1、ICS 13.060.01Z 16 DB2 3黑 龙 江 省 地 方 标 准DB23/T 2750 2020水 质 生 物 毒 性 的 测 定 发 光 细 菌快 速 测 定 法 2020-1 2 -1 6 发 布 2021-0 1 -1 5 实 施黑 龙 江 省 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB23/T 27502020 I 目 次前 言 .II引 言 .III1 范 围 .12 规 范 性 引 用 文 件 .13 方 法 原 理 .14 试 剂 和 材 料 .15 仪 器 设 备 .26 测 定 .2 7 结 果 计 算 与 表 示 .38 方 法 的 精 密 度 .3附 录 A（
2、资 料 性 附 录 ） 结 果 判 定 参 考 内 容 .4 DB23/T 27502020 II 前 言本 文 件 按 照 GB/T1.1-2020 标 准 化 工 作 导 则 第 1部 分 ： 标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定 起草 。 请 注 意 本 文 件 的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利 。 本 文 件 的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 专 利 的 责 任 。本 文 件 由 黑 龙 江 省 生 态 环 境 厅 提 出 并 归 口 。本 文 件 参 与 起 草 单 位 ： 黑 龙 江 省 生 态 环 境 监 测 中 心 。本 文 件 主 要
3、 起 草 人 ： 王 鹏 杰 、 曹 胜 、 邢 延 峰 、 孟 庆 庆 、 李 博 、 胡 丽 娜 、 张 蕊 、 杨 宏 坤 、 姜 景 阳 、 关吉 鑫 、 李 经 纬 、 王 国 梁 、 李 海 智 、 芦 旭 峰 、 苏 晓 慧 、 于 宗 灵 、 柏 广 宇 、 李 慧 。 DB23/T 27502020 III 引 言为 贯 彻 中 华 人 民 共 和 国 环 境 保 护 法 和 中 华 人 民 共 和 国 水 污 染 防 治 法 等 法 律 法 规 ， 保 护 和 改善 生 态 环 境 ， 保 障 人 体 健 康 ， 制 定 本 文 件 。 DB23/T 27502020 1
4、水 质 生 物 毒 性 的 测 定 发 光 细 菌 快 速 测 定 法1 范 围本 文 件 规 定 了 水 质 生 物 毒 性 的 测 定 发 光 细 菌 快 速 测 定 法 的 方 法 原 理 、 试 剂 和 材 料 、 仪 器 设 备 、 测定 、 结 果 计 算 和 表 示 及 方 法 的 精 密 度 。本 文 件 适 用 于 工 业 废 水 ， 纳 污 水 体 及 实 验 室 条 件 下 可 溶 性 化 学 物 质 的 水 质 急 性 毒 性 监 测 。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不
5、可 少 的 条 款 。 其 中 ， 注 日 期 的 引 用 文 件 ，仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件 ； 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。GB/T15441-1995 水 质 急 性 毒 性 的 测 定 发 光 细 菌 法3 方 法 原 理水 样 在 一 定 的 时 间 和 条 件 下 与 发 光 细 菌 接 触 后 ， 发 光 细 菌 的 发 光 强 度 变 化 与 水 样 中 毒 性 组 分 总 浓 度呈 负 相 关 关 系 ， 通 过 生 物 发 光 光 度 计 测
6、定 水 样 与 发 光 细 菌 接 触 一 定 时 间 后 的 发 光 抑 制 率 来 表 征 水 样 的 急性 毒 性 水 平 。4 试 剂 和 材 料4.1 所 有 的 试 剂 除 另 有 说 明 外 ， 均 应 为 符 合 国 家 标 准 的 分 析 纯 试 剂 ， 蒸 馏 水 或 同 等 纯 度 的 水 。 4.2 超 纯 水 ， 常 温 保 存 。4.3 氯 化 汞 母 液 （ 2000mg/L） 。4.5 复 苏 稀 释 液 （ 0.85%的 氯 化 钠 溶 液 ） 。4.6 渗 透 压 液 （ 17%的 氯 化 钠 溶 液 ） 。4.7 青 海 弧 菌 Q67。注 ： 菌 株 冻
7、 干 粉 封 装 于 透 明 小 玻 璃 瓶 中 ， 于 -18 至 -20 下 储 存 。 使 用 前 ， 添 加 复 苏 液 使 发 光 细 菌 恢 复 活 性 后 用 于毒 性 测 试 。 DB23/T 27502020 2 5 仪 器 设 备生 物 发 光 光 度 计 技 术 规 格 ： 可 探 测 光 谱 范 围 ， 320nm 1000nm； 探 测 结 果 范 围 ， 0 65535RLU ；最 快 检 测 时 间 ， 5min； 相 对 发 光 强 度 ， 0-200%； 可 进 行 ATP测 试 ； 测 试 试 管 ， 规 格 为 5ml的 反 应 试 管 和10ml的 测
