1、ICS 65.020.30 CCS B 44 DB11 北京市地方标准 DB11/ T 18062020 代替DB11/T 828.22011，DB11/T 1053.22013，DB11/T 1460.12017，DB11/T 1460.22017，DB11/T 1460.32017，DB 11/T 1460.42018，DB 11/T 1460.52018 实验动物 寄生虫检测 Laboratory animalParasitological testing 2020 - 12 - 24发布 2021 - 04 - 01实施 北京市市场监督管理局 发布 DB11/T 18062020 I
2、目 次 前言. II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 等级分类 . 2 5 检测要求 . 2 6 检测程序 . 7 7 检测方法 . 8 8 检测规则 . 11 9 结果判定 . 12 10 结论与报告 . 12 附录A（规范性） 实验鸡的组织滴虫检测 . 13 附录B（规范性） 实验鹅的毛滴虫检测 . 14 附录C（规范性） 实验鸽的疟原虫检测 . 15 附录D（规范性） 实验鱼的寄生虫检测 . 16 参考文献 . 17 DB11/T 18062020 II 前 言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规
3、则的规定 起草。 本文件代替DB11/T 828.22011实验用小型猪 第2部分:寄生虫学等级及监测、DB11/T 1053.2 2013实验用鱼 第2部分:寄生虫学等级及监测、DB11/T 1460.12017实验动物 寄生虫学等 级及监测 第1部分:实验用猪、DB11/T 1460.22017实验动物 寄生虫学等级及监测 第2部分: 实验用牛、DB11/T 1460.32017实验动物 寄生虫学等级及监测 第3部分:实验用羊、DB 11/T 1460.42018实验动物 寄生虫检测与评价 第4部分:实验用狨猴、DB 11/T 1460.52018实 验动物 寄生虫检测与评价 第5部分:实
4、验用长爪沙鼠，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变 化如下： a) 增加了“实验雪貂、实验猫、实验鸡、实验鸭、实验鹅和实验鸽”寄生虫检测相关内容（见 6.2.5、6.2.6、6.2.7、6.2.8）。 本文件由北京市科学技术委员会提出并归口。 本文件由北京市科学技术委员会组织实施。 本文件起草单位：中国农业大学、中国食品药品检定研究院、国家卫生健康委科学技术研究所、 中国科学院水生生物研究所、中国动物疫病预防控制中心、首都医科大学、浙江省医学科学院、中国 医学科学院医学实验动物研究所、北京康蓝生物技术有限公司、北京市实验动物管理办公室、北京实 验动物行业协会、北京市标准化研究院、中国农业科学院
5、哈尔滨兽医研究所、北京华阜康生物科技股 份有限公司、吉林大学。 本文件主要起草人：刘贤勇、李冠民、贺争鸣、田克恭、巩薇、陈洪岩、姜洪杰、索勋、李根平、 王锡乐、刘文菊、齐静、刘云波、魏强、向志光、刘先菊、黄澜、李长龙、付瑞、岳秉飞、萨晓婴、 王吉、杜小燕、陈振文、肖冲、冯育芳、袁宝、胡进平、任文陟、樊子风、宫鹏涛、杨利峰、钟景川、 樊晨茹、向碧琪、毕菲菲、王桂堂、李文祥、崔宗斌、孙德明等。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： 首次发布分别为DB11/T 828.22011、DB11/T 1053.22013、DB11/T 1460.12017、DB11/T 1460.22017、DB1
6、1/T 1460.32017、DB 11/T 1460.42018、DB 11/T 1460.52018； 本次为第一次修订。 DB11/T 18062020 1 实验动物 寄生虫检测 1 范围 本文件规定了实验动物的寄生虫学等级分类、检测要求、检测程序、检测方法、检测规则、结果 判定、结论与报告。 本文件适用于实验小型猪、实验猪、实验牛、实验羊、实验狨猴、实验长爪沙鼠、实验雪貂、实 验猫、实验鸡、实验鸭、实验鹅、实验鸽、实验鱼（斑马鱼和剑尾鱼）的寄生虫检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于
7、本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 18448.1 实验动物 体外寄生虫检测方法 GB/T 18448.2 实验动物 弓形虫检测方法 GB/T 18448.3 实验动物 兔脑原虫检测方法 GB/T 18448.4 实验动物 卡氏肺孢子虫检测方法 GB/T 18448.6 实验动物 蠕虫检测方法 GB/T 18448.7 实验动物 疟原虫检测方法 GB/T 18448.9 实验动物 肠道溶组织内阿米巴检测方法 GB/T 18448.10 实验动物 肠道鞭毛虫和纤毛虫检测方法 GB/T 18642 猪旋毛虫病诊断技术 GB/T 18644 猪囊尾蚴
8、病诊断技术 GB/T 18647 动物球虫病诊断技术 GB/T 23239 伊氏锥虫病诊断技术 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 NY/T 1466 动物棘球蚴病诊断技术 NY/T 1949 隐孢子虫卵囊检测技术 改良抗酸染色法 SN/T 1225 住白细胞虫病诊断方法 显微镜检查法 SN/T 2975 鱼华支睾吸虫囊蚴鉴定方法 SN/T 3485 牛焦虫病检疫技术规范 SN/T 3499 新孢子虫病检疫技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 实验动物 laboratory animal 经人工饲育，对其携带的微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或
