 1 范围 本 标准 规定了甘薯品种 （系） 对茎线虫病抗性鉴定的鉴定方法 、 抗性 评价标准 和鉴定记载表格 。 本 标准 适用于甘薯品种 （系） 对茎线虫病抗病性的 田间自然诱发 鉴定 和室内接种 鉴定。 2 规范性引用 标准 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡 是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件
3、，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4406 种薯 GB 7413 甘薯种苗产地检疫规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本 文件 。 3.1 感病 对照品种 susceptible control variety 为检验试验的可靠性，在品种 抗病性 鉴定时附加 的 已知抗性 为感病 的品种 ，本标准中 感病对照品种 为栗子香 。 3.2 人工接种鉴定 evaluation of artificial inoculation 用人工繁殖或 收集病原 线虫 ，按一定量接种，创造发病条件，根据 茎线虫病 发病程度确定品种抗病 性。 3.3 高温愈合 heat treated
4、to wound healing 在甘薯入窖初期，采用人工加温方法促进伤口迅速愈合的一种措施。 3.4 相对病情指数 将 供试品种（系）的病情指数与高感对照病情指数 进行 比较 ，经过公式计算 而 换算 出的 病情指数。 3.5 体积 比 DB32/T 3863-2020 2 人工 接种鉴定时茎线虫侵染 的体积与薯块体积 的比值。 4 鉴定方法 4.1 自然诱发 鉴定 4.1.1 病圃选择 选择排灌方便，肥力中等，甘薯茎线虫病发生较重且均匀的田块 作为鉴定圃 。 4.1.2 薯苗准备 将符合 GB 4406要求的种薯在无病苗床排种育苗，将待鉴定品种薯苗离苗床土层 3 cm 5 cm剪下， 长度
5、 20 cm 25 cm。外寄鉴定材料应按照 GB 7413要求进行检疫。每品种剪取三组薯苗，每组 6株 8株， 按名单编号分别挂上名称、编号、试验重复的牌子，备用。 4.1.3 栽种 及管理 5月上中旬起垄栽种 ，垄宽 75 cm 85 cm，每垄划分成不同的小区，小区之间留隔离部分 50 cm。 采 用 “Z”字形方式栽种，试验设 3次重复，随机区组排列， 每 重复 供试品种 （系） 6株 8株 ，株距 23 cm 25 cm， 选用 栗子香 为 高感 对照品种，每 隔 10个鉴定品种 （系） 栽种栗子香一垄 ，栽种后正常管理。 4.1.4 病情调查与分级 10月中旬 进行调查薯块发病情况
6、。人工将薯块刨出，用刀将薯块横切两刀， 目测 线虫 侵染的面积 ， 根据侵染横截面积 进行分级， 每个薯 块均需调查，记载发病情况 。 分级标准如下： 0 级： 无病 ； 1 级： 0% 为害面积占薯块横切面积 比率 25%； 3 级： 25% 为害面积占薯块横切面积 比率 50%； 5 级： 50% 为害面积占薯块横切面积 比率 75%； 7 级： 75% 为害面积占薯块横切面积 比率 100%。 4.1.5 病情指数 及防治效果 计算 依 据病情调查情况，按式（ 1）计算病情指数。 式中： DI-病情指数； Ni-第 i 病害级别的薯块数； i -为害级别值； M- 调查的总薯块数。 依据
