1、ICS 65.020.20 B 61 DB32 江苏省 地 方 标 准 DB 32/ XXXXX 2020 构树组织培养技术规程 Technical regulation for tissue culture of Broussonetia papyrifera 2020 - XX - XX 发布 2020 - XX - XX 实施 江苏省市场监督管理局 发布 DB32/T XXXX 2020 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标 准由江苏省林业局提出 并归口 。 本标准 由 江苏省林业科学研究院起草。 本标准主要起草人： 陈庆生 、 黄婧 、 张敏 、 蒋
2、泽平 、 周鹏 、 陆青 、 薛欢。 DB32/ XXXXX 2020 1 构树组织培养技术规程 1 范围 本标准规定了构树组织培养的母株选择、外植体选择与灭菌、诱导培养、 增殖 培养、瓶外生根 培 养 、 增殖苗扦插、插后管理和记录 。 本标准适用于构树 的 组织培养 。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用 于本标准。 LY/T 1882 2010 林木组织培养育苗技术规程 NY/T 393 2013 绿色食品 农药使用准则 3
3、母株选择 选取生长 健壮、 无病虫害的构树 单株 。 4 外植体选择与灭菌 4.1 外植体采集 在 4月 7月，选择连续 3 d 以上的晴天， 采集母株上萌发的 嫰枝 作为外植体。 4.2 外植体表面灭菌 4.2.1 清洗 用 中性 洗洁精 将外植体 洗净，并用自来水冲洗 15 min 20 min。 4.2.2 灭菌 在超净工作台 上 ，用 75 %乙醇溶液 消毒 外植体 5 s10 s，无菌水 漂洗 1 次 2 次；再用 10 %次氯酸 钠溶液浸泡 外植体 6 min8 min，无菌水 漂洗 4 次 6 次，每次 5 min；将漂洗后的外植体 置于无菌滤纸 上吸干表面水分。 5 诱导培养
4、5.1 培养基 诱导培养基参见附录 A。 培养基制备 按照 LY/T 1882 2010规定进行。 5.2 接种 DB32/ XXXXX 2020 2 将外植体修剪为 2 cm的带芽茎段 ， 垂直 接种到诱导培养基上。 5.3 培养条件 诱导培养的 温度控制在 23 25 ，光照强度为 1500 lx3000 lx，光照时间 为 8 h/d12 h/d，培养室 湿度为 70 %80 %。 5.4 转接 诱导培养 25 d30 d后， 转接到 6.1增殖培养基上进行增殖培养。 6 增殖 培养 6.1 培养基 增殖 培养基参见附录 A。 培养基制备 按照 LY/T 1882 2010规定进行。 6
5、.2 接种 将 诱导培养的试管苗剪成 1 cm2 cm的带芽茎段， 接种到增殖培养基上。 6.3 培养条件 增殖 培养 的 温度控制在 23 25 ，光照强度为 1500 lx3000 lx，光照时间 为 10 h/d16 h/d， 培养室 湿度为 70 %80 %。 6.4 继代培养 增殖 培养 25 d35 d后 ， 转接至新鲜的增殖培养基。 7 瓶外生根 培养 7.1 设施 宜 在 温室进行 培养 。 7.2 容器 宜采用塑料穴盘，穴 孔 呈倒锥形，口径约 4.5 cm，高约 5 cm。 旧穴盘 需经消毒后才可使用。 7.3 基质 基质 选 用 pH 6.2pH 6.8的 草炭，用 0.
6、1 %高锰酸钾溶液将基质淋透消毒，分装到穴盘 内 。 8 增殖苗扦插 8.1 插条 处 理 选择生长健壮、 高 6 cm8 cm 且叶片展开的 增殖 苗， 清水 洗净 ， 剪去芽苗根部膨大部分， 按单株剪 下，每株剪成 3 cm4 cm 带芽茎段 作为插条。 插 条 基部（ 0.5 cm1.0 cm）速蘸 1000 mg/L 萘乙酸（ NAA） 溶液 5s 以促进生根 。 DB32/ XXXXX 2020 3 8.2 扦插 用镊子将插条基部插入基质， 扦插深度以 1 cm 为宜。 8.3 覆膜 扦插后浇透水，在穴盘上方覆盖塑料薄膜或保鲜膜。 9 插后 管理 9.1 环境管理 穴盘 置于温室中培
7、养， 温度为 20 30 ， 以 25 为宜， 光照强度为 2000 lx2500 lx，光照时间 为 12 h/d 13 h/d，空气 湿度 75 %80 %。 9.2 揭膜 培养 10 d15 d后撤去塑料薄膜或保鲜膜 。 9.3 水肥管理 每隔 3 d浇水 1次， 每两周喷一次叶面肥 。 9.4 病虫害防治 每月喷 1次 药剂 ，宜采用 75%百菌清可湿性粉剂 700800倍 液， 50%马拉松乳剂 1000倍 液。 防治方法 按照 NY/T 393 2013规定执行。 9.5 出苗 苗 高 15 cm20 cm，活叶片数 4片以上，根系生长健壮，无病虫害，即可出苗。 10 记录 根据
8、组织培养 技 术规程内容进行 记录 ，按时填写，做到准确无误 ，记录保存 2年以上。 DB32/ XXXXX 2020 4 附 录 A （规范性附录） 构树 组织 培养基配方 表 A.1 构树组织培养基配方表 母液名称 药品名称 诱导培养基（ mg/L） 增殖 培养基（ mg/L） 大量元素 KNO3 1800 1800 NH4NO3 720 720 KH2PO4 500 500 CaCl22H2O 100 100 MgSO47H2O 370 370 微量元素 MgSO44H2O 22.3 22.3 ZnSO47H2O 8.65 8.65 H3BO3 6.2 6.2 NaMoO42H2O 0.
9、25 0.25 KI 0.83 0.83 CuSO45H2O 0.025 0.025 CoCl26H2O 0.025 0.025 铁盐 FeSO47H2O 27.8 27.8 Na 2EDTA 37.2 37.2 有机质 氨基乙酸 2.0 2.0 盐酸硫胺素（ VB1） 0.1 0.1 盐酸吡哆醇（ VB6） 0.5 0.5 烟酸（ VB3） 0.5 0.5 肌醇 100 100 糖 蔗糖 30000 30000 植物生长调节剂 6-苄氨基嘌呤（ 6-BA） 0.2 1.0 萘乙酸（ NAA） 1.0 0.2 凝固剂 卡拉胶 6000 6000 注： FeSO47H2O应先与 Na2EDTA配制成络合物，然后才与其他溶液混合。 _