9、者来源清楚，用于科学研究、 教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。 DB11/T 18062020 2 来源: GB 149252010, 3.1 3.2 普通级实验动物 conventional (CV) laboratory animal 不携带所规定的人兽共患病病原、动物烈性传染病病原和对科学实验有重大干扰的病原的实验动 物。 3.2.1 无特定抗原抗体普通级实验动物 specific antigen 5- CTCGTCGGCATAGTTTAAGGTAGG-3）进行PCR检测，扩增产物进行凝胶电泳并测序分析。 A.3 检测结果 若有火鸡组织滴虫感染，典型病理变化为肝脏肿大，呈深紫褐色，
10、表面有大小不一的黄褐色坏死 灶，坏死灶中央稍有下陷，有的坏死灶周围有出血带；盲肠外观明显肿大，触之坚硬，呈香肠状，粗 细不均，肠腔内有干酪样物充塞，可怀疑为阳性，需通过下列任意一种方法验证： 若有火鸡组织滴虫感染，盲肠粘膜刮取物或肝脏抹片在显微镜油镜下可见单个或成簇分布的 虫体，大小为6 m20 m。或组织切片中发现虫体，呈不规则圆形或椭圆形，胞质中有囊泡状核。 虫体呈圆形，淡玫瑰色，有细胞质和细胞核，判为阳性。反之则为阴性。 若有火鸡组织滴虫感染，PCR扩增获得的片段大小为106 bp，所测得的DNA序列应为火鸡组织 滴虫的18S rRNA基因序列，判为阳性。反之则为阴性。 DB11/T 1
11、8062020 14 B 附 录 B （规范性） 实验鹅的毛滴虫检测 B.1 仪器设备和材料 生物显微镜，生理盐水，载玻片，盖玻片。 B.2 检测步骤 用生理盐水浸湿的棉签刮取实验鹅口腔或嗉囔粘液，置于载玻片上制成压片，在400倍光学显微镜 暗视野观察。 B.3 检测结果 在镜下看到有呈圆形或梨状可活动的虫体，前端有4根比虫体长23倍的鞭毛，且有活动性，结 果为阳性；反之为阴性。 DB11/T 18062020 15 B C 附 录 C （规范性） 实验鸽的疟原虫检测 C.1 仪器设备和材料 生物显微镜，载玻片，盖玻片，甲醇，姬氏染液。 C.2 检测步骤 C.2.1 厚、薄血膜的涂制 取4 L
12、5 L鸽血，使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转24圈，涂 成直径0.8 cm1 cm大小圆形厚血膜。在同一玻片的另一区域，取约1 L1.5 L的血量，使 血滴与平置的载玻片接触，并形成2535夹角，待血液向两侧扩展约2 cm2.5 cm宽时，均 匀而迅速地从右向左推成舌状薄血膜。 C.2.2 血膜涂片的染色和观察 用甲醇固定血膜，然后用姬氏染液染色30 min,随后水洗2 min3 min。干燥后的染色涂片在 显微镜下观察。 C.3 检测结果 在镜下看到占据红细胞的细胞核以外空间的虫体，后者依据其发育阶段不同呈现不同的大小和形 态，结果为阳性；反之为阴性。 D DB11/T
13、18062020 16 C E 附 录 D （规范性） 实验鱼的寄生虫检测 D.1 体表寄生虫的检查 D.1.1 肉眼检查 D.1.1.1 将待检鱼麻醉后放在解剖盘上，肉眼检查鳞片和鳍条上有无白色包囊和寄生虫存在。 D.1.1.2 体表检查之后，将鳃盖掀起，注意鳃的色泽，粘液的多少，有无白点，鳃有无肿大，鳃 丝末端是否肿大发白及是否有异物存在等变化。 D.1.2 显微镜检查 D.1.3 鳞片和鳍条：采用水浸片法，即用解剖刀或镊子刮取鳞片和鳍条上的粘液，放于载玻片上， 加一滴清水或生理盐水，用镊子将组织分散，加上盖玻片，在体视显微镜下观察。 D.1.4 鳃：先用剪刀将左右两边的鳃完整地取出，放在
14、培养皿里。在每边鳃的第一片鳃片接近两 端的位置用小剪刀取一小块鳃丝，放在载玻片上，加上少量清水，盖上盖玻片，在显微镜下检查。 然后将鳃小片逐片剪开，在体视显微镜下用两根解剖针，把鳃丝逐条分开，仔细检查，或用镊子 将每片鳃片的鳃上所有内含物完全刮下，放在培养皿里，用清水稀释、搅匀后，在解剖镜下进行 检查。 D.1.5 检查单殖吸虫时，可用清水洗涤数次，倒弃上清液后在解剖镜下检查。 D.2 体内寄生虫的检查 D.2.1 根据部位和组织采用不同的方法检查体内寄生虫。 D.2.2 眼球:采用水浸法，即将鱼体的眼球取下，放在盛有生理盐水的培养皿中，待寄生虫游离 出来后，在体视显微镜下观察。 D.2.3
15、体腔、脏器、生殖腺和鳔:首先采用肉眼观察，看组织表面有没有肉眼可见的白色包囊和 寄生虫；然后将体腔用生理盐水冲洗，并盛在培养皿中，其他组织用生理盐水浸泡在培养皿中， 待寄生虫游离出来后，在体视显微镜下观察。 D.2.4 肠道:先用肉眼检查，看肠外壁有无白点，这些白点通常是微孢子虫或粘孢子虫的孢囊。 肠道内的寄生虫检测采用压片法，先把肠外壁上的脂肪组织尽量除干净，否则脂肪会混进肠的内 含物，妨碍观察。除净脂肪组织后，将肠管剪开，如果内含物不多，用解剖刀将内含物和肠壁上 的粘液都刮下来，用两片玻片压成薄片，在解剖镜下直接检查寄生蠕虫；如果肠内含物较多，则 应将肠的内含物先取下来，放在培养皿里，用生理盐水冲洗搅匀，在显微镜下检查寄生虫。 D.3 检测结果 观察发现有寄生虫者，结果为阳性；反之为阴性。 DB11/T 18062020 17 参 考 文 献 1 GB 149252010 实验动物 环境及设施 _
