1、ICS 65.020.20 B 61 DB32 江 苏 省 地 方 标 准 DB32/T 3901 2020 脱毒矮化自根砧苹果苗木繁 育 技术规程 Technical regulation for propagation apple seedings with virus-free dwarf rootstocks 2020-10-13 发布 2020 - 11-13 实施 江苏省市场监督管理局 发布 DB32/T 3901 2020 I 前 言 本 标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草 。 本标准由 南京农业大学 提出 。 本标准 由江苏省园艺标准化委员会 归口。 本标准起草
2、单位： 南京农业大学 、 江苏徐淮地区徐州农业科学研究所 、江苏省大沙河现代农业综合 开发集团有限公司。 本标准主要起草人： 渠慎春、 赵林、 张忠伟 、 侯应军 、 陈卫平、 王磊彬 、高志红 。 DB32/T 3901 2020 1 脱毒矮化自根砧苹果苗木繁育 技术规程 1 范围 本标准规定了 采穗圃营建 、 矮化砧木的选择 、 砧木苗培育 、 嫁接及定植 、 嫁接苗管理 、 嫁接苗出圃 等矮化自根砧苹果苗木繁育技术。 本标准适用于脱毒苹果矮化自根砧苗木的繁育。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日 期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引
3、用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 8370 苹果苗木产地检疫规程 GB 9847 苹果苗木 GB/T 12943 2007 苹果无病毒母本树和苗木检疫规程 NY/T 1085 2006 苹果苗木繁育 技术 规程 3 采穗圃营建 按 NY/T 1085 2006 规定执行 。 4 矮化砧木的选择 矮化砧木可以选择 M9T337、 M9、 B9等。 5 脱毒 砧木苗及苹果品种苗 获取 见附录 A。 6 砧 木 苗培育 6.1 砧木组培苗移栽 经过病毒检测的脱 毒组培苗进行炼苗并移栽到营养钵中，然后在设施大棚内驯化 培育到 30 cm高 ， 根颈部位粗 在 0.5 cm左右
4、。 按株距 30 cm、行距 150 cm，把以上驯化苗木移栽到 田间培育。 6.2 第一年管理 6.2.1 水肥管理 DB32/T 3901 2020 2 生长季根据天气情况灌水， 保持土壤相对含水量 75%左右 。施肥 2 3次（最后一次时间为压条后）， 每次施肥量为复合肥 20 kg/亩 30 kg/亩，根据长势追加适量尿素，同时补充叶面肥 (顶绿螯合铁 6000 倍 +优聪素 700倍 )。 6.2.2 除草 杂草高于 5 cm时， 应 进行人工除草。 期间可以适当增加 短截促进分枝的处理，以保证后面压条的枝 条数量。 6.2.3 病虫害防治 按 NY/T 1085 2006规定执行
5、。 6.2.4 压条 6.2.4.1 时间 10月中下旬（新梢停长后）。 6.2.4.2 方法 6.2.4.2.1 修剪 压条前剪去梢部不充实部分，同时剪去长势弱、生长方向与压条方向相反的侧枝（剪 到离侧枝的基部 3 cm 5 cm处） 。 6.2.4.2.2 开沟 沿砧木行 两侧开宽 50 cm左右（ 宽度须足够容纳全部压条）、 深约 10 cm的 浅沟。 6.2.4.2.3 压条 采用顺行编织， 辅以竹签别枝的办法将所有大枝错落压实，必须将全部枝条平卧在浅 沟底部。 6.2.4.2.4 覆土 压条后用细土将裸露在外的枝条覆盖。 6.3 第二年管理 6.3.1 水肥管理 在苗木高 度 10
6、cm 15 cm和 覆锯末之前分两次进行追肥，每次施复合肥 20 kg/亩 30 kg/亩。覆完 锯末以后，适时灌水 ，自根砧压条繁殖，水分是生根的关键，始终保持土壤相对含水量 75%左右。 6.3.2 覆锯末 6.3.2.1 第一次覆 腐熟 锯末 子 砧 苗 高度 30 cm左右时开始第一次覆锯末，厚度 5 cm 10 cm。 6.3.2.2 第二次覆 腐熟 锯末 子砧 苗 高 度 40 cm 45 cm时开始第二次覆锯末，厚度 5 cm 10 cm。 以后 多次覆盖，直至锯末厚度达到 50 cm。 6.3.2.3 覆土 每次覆锯末后，持续灌水，待锯末湿度达到手握成团时开始覆土，覆土 高度