7、病情指数结果，按式（ 2）计算 相对病情指数 。 相对病情指数 精确至 0.1，对照品种 病情指数 为鉴定圃中所有对照的平均 病情指数 。 4.1.6 鉴定有效性判断 田间鉴定对照品种的平均病情指数大于 60，鉴定 结果 判定有效。 DB32/T 3863-2020 3 4.2 室内 接种 鉴定 4.2.1 病原线虫 分离及消毒 人工采集病薯块，采用贝曼漏斗法分离线虫。 将分离好的线虫 用 400 目筛网过滤， 筛网内收集线虫， 用灭菌水冲洗 3 次，放入 0.1%青霉素 +0.1%链霉素的消毒液中， 4 环境放置 12 h，用 400 目 筛网 过滤 ， 灭菌水冲洗 3 次， 灭菌水 配成
8、200 条 /ml 的线虫悬浮液备用。 4.2.2 鉴定材料准备 选用大小 300 g 400 g薯块作为鉴定用薯块，每个供试品种 （系） 选 3块 ， 洗净晾干后编号备用。选 用栗子香为高感对照品种。 鉴定薯块随机或顺序排列在 80 cm40 cm的塑料筐内， 每筐放置对 照品种薯 块 2个 3个， 每份鉴定材料重复 3次，每重复 2个薯块。 接种前用 75%酒精对薯块表面进行消毒处理。 4.2.3 接种 材料 接种时需要 5 mm螺纹打孔器， 12 cm玻璃培养皿若干套，手术刀、手术镊各 1把， 1 ml移液枪一 支 及枪头若干， 酒精灯 1只， 电磁搅拌器 1台。将打孔器、培养皿、烧杯、
9、手术刀、手术镊灭菌后备用。 4.2.4 接种方法 用打孔器垂直在薯块中部打孔，深度至薯块中 下 部 ，用移液枪将 1 ml配好的线虫悬浮液加入孔中， 将打出的薯条切除 下方 1.5 cm，再用剩余薯条 封住孔口，用融化的石蜡密封孔口缝 隙，放入用 75%酒精 消毒过的塑料筐内。 接种后将筐置于 26 28 鉴定室内保湿 培养 。 线虫悬浮液应处于搅拌状态，且 每打孔一个薯块后 打孔器 需用酒精灯消毒。 4.2.5 病情调查 接种后 45 d调查薯块发病情况。 先将薯块沿打孔部位横切，分别量取横切面薯块直径和线虫侵染直 径，再将薯块沿中心纵切，量取薯块纵切面的薯块长度和线虫侵染长度 。 4.2.
10、6 发病体积比计算 依据病情调查结果，按式（ 3）计算 茎线虫病发病体积 比 ： 按式（ 4）计算 相对 比 ： 品种 （系） 体积比 精确至 0.1%。 5 抗性评价 标 准 5.1 自然诱发鉴定评价标准 根据 相对病情指数 评价甘薯茎线虫病抗 侵入性 ，将甘薯品种 （系） 划分为 免疫、 高抗、中抗、高感 ， 4个类型，评定标准如下： 免疫： 相对病情指数为 100； 高抗： 70相对病情指数 100； 中抗： 30相对病情指数 70； 高感： 0相对病情指数 30。 DB32/T 3863-2020 4 5.2 室内接种鉴定评价标准 根据 品种（系） 侵染比评价甘薯茎线虫病抗 扩展 性，
11、将甘薯品种 （系） 划分为免疫、高抗、中抗、 高感， 4个类型，评定标准如下： 免疫： 相对体积比 100% 高抗： 70%相对体积比 100%； 中抗： 30%相对 体积比 70%； 高感： 0相对体积比 30%。 6 鉴定记载表格 甘薯抗茎线虫病鉴定记载表格见表 1和表 2。 表 1 甘薯抗茎线虫病鉴定记载表 （自然诱发鉴定） 编号 品种（系 名称） 重复 病 情 级 别 病情 指数 相对病 情指数 平均相 对病指 抗性 评价 0 1 3 5 7 栽种日期： 调查日期： 鉴定人（签字）： 表 2 甘薯抗茎线虫病鉴定记载表（室内接种鉴定） 编号 品种（系 名称） 重复 发病情况（ cm） 体积比 相对体 积比 平均 相对体积比 抗性评价 薯块 直径 病斑 直径 薯块 长度 病斑 长度 接种日期： 调查日期： 鉴定人（签字）： _
