1、ICS 65.020.20B16 DB23黑 龙 江 省 地 方 标 准DB23/T 28032021玉 米 茎 基 腐 病 抗 性 鉴 定 及 评 价 技 术 规 程 2021- 01- 25发 布 2021 - 02 - 24实 施黑 龙 江 省 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB23/T 28032021 I 前 言本 标 准 依 据 GB/T 1.1-2009的 编 写 规 则 起 草 。本 标 准 由 黑 龙 江 省 农 业 农 村 厅 提 出 。本 标 准 由 黑 龙 江 省 农 业 科 学 院 玉 米 研 究 所 、 东 北 农 业 大 学 、 中 国 农 业 科 学 院
2、作 物 科 学 研 究 所 起 草 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 杨 剑 飞 、 李 永 刚 、 扈 光 辉 、 王 天 宇 、 李 春 辉 、 龚 士 琛 、 李 国 良 、 付 立 新 、 王 明泉 、 任 洪 雷 、 胡 少 新 、 刘 畅 。 DB23/T 28032021 1 玉 米 茎 基 腐 病 抗 性 鉴 定 及 评 价 技 术 规 程1 范 围本 标 准 规 定 了 进 行 玉 米 茎 基 腐 病 抗 性 鉴 定 及 评 价 技 术 的 接 种 体 制 备 、 抗 病 性 鉴 定 圃 、 接 种 、 病 情 调查 、 抗 病 性 评 价 和 田 间 档 案 。本 标
3、准 适 用 于 栽 培 玉 米 （ Zea Mays L.） 自 交 系 和 杂 交 种 对 玉 米 茎 基 腐 病 的 田 间 抗 性 鉴 定 和 评 价 。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 条 款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为 本 标 准 的 条 款 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 随 后 所 有 的修 改 单 或 修 订 版 均 不 适 用 于 本 标 准 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。GB 4401.1-2008 粮 食 作
4、物 种 子 第 1部 分 ： 禾 谷 类NY/T 1248.7-2016 玉 米 抗 病 虫 性 鉴 定 技 术 规 范 第 7部 分 ： 镰 孢 茎 腐 病DB 23/T 017-2008 玉 米 生 产 技 术 规 程3 接 种 体 制 备3.1 培 养 基 制 备取 200g去 皮 马 铃 薯 块 ， 切 成 小 块 ， 加 入 800ml 1000mL 的 水 煮 沸 30min， 用 双 层 纱 布 过 滤 后 ， 用蒸 馏 水 补 足 1000mL， 加 入 20g 葡 萄 糖 ， 少 量 多 次 加 入 共 18g琼 脂 粉 ， 并 不 断 搅 拌 ， 分 装 至 锥 形 瓶 内
5、 ，然 后 将 其 放 置 于 温 热 灭 菌 器 中 121 灭 菌 20min， 将 培 养 基 倒 入 培 养 皿 中 ， 制 成 PDA 平 板 培 养 基 ， 备 用 。3.2 病 原 菌 准 备 取 病 健 交 接 部 分 的 组 织 ， 置 于 75%的 酒 精 中 浸 泡 2s 3s， 取 出 后 置 于 质 量 体 积 比 为 1%的 次 氯 酸 钠中 浸 泡 2min 3min， 再 经 无 菌 水 换 洗 ， 晒 干 后 转 移 至 PDA平 板 培 养 基 中 ， 置 于 25 27 环 境 中 ， 黑暗 培 养 3d 后 挑 取 病 原 菌 至 试 管 中 保 存 。
6、 依 据 柯 赫 氏 法 则 进 行 致 病 力 测 定 ， 确 定 为 玉 米 茎 基 腐 病 病 原 菌的 菌 株 后 采 用 形 态 学 及 分 子 生 物 学 方 法 进 行 属 种 鉴 定 ， 从 比 例 占 绝 对 优 势 的 病 原 菌 中 选 取 致 病 力 较 强 的菌 株 作 为 接 种 的 目 标 菌 株 。3.3 孢 子 悬 浮 液 制 备从 试 管 中 挑 取 目 标 菌 株 ， 接 种 到 PDA平 板 培 养 基 上 ， 目 标 病 原 菌 在 PDA平 板 培 养 基 上 生 长 7d后 ，取 直 径 7mm的 菌 碟 接 种 到 高 粱 粒 培 养 基 （ 高
7、 粱 粒 用 开 水 煮 20min后 ， 转 移 至 三 角 瓶 中 121 灭 菌 45min）中 ， 每 个 三 角 瓶 中 接 种 5 个 7 个 菌 碟 ， 26 黑 暗 培 养 ， 每 天 振 荡 三 角 瓶 1 次 2 次 ， 震 荡 时 间 3min5min， 待 菌 丝 长 满 每 个 高 粱 粒 的 表 面 ， 然 后 用 无 菌 水 冲 洗 带 菌 的 高 粱 粒 ， 用 灭 菌 双 层 纱 布 过 滤 后 ， 利 用血 球 计 数 板 将 孢 子 悬 浮 液 浓 度 调 整 1 10 6孢 子 /ml， 室 温 保 存 ， 2d 3d内 使 用 。4 抗 病 性 鉴 定