7、3 cm 5 cm。 6.3 出圃 秋季落叶后即可出圃，可采用机械出苗， 按 GB 9847分 级并贮藏。 7 嫁接及定植 7.1 接穗准备 落叶后剪取脱毒优良苹果品种芽体饱满的一年生中庸枝条为接穗，沙藏或保湿冷藏。 DB32/T 3901 2020 3 7.2 嫁接时期和方法 嫁接时期为春季 ，方法为枝接。采用坐地嫁接或室内嫁接；砧木粗度要 求 0.8 cm 1.0 cm。 7.3 嫁接苗定植 将嫁接好的苗木栽植到苗圃中，栽植密度为株距 30 cm、行距 80 cm。 8 嫁接苗管理 8.1 成活率检查 嫁接 后 10天检 查成活率，及时补接。 8.2 嫁接苗修剪 秋季落叶后嫁接苗剪除分枝，
8、第二年当 植株长至 120 cm时定干，同时连续施用整枝灵 2次，间隔 1 周，促进分枝，并立支架绑缚。第一次整枝灵亩用 12 ml，兑水 20 kg喷雾，第二次亩用 13 ml，兑水 20kg 25kg喷雾 ， 要喷在枝条的嫩尖和顶芽上。 8.3 肥水管理 同 6.1.1。 8.4 病虫害防治 同 6.1.3。 9 嫁接苗出圃 嫁 接苗在苗圃中生长 2年，当苗木分枝达到 5个以上，嫁接口上 10 cm处苗木直径达到 1.5 cm以上可 以出圃。按 GB 8370进行苹果苗木产地检疫，检疫合格可以出 圃。 10 记录 对生产全过程进行记录，生产档案保存 2年。 DB32/T 3901 2020
9、 4 附 录 A （ 规范 性附录） 脱毒 苹果 砧木苗及苹果品种苗的获得 A.1 苹果品种和砧木初代组培苗获得 A.1.1 培养基的配制 采用 1/2MS培养基，培养基 成分为： 1/2MS + 1.0 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA + 1g/L PVP+30g/L蔗糖 +7g/L琼脂。 A.1.2 植物材料准备和灭菌接种 剪取幼苗顶部 1 cm 2 cm（含生长点）茎段作为外植体进行初代培养。用 75 %酒精处理 45 s，然后 再用 10 %过氧化氢消毒 20 min后接种。 A.2 组培苗继代增殖扩繁 继代增殖扩繁培养基为 MS + 0.5 mg/L 6-BA+0.
10、1 mg/L IBA + 30 g/L蔗糖 +7 g/L 琼脂， pH=5.8。 A.3 苹果茎尖超低温脱毒处理 A.3.1 茎尖预培养 取组培苗 约 2 mm左右的茎尖，接种于 MS+6.0 g/L琼脂粉 +0.75 mol/L蔗糖的培养基中， 25暗培养 3 d。 A.3.2 装载 取预培养过 的茎尖，放入装载溶液中，装载溶液为 MS+2 mol/L甘油 +0.75 mol/L 蔗糖， pH=5.8。处 理温度为 25 ，处理时间为 60 min。 A.3.3 超低温处理 将装载过的茎尖转移 到 pH5.8的 PVS-2溶液中，处理温度为 0 ，处理时间为 2 h。然后转入 10 mL 冻
11、存管中，直接投入液氮中处理 1 h。 PVS-2 溶液为： MS + 30 % (W/V) 甘油 +15 % (W/V) 聚乙二醇 +15 % (W/V) DMSO (二甲基亚砜 ) +0.4 mol/L蔗糖 。 A.3.4 解冻 从液氮中取出冻 存管，快速转移到 40的水浴锅中，处理 2 min。然后取出茎尖放入 MS+1.2 mol/L 的蔗糖溶液中 20 min，直到茎尖漂 浮在液体表面。 A.3.5 茎尖再生培养 将处理过的茎尖转入 增殖培养基中，暗培养 1周后进行光照培养。一个月后将再生株系进行继代扩 繁，增殖扩繁培养基为： MS + 0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L I
12、BA + 30 g/L蔗糖 +6 g/L 琼脂， pH5.8。 DB32/T 3901 2020 5 A.4 再生植株的病毒检测 按 GB/T 12943 2007进行苹果无病毒母本树和苗木检 测 ，根据 GenBank登录的 ACLSV、 ASGV、 ASPV、 APMV、 ASSVD等 5种病毒外壳蛋白序列设计引物，结合苹果内参基因 TUB特异性片段分别进 行 PCR扩 增验证，从而检测再生植株是否含有病毒。 A.5 扩繁、炼苗和移栽 经过病毒检测的无病毒组培苗进行扩繁、炼苗和移栽。 A.6 脱毒原种的保存 脱毒原种的保存的方 式有田间原种保存圃保存和室内组培保存。 A.6.1 田 间原种保存圃保存 无病毒原种树定植于有防虫保护网设备的网室内或 专门的温室里，并远离有病毒潜伏来源的果园 2 km以上。 A.6.2 组培保存 由组织培养方法获得的无病毒原种可以保留在瓶内继代培养。 如果需用接穗，可以扩繁几代， 移至 田间。 A.6.3 病毒检测 无病毒原种树 每 5年应进行 1次病毒检测，发现问题即剔除。 _
