1、ICS 65.020.20B 38黑 龙 江 省 地 方 标 准DB23/T 2735-2020水 稻 穗 颈 瘟 人 工 接 种 鉴 定 技 术 规 程 2020-12-03发 布 2021-01-02实 施黑 龙 江 省 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB23 DB23/T 2735-2020 I 前 言本 标 准 依 据 GB/T 1.1-2009 的 编 写 规 则 起 草 。本 标 准 由 黑 龙 江 省 农 业 农 村 厅 提 出 。本 标 准 起 草 单 位 ： 黑 龙 江 省 农 业 科 学 院 生 物 技 术 研 究 所 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 张 国 民
2、 、 马 军 韬 、 邓 凌 韦 、 赵 文 生 、 宋 显 东 、 张 丽 艳 、 王 春 荣 、 胡 亚 军 、 王 永力 、 张 齐 凤 、 高 洪 儒 、 张 君 、 王 南 博 、 任 洋 。 DB23/T 2735-2020 1 水 稻 穗 颈 瘟 人 工 接 种 鉴 定 技 术 规 程1 范 围本 标 准 规 定 了 水 稻 穗 颈 瘟 人 工 接 种 鉴 定 技 术 的 术 语 与 定 义 、 环 境 条 件 、 技 术 流 程 、 评 价 标 准 和 技 术档 案 。本 标 准 适 用 于 水 稻 资 源 、 品 种 （ 系 ） 等 材 料 对 穗 颈 瘟 抗 性 的 人 工
3、 鉴 定 。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文 件 。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。 GB 3095 环 境 空 气 质 量 标 准GB 5084 农 田 灌 溉 水 质 标 准GB 15618 土 壤 环 境 质 量 农 用 地 土 壤 污 染 风 险 管 控 标 准 （ 试 行 ）GB/T 15970 稻 瘟 病 测 报 调 查
4、 规 范NY/T 3257-2018稻 水 稻 稻 瘟 病 抗 性 室 内 离 体 叶 片 鉴 定 技 术 规 程3 术 语 与 定 义下 列 术 语 与 定 义 适 用 于 本 文 件 。3.1 穗 颈 瘟 和 枝 梗 瘟穗 颈 瘟 是 稻 瘟 病 的 一 种 形 式 ， 发 生 在 穗 颈 、 穗 轴 和 枝 梗 上 ， 初 期 为 暗 褐 色 小 斑 点 ， 后 逐 步 呈 环 状 或上 下 扩 展 ， 因 品 种 不 同 ， 病 部 分 别 呈 现 黄 褐 色 、 褐 色 或 黑 褐 色 。 早 期 发 病 大 多 形 成 全 白 穗 或 局 部 白 穗 ， 晚 期 发 病 则 谷 粒
5、 不 饱 满 ， 千 粒 重 下 降 。3.2 谷 粒 瘟谷 粒 瘟 是 稻 瘟 病 的 一 种 形 式 ， 发 生 在 谷 壳 和 护 颖 上 ， 早 期 发 病 ， 病 斑 呈 椭 圆 形 ， 较 大 ， 中 央 灰 白 色 ，以 后 可 逐 渐 扩 展 至 整 个 谷 粒 ， 造 成 灰 白 色 至 暗 灰 色 瘪 粒 。 后 期 发 病 ， 多 形 成 椭 圆 形 或 近 圆 形 斑 点 ， 褐 色至 红 褐 色 ， 严 重 时 谷 粒 不 饱 满 ， 米 粒 变 黑 。3.3 人 工 接 种在 适 宜 条 件 下 ， 通 过 人 工 操 作 将 接 种 体 置 于 水 稻 植 株 适
6、 当 的 部 位 并 使 之 发 病 的 过 程 。3.4 接 种 体能 够 侵 染 水 稻 植 株 并 引 起 病 害 的 病 原 体 。3.5 注 射 接 种 DB23/T 2735-2020 2 用 医 用 注 射 器 将 一 定 量 的 接 种 体 注 射 进 水 稻 植 株 体 内 的 接 种 方 法 。3.6 对 照 品 种在 人 工 接 种 鉴 定 时 以 全 感 水 稻 品 种 为 对 照 。3.7 抗 病 性植 物 体 所 具 有 的 能 够 减 轻 或 克 服 病 原 物 致 病 作 用 的 可 遗 传 性 状 。3.8 病 情 指 数一 种 评 价 植 物 病 害 发 生