8、试 试 管 。6 测 定6.1 测 定 条 件6.1.1 室 温室 温 20-25 ， 同 一 批 样 品 在 测 试 过 程 中 要 求 温 度 波 动 不 超 过 1 。 且 所 有 测 试 器 皿 及 试 剂 ， 溶 液测 前 1h均 置 于 控 温 的 测 试 室 内 。 6.1.2 pH若 需 测 定 包 括 pH影 响 在 内 的 急 性 毒 性 ， 不 应 调 节 水 样 pH。若 需 测 定 排 除 pH影 响 在 内 的 急 性 毒 性 ， 需 将 水 样 和 复 苏 液 （ 氯 化 钠 0.85g/100ml） pH测 前 调 至 下 值 ：主 要 含 铜 的 水 样 为
9、4.5， 主 要 含 其 他 金 属 水 样 为 5.4， 主 要 含 有 机 化 合 物 水 样 为 7.0。6.2 测 定 步 骤6.2.1 试 管 的 排 列与 塑 料 或 铁 制 试 管 架 上 按 以 下 要 求 排 列 试 管 架 ：第 一 排 ， 依 次 为 反 应 管 01-标 准 品 、 反 应 管 02-阴 性 /阳 性 质 控 和 反 应 管 03-水 样 ；第 二 排 ， 依 次 为 测 试 管 01-标 准 品 、 测 试 管 02-阴 性 /阳 性 质 控 和 测 试 管 03-水 样 。6.2.2 青 海 弧 菌 Q67冻 干 粉 剂 复 苏 从 冷 冻 环 境
10、（ -18 ） 中 取 出 青 海 弧 菌 Q67冻 干 粉 （ 含 量 约 为 0.0015-0.0018g） 小 瓶 ， 在 常 温 环 境 （ 25左 右 ） 下 放 置 15min后 ， 启 开 并 轻 敲 小 瓶 ， 确 保 冻 干 细 菌 充 分 落 在 小 瓶 底 部 。 移 取 0.5mL0.85%的 复 苏液 或 3%的 复 苏 液 至 菌 种 中 ， 摇 匀 ， 放 置 10min后 可 以 使 用 。6.2.3 仪 器 的 预 热 和 调 零打 开 生 物 发 光 光 度 计 电 源 ， 预 热 15min， 调 零 ， 备 用 。6.2.4 测 试 的 步 骤按 下 列
11、 步 骤 进 行 测 试 ：a） 分 别 往 三 支 反 应 试 管 中 加 入 2ml的 标 准 品 （ 稀 释 液 ） ， 2ml（ 1:19-稀 释 液 ： 样 品 ） 的 阴 性 质 控 及2ml（ 1:19-稀 释 液 ： 样 品 ） 的 被 测 水 样 ；b） 待 冻 干 粉 复 苏 时 间 到 后 ， 分 别 往 反 应 管 中 加 入 50l冻 干 粉 复 苏 试 剂 （ 注 意 混 匀 ） ；c） 混 匀 后 ， 等 待 15min反 应 时 间 ； d） 分 别 从 反 应 试 管 中 移 取 350l混 合 液 至 测 试 管 中 （ 注 意 尽 量 不 要 溅 到 瓶
12、壁 上 ） ；e） 将 测 试 试 管 按 顺 序 分 别 放 入 到 主 机 中 ， 最 终 结 果 以 RLI%发 光 强 度 表 示 。 DB23/T 27502020 3 7 结 果 计 算 与 表 示7.1 计 算 结 果计 算 结 果 以 发 光 强 度 来 表 示 。相 对 发 光 强 度 的 表 达 式 ： %100(%) 11 ）标 准 品 发 光 强 度 （ ）样 品 发 光 强 度 （相 对 发 光 强 度 ssRLI .（ 1）7.2 结 果 表 示用 氯 化 汞 表 达 样 品 毒 性 ， 见 表 1。 表 1 氯 化 汞 表 达 样 品 毒 性 相 对 发 光 强
13、度 （ RLI） 抑 制 率 （ IR%） 等 当 的 HgCl2溶 液 浓 度 CHg（ mg/L） 毒 性 级 别90% RLI110% -10 IR10 CHg 0.03 无 毒80%RLI 90% 10IR 20 0.03CHg 0.05 低 毒50%RLI 80% 20IR 50 0.05CHg 0.09 中 毒30%RLI 50% 50IR 70 0.09CHg 0.12 重 毒0%RLI 30% 70IR 100 0.12CHg 0.16 高 毒RLI=0 IR=100 C Hg0.16 剧 毒7.3 原 始 记 录 表原 始 记 录 表 ， 见 表 2。 表 2 原 始 记 录
14、 表分 析 号 加 菌 液 时 间 （ s）（ 反 应 开 始 ， 读 到 秒 ） 测 定 时 间 （ s）（ 反 应 分 钟 ， 读 到 秒 ） 发 光 量 相 对 发 光 强 度 备 注 8 方 法 的 精 密 度样 品 3次 重 复 测 定 结 果 的 相 对 偏 差 应 不 大 于 15%。 DB23/T 27502020 4 附 录 A（ 资 料 性 附 录 ）结 果 判 定 参 考 内 容A.1 干 扰 的 影 响水 样 的 色 度 会 对 测 量 结 果 产 生 影 响 。A.2 水 样 预 处 理饮 用 水 的 测 试 ， 需 要 考 虑 管 网 中 消 毒 剂 的 影 响 ， 建 议 水 样 静 止 15min以 上 或 者 煮 沸 放 置 过 夜 即 可 。_