8、 圃 DB23/T 28032021 2 4.1 鉴 定 圃 设 计鉴 定 材 料 采 取 随 机 排 列 ， 每 隔 50行 鉴 定 材 料 设 置 1组 已 知 抗 病 、 感 病 对 照 材 料 ， 对 照 选 用 玉 米 自 交系 齐 319（ 高 抗 ） 、 掖 478（ 高 感 ） 。 鉴 定 圃 设 计 符 合 NY/T 1248.7-2016标 准 。鉴 定 材 料 采 用 双 行 区 种 植 ， 小 区 行 长 5m， 行 距 0.65m， 植 株 密 度 为 75000株 /hm2。4.2 鉴 定 圃 播 种鉴 定 材 料 播 种 时 间 与 大 田 播 种 时 间 相 当
9、 ， 也 可 根 据 当 年 农 业 生 产 气 候 条 件 适 当 调 整 播 种 期 。 播 种 时期 符 合 DB 23/T 017-2008 标 准 。鉴 定 材 料 种 子 不 进 行 包 衣 处 理 ， 播 种 方 式 采 用 机 器 开 沟 ， 人 工 点 播 ， 每 穴 点 播 种 子 2粒 ， 出 苗 后 每穴 保 留 1株 健 康 的 植 株 。 种 子 符 合 GB 4401.1-2008标 准 。4.3 田 间 管 理 田 间 管 理 及 虫 草 害 防 治 与 大 田 生 产 相 同 ， 田 间 管 理 过 程 中 不 使 用 对 茎 基 腐 病 有 防 治 作 用
10、的 药 剂 ， 生产 过 程 符 合 DB 23/T 017-2008标 准 。5 接 种5.1 接 种 时 期接 种 时 期 为 玉 米 苗 期 ， 植 株 长 至 5片 7片 叶 时 。 接 种 可 全 天 进 行 。5.2 接 种 部 位 及 方 法在 植 株 靠 近 地 表 1.5cm 2.0cm处 ， 用 注 射 器 以 45 角 斜 向 下 插 入 茎 中 心 后 缩 回 0.2cm 0.5cm， 注 入1.5ml孢 子 悬 浮 液 。 接 种 后 进 行 常 规 田 间 管 理 。 6 病 情 调 查6.1 调 查 时 间在 鉴 定 材 料 接 种 25d后 ， 即 可 进 行
11、调 查 。 同 一 天 接 种 的 材 料 ， 应 在 同 一 天 内 完 成 调 查 。6.2 调 查 方 法调 查 时 根 据 玉 米 植 株 生 长 情 况 进 行 病 情 分 级 ， 病 情 分 级 应 按 表 1执 行 。 记 录 每 份 鉴 定 材 料 的 总 株 数和 各 发 病 级 别 株 数 。 表 1 玉 米 茎 基 腐 病 鉴 定 田 间 病 情 指 数 分 级 病 情 分 级 植 株 生 长 情 况0级 植 株 生 长 正 常 ， 无 症 状1级 叶 片 边 缘 有 轻 微 坏 死3级 植 株 略 微 矮 小 ， 畸 形 ， 外 缘 叶 片 有 轻 微 的 坏 死5级
12、植 株 矮 小 明 显 ， 有 轻 微 畸 形 外 缘 叶 片 基 本 上 缺 失7级 植 株 矮 小 明 显 ， 畸 形 明 显 ， 植 株 无 法 正 常 生 长 ， 心 叶 出 现 坏 死 DB23/T 28032021 3 9级 植 株 矮 小 显 著 ， 畸 形 严 重 ， 心 叶 坏 死 或 全 株 死 亡7 抗 病 性 评 价7.1 抗 病 性 评 价 方 法根 据 不 同 材 料 的 病 情 级 别 ， 计 算 每 份 鉴 定 材 料 的 病 情 指 数 ， 病 情 指 数 计 算 公 式 见 式 1。 ( ) 100( 9)A AN XDI N （ 式 1）式 中 ： DI代
13、 表 病 情 指 数 ； N A代 表 各 病 级 发 病 株 数 ， 单 位 为 株 ； XA代 表 相 对 病 级 数 值 ； N代 表 调 查 总 株数 ， 单 位 为 株 。鉴 定 材 料 的 抗 性 评 价 方 法 按 表 2执 行 。表 2 玉 米 对 茎 基 腐 病 抗 性 的 评 价 标 准病 情 指 数 （ DI） 抗 性DI 10.0 高 抗 Highly resistant （ HR）10.0 DI 20.0 抗 Resistant （ R）20.0 DI 40.0 感 Susceptible （ S）DI 40.0 高 感 Highly susceptible （ HS
14、）7.2 有 效 性 判 别 当 设 置 的 高 感 对 照 材 料 达 到 高 感 程 度 ， 该 批 次 鉴 定 视 为 有 效 。7.3 重 复 鉴 定当 鉴 定 材 料 初 次 鉴 定 结 果 抗 性 表 现 为 高 抗 或 抗 ， 应 在 第 二 年 进 行 重 复 性 鉴 定 。7.4 抗 病 性 评 价将 初 次 鉴 定 结 果 同 重 复 鉴 定 结 果 进 行 比 较 ， 以 记 载 的 最 高 病 情 指 数 为 准 ， 依 此 结 果 对 鉴 定 材 料 的 抗病 性 进 行 评 价 。8 田 间 档 案应 建 立 田 间 档 案 ， 内 容 包 括 ： 鉴 定 材 料 名 称 、 接 种 时 间 、 调 查 时 间 、 接 种 总 株 数 、 各 病 情 级 别 发 病株 数 、 病 情 指 数 和 抗 病 性 评 价 。