7、 程 度 的 综 合 性 指 标 ， 包 括 植 物 病 害 的 发 病 率 与 严 重 度 。 其 中 ， 发 病 率 是 指 感病 样 本 数 占 调 查 总 样 本 数 的 百 分 率 ， 表 示 发 病 的 普 遍 程 度 ； 严 重 度 用 分 级 法 表 示 ， 即 将 发 病 的 严 重 程 度由 轻 到 重 划 分 出 若 干 个 级 别 ， 分 别 用 各 级 的 代 表 值 或 百 分 率 表 示 。3.9 水 稻 品 种水 稻 品 种 包 括 对 照 品 种 和 待 测 水 稻 材 料 。3.10产 量 损 失 率一 种 评 价 植 物 受 逆 性 条 件 影 响 后 产
8、 量 损 失 程 度 的 指 标 ， 包 括 未 发 病 植 株 产 量 和 发 病 植 株 产 量 。 以 穗为 单 位 ， 产 量 损 失 率 计 算 公 式 为 ： %100/)( BCBA .（ 1）式 中 ：A 产 量 损 失 率 ；B 同 一 小 区 内 未 发 病 穗 产 量 ， kg；C 同 一 小 区 内 接 种 发 病 穗 产 量 ， kg。 4 环 境 条 件鉴 定 时 的 环 境 条 件 ， 环 境 空 气 质 量 应 符 合 GB 3095 规 定 ； 土 壤 环 境 质 量 应 符 合 GB 15618 规 定 ； 农田 灌 溉 用 水 质 量 应 符 合 GB 5
9、084 规 定 。5 技 术 流 程5.1 鉴 定 圃 的 建 立 与 小 区 设 计选 择 易 发 病 环 境 条 件 的 较 为 中 间 的 整 块 田 块 ， 有 独 立 的 进 水 口 和 排 水 口 。 在 鉴 定 圃 内 种 植 对 照 和 待测 材 料 。 依 据 水 稻 材 料 的 数 量 ， 在 鉴 定 圃 内 布 局 若 干 个 小 区 ， 小 区 内 种 植 待 测 水 稻 材 料 ， 小 区 设 置 为 2行 区 ， 行 距 为 30cm， 株 距 为 12cm， 每 行 15蔸 ， 单 本 插 秧 。 根 据 试 验 目 的 ， 设 置 重 复 。5.2 田 间 管
10、理 水 稻 种 植 全 过 程 在 常 规 管 理 的 基 础 上 ， 创 造 有 利 于 稻 瘟 病 发 病 的 条 件 。 不 带 药 移 栽 ， 偏 重 施 用 氮 肥（ 一 般 情 况 下 比 生 产 用 氮 肥 增 加 30%左 右 ） ， 生 长 过 程 中 可 防 虫 、 除 草 ， 但 不 能 施 用 任 何 杀 菌 剂 。 在 水稻 生 长 的 中 后 期 ， 若 发 生 倒 伏 ， 需 及 时 地 搭 建 竹 架 。 DB23/T 2735-2020 3 5.3 接 种 鉴 定5.3.1 接 种 体 制 备将 稻 瘟 病 菌 接 种 在 燕 麦 片 番 茄 汁 琼 脂 培
11、养 基 上 ， 于 25 -27 条 件 下 培 养 5d-7d， 用 无 菌 水 轻 轻 洗下 菌 丝 （ 菌 丝 团 要 小 ） 和 分 生 孢 子 ， 将 其 悬 浮 液 均 匀 涂 于 另 一 新 的 平 板 培 养 基 上 （ 培 养 基 要 适 当 硬 一 些 ） ，每 皿 约 400l， 超 净 工 作 台 中 吹 干 。 置 于 25 培 养 箱 中 培 养 约 35-40h 至 培 养 基 表 面 长 出 一 层 稀 疏 的 气生 菌 丝 体 。 向 菌 落 上 加 少 量 无 菌 水 ， 用 棉 签 轻 轻 擦 去 表 面 的 气 生 菌 丝 ， 并 用 水 将 培 养 基
12、 表 面 的 菌 丝 和 分生 孢 子 清 洗 干 净 ， 待 培 养 基 表 面 晾 干 后 罩 上 2 层 纱 布 ， 用 皮 筋 绑 好 ， 于 25 光 照 条 件 下 培 养 至 有 大 量分 生 孢 子 产 生 。 从 培 养 基 上 洗 下 分 生 孢 子 ， 离 心 （ 3000 转 /min） ， 弃 上 清 ， 沉 淀 下 的 分 生 孢 子 用 0.025%吐 温 20 水 溶 液 悬 浮 ， 血 球 计 数 板 计 数 ， 孢 子 悬 浮 液 浓 度 调 至 2 10 5个 孢 子 /mL， 可 用 混 合 菌 株 或 单 个菌 株 ， 供 接 种 使 用 。5.3.2
