1、ICS 67 X 04 DB13 河北省 地方标准 DB 13/T 5189.9 2020 天然植物提取物中危害成分检测 第 9 部分：辣椒提取物中叔丁基对苯二酚的 测定 2020 - 06 - 28 发布 2020 - 07 - 28 实施 河北省市场监督管理局 发布 DB13/T 5189.9 2020 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 DB13/T 5189天然植物提取物中危害成分的测定共分 12个部分： 第 1 部分： 亚硝酸盐的测定； 第 2 部分： 二氧化硫的测定； 第 3 部分： 正己烷、丙酮、乙酸乙酯、甲醇和乙醇 5 种有机溶剂残留的测定； 第
2、 4 部分：辣椒提取物中砷、铅、镉、铬、汞 的测定； 第 5 部分：万寿菊提取物中对氧基苯胺的测定； 第 6 部分：万寿菊提取物中乙氧基喹啉的测定； 第 7 部分：天然番茄红中苯并 芘的测定； 第 8 部分：辣椒提取物中苏丹红的测定； 第 9 部分：辣椒提取物中叔丁基对苯二酚的测定； 第 10 部分：辣椒红中赭曲霉毒素 A 的测定； 第 11 部分：叶黄素中苯的测定； 第 12 部分：甜菊糖苷中邻苯二甲酸酯的测定。 本部分为 DB13/T 5189的 第 9部分。 本标准由河北省市场监督管理局提出。 本标准 起草单位：河北省食品检验研究院、晨光生物科技集团股份有限公司、石家庄海关技术中 心、
3、清河县食品药品检验检测中心。 本标准主要起草人：王红、张凤霞、焦良、李挥、田俊生、卜丽双、艾连峰。 DB13/T 5189.9 2020 1 天然植物提取物中危害成分检测 第 9 部分：辣椒提取物中叔丁基对苯二酚的测定 1 范围 本 部分 规定了 辣椒提取物 中 叔 丁基对苯二酚的测定方法。 本 部分 适用于 辣椒提取物 中 叔 丁基对苯二酚的测定。 2 原理 辣椒提取物中叔 丁基对苯二酚经环己烷 -乙酸乙酯 溶解后 ， 使用凝胶渗透色谱（ GPC）净化， 采用 反相 C18（ 4.6mm250mm， 5m）色谱柱，以乙腈 -1.0%乙酸水 （ 40 + 60）为流动相，等度洗脱， 荧光 检
4、测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。 3 试剂或材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的 一 级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇（ CH3OH）： 色谱纯。 3.1.2 乙腈（ C2H3N）： 色谱纯 。 3.1.3 冰醋酸（ CH3COOH）。 3.1.4 环己烷（ C6H12） 3.1.5 乙酸乙酯（ C4H8O2） 3.2 试剂配制 环己烷 -乙酸乙酯（ 1 + 1， V/V）：量取 500mL环己烷与 500mL乙酸乙酯混合均匀。 3.3 标准品 叔丁基对苯二酚（ Tert butylhydroquinone， C10H14O2， C
5、AS: 1948-33-0）标准物质，纯度 99 %， 或采用具有标准物质证书的 叔丁基对苯二酚 标准溶液。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 叔 丁基对苯二酚标准储备溶液（ 1000 mg/L）：准确称取 叔丁基 对苯二酚标准物质 100.00 mg， 用甲醇定容至 100 mL，摇匀， 0 4 避光保存，有效期 6 个月。 DB13/T 5189.9 2020 2 3.4.2 叔 丁基对苯二酚标准使用溶液（ 10 mg/L）：准确量取 1000 mg/L 叔丁基 对苯二酚标准储备液 1 mL，于 100 mL 容量瓶中，用甲醇溶解，定容于 100 mL， 0 4 避光保存，有效期 6 个月
6、。 3.4.3 叔丁基 对苯二酚标准系列工作溶液：分别吸取 叔丁基 对苯二酚标准使用溶液 0mL、 0.1mL、 0.5mL、 1.0mL、 2.0mL、 5.0mL、 10.0mL，用甲醇定容至 10mL，配制成质量浓度分别为 0mg/L、 0.1mg/L、 0.5mg/L、 1.0mg/L、 2.00mg/L、 5.00mg/L、 10.0mg/L 的混合标 准使用液，现用现配。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪：配有荧光检测器。 4.2 凝胶渗透色谱净化系统（ GPC）。 4.3 分析天平：感量 0.1mg 和 0.01 mg。 4.4 涡旋混匀器。 4.5 超声波清洗器。 4.6
7、 离心机：转速 3000r/min 4.7 旋转蒸发仪。 5 试验步骤 5.1 提取 准确称取样品 1g（精确至 0.0001 g）于 10 mL容量瓶 中，加入环己烷 -乙酸乙酯（ 1： 1， V/V）混合 溶液 溶解，定容 ， 摇匀， 上清液过 0.45 m有机滤膜后作待净化液。 5.2 净化 取待净化液于 GPC样品管中， 进行 GPC净化， 进样量 5 mL， 收集洗脱液，于 40 下旋转蒸发至干。 残渣用 1.0 mL甲醇 超声溶解，过 0.45 m有机滤膜，供液相色谱检测。 凝胶渗透色谱净化参考条件： a) 凝胶渗透色谱净化系统； b) 凝胶柱规格 400 mm 25 mm（内径）
8、； c) 色谱柱填料 Bio-Beads S-X3（ 38-75 m）； d) 流动相：环己烷 -乙酸乙酯（ 1 + 1， V/V）； e) 流速： 4.7 mL / min； f) 收集时间： 25-35 min。 5.3 测定 5.3.1 色谱参考条件 a) 色谱柱： C18，粒径 5m， 250 mm4.6 mm（内径），或 性能相当者 ； b) 流动相：乙腈 -1.0%乙酸水 （ 40 + 60） 等度洗脱； c) 柱温： 40 C； DB13/T 5189.9 2020 3 d) 激发波长： 293nm；发射波长： 332 nm； e) 流速： 1.0 mL / min； f) 进样
9、量： 20 L。 5.3.2 测定 根据样液中 叔丁基 对苯二酚含量情况，选定与样液浓度相近的标准使用溶液，标准使 用溶液和样 液中的 叔丁基 对苯二酚响应值均应在仪器检测的线性范围内，如果样液中 叔丁基 对苯二酚含量超出检 测的线性范围，则稀释 至适当倍数后 后再进样。以保留时间定性，外标法定量。 叔丁基 对苯二酚 液相 色谱图参见附录 A。 按上述条件，同时做空白试验。 6 试验结果 试样中 叔丁基 对苯二酚含量按式（ 1）计算 。 fm VcX 1000 1000c 0）（ （ 1） 式中： X 试样中 叔丁基 对苯二酚的含量，单位为 毫 克每千克， mg/kg； c 试 样 溶 液中
10、叔丁基 对苯 二酚的 浓度， mg/L； c0 空白试 样 溶 液中 叔丁基 对苯二酚的 浓度， mg/L； V 样液最终定容体积，单位为毫升， mL； f 稀释倍数； m 试样 溶液代表试样的 质量， g。 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果 保留三位有效数字。 7 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。 8 检出限和定量限 检出限为 0.02 mg/kg，定量限为 0.06mg/kg。 DB13/T 5189.9 2020 4 A A 附 录 A （资料性附录） 叔丁基对苯二酚标准液色谱图 叔丁基对苯二酚标准液相色谱图，如图 A.1所示。 图 A.1 0.1mg/L叔丁基对苯二酚标准溶液液相色谱图