13、 接 种 方 法在 水 稻 始 穗 期 （ 稻 穗 抽 出 1/3左 右 ） 用 医 用 注 射 器 将 合 格 的 孢 子 悬 浮 液 注 入 水 稻 穗 苞 中 下 部 ， 接 种量 为 1mL/穗 ， 依 据 试 验 所 需 ， 每 个 处 理 接 种 100穗 以 上 。 接 种 后 ， 如 中 午 日 照 强 烈 ， 建 议 应 用 单 层 遮阴 网 进 行 遮 挡 ， 以 创 造 利 于 穗 颈 瘟 发 病 的 田 间 小 气 候 。5.4 病 情 调 查5.4.1 调 查 时 间水 稻 乳 熟 期 进 行 调 查 ， 调 查 2 次 ， 间 隔 7d-10d。 5.4.2 调 查
14、 方 法每 个 材 料 接 种 处 理 的 100穗 全 部 调 查 ， 记 录 每 穗 水 稻 穗 颈 瘟 的 病 级 ， 结 果 记 入 表 A.1。5.4.3 穗 颈 瘟 病 情 分 级 指 标穗 颈 瘟 病 情 按 以 下 标 准 分 级 ：0级 ： 整 穗 无 穗 颈 瘟 、 枝 梗 瘟 和 谷 粒 瘟 ；1级 ： 仅 有 谷 粒 瘟 ， 发 病 子 粒 比 例 2%；2级 ： 仅 有 谷 粒 瘟 ， 2% 发 病 子 粒 比 例 5%；3级 ： 有 谷 粒 瘟 和 枝 梗 瘟 ， 产 量 损 失 率 10%；4级 ： 有 谷 粒 瘟 和 枝 梗 瘟 ， 10% 产 量 损 失 率
15、20%；5级 ： 有 谷 粒 瘟 和 枝 梗 瘟 ， 20% 产 量 损 失 率 30%；6级 ： 有 谷 粒 瘟 和 枝 梗 瘟 ， 或 穗 颈 瘟 ， 30% 产 量 损 失 率 50%； 7级 ： 有 谷 粒 瘟 和 枝 梗 瘟 ， 或 穗 颈 瘟 ， 50% 产 量 损 失 率 60%；8级 ： 仅 有 穗 颈 瘟 ， 60% 产 量 损 失 率 70%；9级 ： 仅 有 穗 颈 瘟 ， 产 量 损 失 率 70%。6 评 价 标 准6.1 调 查 数 据 登 记 与 计 算将 水 稻 穗 颈 瘟 的 田 间 调 查 数 据 ， 鉴 定 圃 中 水 稻 农 事 操 作 及 相 关 情
16、况 进 行 电 子 数 据 登 记 。 计 算 每 个 水稻 材 料 年 度 间 的 最 高 穗 颈 瘟 病 情 指 数 ， 登 记 到 表 A.2 中 。 DB23/T 2735-2020 4 6.2 病 情 指 数 计 算 公 式以 穗 为 单 位 ， 当 严 重 度 用 分 级 指 标 表 示 时 ， 病 情 指 数 计 算 公 式 为 ：)/()(100 DMPDiPiR .（ 2）式 中 ：R 病 情 指 数 ；Pi 各 级 病 穗 数 ， 个 ；Di 各 级 代 表 值 ；P 调 查 总 穗 数 ， 个 ；DM 最 高 级 代 表 值 。6.3 抗 瘟 性 评 价 标 准 依 据
17、水 稻 材 料 的 病 情 指 数 评 价 其 抗 穗 颈 瘟 性 ， 评 价 标 准 见 表 A.3。7 技 术 档 案建 立 水 稻 穗 颈 瘟 人 工 接 种 鉴 定 技 术 档 案 ， 内 容 包 括 环 境 条 件 、 技 术 流 程 、 评 价 标 准 及 试 验 数 据 等 。 DB23/T 2735-2020 5 附 录 A资 料 性 附 录水 稻 穗 颈 瘟 田 间 调 查A.1 水 稻 穗 颈 瘟 田 间 调 查 见 表 A.1 、 A.2 和 A.3。表 A.1 水 稻 穗 颈 瘟 田 间 调 查 记 录 表调 查 时 间 ： 水 稻 品 种 名 称 ： 生 育 期 ：穗 数 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1234567- 表 A.2 水 稻 品 种 病 情 指 数 数 据 表 水 稻 品 种 编 号 水 稻 品 种 名 称 穗 颈 瘟 病 情 指 数表 A.3 水 稻 穗 颈 瘟 抗 性 评 价 标 准抗 性 评 价 评 价 标 准抗 病 Resistant（ R） 病 情 指 数 5中 抗 Moderately resistant（ MR） 5 病 情 指 数 15 中 感 Moderately Susceptible（ MS） 15 病 情 指 数 30感 病 Susceptible（ S） 病 情 指 数 30_
